专利名称：封入信号产生物质的芯－壳型粒子及其制造方法
技术领域：
本发明涉及封入信号产生物质的芯-壳型粒子及其制造方法。本发明的封入信号产生物质的芯-壳型粒子，由于在表层上以刷(ブラシ)状担载有带反应性官能基的水溶性高分子化合物[比如聚乙二醇(PEG)]的粒子的内部封入了可以检出的物质，在最外壳上具有能够和其他物质结合的活性残基，所以能够用做简单而且高灵敏度的标识物质。
背景技术：
为了使微量的物质视觉化，或者为了将其定量，开发了种种的标识物。特别是需要高灵敏度的领域，放射性同位素是代表性的标识物，作为代表性的例子，使用了氚或放射性碘等，由胶片进行感光，或者由闪烁计数器测定放射能的形式予以检出。
作为不受处理放射性物质限制影响的方法，接着开发了酶标识法。开发了过氧化酶、碱性磷酸酯酶、葡糖氧化酶或β-D-半乳糖酶等对抗原或抗体的标识方法，确立了由组织切片的染色法进行观察，适用于酶免疫测定法的定量方法。
另外，作为组织切片的染色法，用荧光物质(比如荧光素或罗丹明)标识抗体，在反应以后用荧光显微镜观察的方法是已知的。由于此方法不使用放射性物质，在使用不受限制、没有象酶那样的和基质加成反应的步骤等方面，这都是方便之处，但作为标识其绝对的灵敏度不足是个缺点。
这种荧光物质标识法之一的发展型是时间分解荧光测定术。对以铕螯合物为代表的荧光消光时间长的荧光物质送以脉冲激励光，在起因于直接的激励光或周边物质的短荧光消光的一定时间后测定荧光，通过测定铕的特异性荧光，其测量的精度和灵敏度都得以提高的方法。
为了进一步提高灵敏度，试图将此铕螯合物封闭在聚苯乙烯粒子中，通过增加每一个粒子中荧光物质的质量来提高灵敏度。在此方法中，每一个粒子的荧光量确实增加，但由于聚合物的疏水性，粒子表面也为疏水性，在生物学反应中使用时，具有与在环境中存在的许多疏水性物质发生粘连的不利点，必须在弄清楚以后才能使用也是个缺点。
另外，也是为了提高灵敏度，作为追求操作简单的手段，还试图把色素封闭在聚苯乙烯粒子中，在聚苯乙烯粒子表面涂布抗原或者抗体作为试剂，通过视觉检测由抗原抗体反应固定化的聚苯乙烯粒子。
作为公知的技术已知的，将色素或荧光物质封闭在聚苯乙烯粒子中作为标识物质的方法，操作简便，或者能够得到一定程度的灵敏度，在此意义上是优异的，但是，由于表面是疏水性聚苯乙烯这一特点，所以使用了(1)在结合了想涂布的抗原或抗体等功能性分子后，在非结合表面上涂布蛋白质或各种生体物质的类似物以覆盖隐藏聚苯乙烯的疏水性的方法，或者，(2)反应时在液体中添加表面活性剂防止聚苯乙烯粒子相互影响的方法等办法，但由这些非特异性反应进行判断有时还是会发生错误。
如此，与使用聚苯乙烯粒子作为载体，用封闭剂使此粒子稳定化的方法，或者，在反应时的缓冲液中加入添加剂抑制非特异性反应的方法等相对应，在灵敏度和特异性这些方面还是有问题。

发明内容
本发明的课题就是提供封入了信号产生物质的粒子及其制造方法，该粒子是能够作为标识物质使用的封入信号产生物质的粒子，能够不受比如环境物质或生体成分等非特异性反应的影响，且灵敏度高、而且可简便配制。
由按照本发明的封入信号产生物质的芯-壳型粒子就能够解决上述课题，该粒子由(1)基本上由水不溶性高分子化合物组成的芯部分和(2)基本上由具有反应性官能基的水溶性高分子化合物组成且以刷状覆盖于前述芯部分表面的壳部分构成，且上述芯部分和上述壳部分，作为整体，是由水不溶性高分子和水溶性高分子的嵌段聚合物形成的，其特征在于，在上述芯部分中封入信号产生物质。
本发明还涉及封入上述信号产生物质的芯-壳型粒子的配制方法，其特征在于，通过使(a)芯-壳型粒子和(b)信号产生物质浸渍在含有能够膨润上述水不溶性高分子化合物的有机溶剂的溶液中，从而将上述信号产生物质封入芯部分，该芯-壳型粒子由(1)基本上由水不溶性高分子化合物组成的芯部分和(2)基本上由具有反应性官能基的水溶性高分子化合物组成并以刷状覆盖在上述芯部分表面上的壳部分构成，而且上述芯部分和上述壳部分，作为整体，是由水不溶性高分子和水溶性高分子的嵌段聚合物形成的。
附图的简单说明

图1是在实施例1(1)中配制的嵌段聚合物的1H-NMR波谱；图2是在实施例1(2)中得到的在醛末端覆盖PEG粒子的扫描电子显微镜(SEM)照片；图3是在实施例1(2)中得到的比较用在醛末端覆盖PEG粒子的SEM照片；图4是显示用封入铕螯合物的粒子，通过免疫试验法的CRP测定结果的图。
实施本发明的最佳形态以下详细说明本发明。
由(1)以水不溶性高分子化合物为主要成分的芯部分、(2)以具有反应性官能基的水溶性高分子化合物为主要成分，而且以刷状覆盖在上述芯部分表面的壳部分组成的芯-壳型粒子，即在以水不溶性高分子化合物为主要成分的芯部分的表面上，具有在表层上存在着反应性官能基的水溶性高分子化合物刷的芯-壳型粒子，其本身是公知的。
在本发明中，能够在形成芯部分时使用的水不溶性高分子化合物是在水中不溶解的高分子化合物，而且在形成芯部分时，只要是其内部可以封入信号产生物质的高分子化合物，就没有其他特别的限制。作为上述水不溶性高分子化合物，可以举出比如疏水性聚合物[比如，聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚(丙烯酸-2-羟基乙酯)、聚(N-异丙基丙烯酰胺)、聚异戊二烯、聚氯乙烯、聚乳酸、聚己内酯、或者聚己内酰胺等]、水溶性聚合物(比如聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺、聚烯丙基胺或聚丙烯酸等)的交联凝胶或水不溶性天然高分子化合物(例如动物胶或多糖等)等。
在本发明中，上述的芯部分可以基本上只由上述水不溶性高分子化合物中的一种，或者基本上由两种以上的上述水不溶性高分子化合物组合而形成。
上述芯部分的形状也没有特别的限制，一般是大致的球状或大致椭球状。上述芯部分的尺寸也没有特定的限制，可根据用途做适当的变化，但大致球状的芯部分，其直径一般为5～500nm左右。
在本发明中，可用来形成壳部分的水溶性高分子化合物是直链状的高分子化合物，在其一端的末端(结合末端)能够于芯部分的表面结合，同时另一端的末端(自由末端)具有反应性官能基或者能够导入反应性官能基，而且只要能够以刷状配置在上述芯部分的表面上就没有特定的限制。在本说明书中，所谓“以刷状覆盖在芯部分表面上的壳部分”意味着，其壳部分由许多直链状水溶性高分子化合物组成，它们的直链状水溶性高分子化合物的一端的结合末端各自与芯部分的表面结合，而另一端的自由末端，在至少使水溶性高分子化合物和导入物(比如抗原或抗体)反应的反应液中，以丝状或棒状从表面突出到其反应液系统中。此外，由于在这些刷状水溶性高分子化合物链的自由末端存在有可与各自导入物[例如、生理活性物质(例如、抗体、酶或DNA)]结合的反应性官能基，所以壳部分的最外壳被许多反应性官能基覆盖。
作为上述水溶性高分子化合物，可以举出比如聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚氨基酸、聚丙烯酸、聚丙烯酸二甲基氨基乙酯或聚烯丙基胺等，优选PEG或聚乙烯醇。
在本发明中，对于构成壳部分的水溶性高分子化合物链，各个高分子化合物链可以基本上只由一种上述水溶性高分子化合物形成，或者各个高分子化合物链基本上由两种以上的彼此不同的上述水不溶性高分子化合物组合构成。
构成上述壳部分的水溶性高分子化合物链优选基本上完全覆盖上述芯部分的整个表面。而构成上述壳部分的各个水溶性高分子化合物链各具有基本上相同的长度，优选由各个水溶性高分子化合物链的自由末端形成大致球状或大致椭球状的壳部分外壳表面。
上述芯部分的直径和上述壳部分厚度之比可随用途不同而适当变化。比如芯部分的直径可以为5～500nm，而壳部分的厚度可以为比如5～500nm。
作为在上述水溶性高分子化合物链的自由末端上存在的反应性官能基，可以在上述水溶性高分子化合物一端的末端(结合末端)与芯部分表面结合以前就存在于另一端的末端(自由末端)，或者可以在上述水溶性高分子化合物一端的末端(结合末端)与芯部分表面结合以后导入到另一端的末端(自由末端)。这些反应性官能基在水(或水系溶剂)中都是稳定的，而且只要是能够与本发明的在封入信号产生物质的芯-壳型粒子作为标识物质使用时的导入物[比如生理活性物质(比如抗体、酶或DNA)]反应的官能基，就没有特定的限制，可以举出比如醛基、羧基、巯基、氨基、马来酰亚胺基、乙烯基砜基或甲磺酰基等，优选醛基、氨基、羧基或马来酰亚胺基。
作为在以水不溶性高分子化合物为主要成分的芯部分表面上具有在表层上存在反应性官能基的水溶性高分子化合物刷的芯-壳型粒子的配制方法，至今已经报告了许多公知的方法是能够适用的，作为上述公知的方法，可以举出比如(1)将(a)具有反应性官能基的亲水性链段和疏水性链段结合而成的嵌段共聚物(亲-疏水型嵌段共聚物)和(b)疏水性聚合物混合，配制粒子的乳液法；(2)以具有反应性官能基的水溶性高分子大单体作为分散剂使疏水性单体聚合的分散聚合法；或(3)在水凝胶粒子表面导入水溶性高分子化合物刷的方法等。
作为在上述乳液法(1)中使用的亲-疏水型嵌段共聚物的合成方法和在上述分散聚合法(2)中使用的具有反应性官能基的水溶性高分子大单体的合成方法，可以使用比如本发明人及其共同研究者已经开发的方法(比如WO 96/33233、WO 99/571743或特开平11-322917)。
作为能够作为上述亲-疏水型嵌段共聚物或水溶性高分子大单体使用的化合物是比如在WO 96/33233中叙述的如通式(1A)表示的杂遥爪嵌段共聚物(ヘトロテレケリックブロックコポリマ-) 。上述通式(1A)表示的杂遥爪嵌段共聚物可以按照在比如WO 96/33323中所述的制造方法配制。
而作为可以当作上述亲-疏水型嵌段共聚物或水溶性高分子大单体使用的化合物，可以举出比如在WO 99/571743中叙述的用通式(IB)表示的聚氧亚乙基衍生物 (式中，A’和B’各自独立地表示有机甲硅烷基型的氨基保护基，或者是和与它们相连的氮原子一起能够形成4～7员硅氮环杂环式环的有机甲硅烷基型氨基保护基，Y是氢原子、碱金属或能够通过适当的反应可导入取代碱金属的有机基团，R是氢原子或碳原子数1～6的烷基，nB是1～20,000的整数，mB是0～20,000的整数)。以上述通式(IB)表示的聚氧亚乙基衍生物可以按照比如在WO 99/571743中所述的制造方法配制。
再有，作为可当作上述亲-疏水型嵌段共聚物或水溶性高分子大单体使用的化合物，可以举出比如在特开平11-322917中用通式(IC)表示的含有有机甲硅烷基硫基的化合物或聚氧亚乙基衍生物 (式中，R1C、R2C和R3C各自独立地表示直链或分支的烷基或芳烷基，ZC选自氢原子、丙烯酰基、甲基丙烯酰基、乙烯基苄基、烯丙基、p-甲苯磺酰基、单-或二-低级烷基取代的氨基、具有羧基或其酯的烷基、具有醛基或其缩醛基的烷基以及碱金属，mC是0或1，nC是0～20000的整数，pC是正数2或3，但mC、nC不同时是0)。用上述同时(IC)表示的具有有机甲硅烷基硫基的化合物或聚氧亚乙基衍生物，可按照在特开平11-322917中所述的制造方法配制。
按照芯-壳型粒子的上述乳液法(1)，将上述用通式(IA)、(IB)或(IC)表示的各化合物(即亲-疏水型嵌段共聚物)和疏水性聚合物混合，就能够配制出芯-壳型粒子(即封入信号产生物质前的粒子)。
按照芯-壳型粒子的上述分散聚合法(2)，将以上述通式(IA)、(IB)或(IC)表示的各个化合物(即水溶性高分子大单体)作为分散剂，通过使疏水性单体聚合就能够配制出芯-壳型粒子(即封入信号产生物质前的粒子)。
可以在本发明中使用的信号产生物质，只要是即使在封入芯-壳型粒子的芯部分的状态下也能从芯-壳型粒子的外侧分析出(包括检出和测定)其信号的物质即可，没有特定的限制，可以举出比如荧光物质、发光物质或色素。
作为上述的荧光物质，可以举出比如镧系螯合物(比如镧螯合物、铈螯合物、镨螯合物、钕螯合物、钷螯合物、钐螯合物、铕螯合物、钆螯合物、铽螯合物、镝螯合物、钬螯合物、饵螯合物、铥螯合物、镱螯合物或钌螯合物，优选铕螯合物或铽螯合物)、荧光素异氰酸酯、二氯三嗪基荧光素或四甲基罗丹明异氰酸酯。
作为上述色素，可以举出比如甲基黄、溶剂蓝-35、油性橙SS或油性红EGN。
封入信号产生物质的芯-壳型粒子的直径可根据不同的用途而变化，在大致球状粒子的情况下，可以是10nm～1mm左右。
本发明的封入信号产生物质的芯-壳型粒子可以由比如本发明的制造方法配制。
为了用本发明的制造方法，例如在由前面说明的各种公知的方法配制的芯-壳型粒子(即封入信号产生物质前的粒子)中封入信号产生物质，首先，在含有一定量能够使形成芯壳型粒子的芯部分的水不溶性高分子化合物膨润的有机溶剂(比如丙酮或甲苯等)中，浸渍上述芯-壳型粒子和信号产生物质(比如具有疏水性质的色素或荧光物质等)。通过上述浸渍，使上述水不溶性的高分子化合物膨润，伴随着此膨润使信号产生物质进入芯部分。接着，当从此混合物中除去有机溶剂时，上述水不溶性高分子化合物收缩，疏水的信号产生物质不能从芯部分中离开到外面去，从而封入到芯部分中。根据希望通过除去没有进入芯部分的信号产生物质就能够得到本发明的封入信号产生物质的芯-壳型粒子。
在按照本发明的制造方法中，作为从上述混合物中除去有机溶剂的方法没有特定的限制，但可以举出比如通过蒸发器蒸发干燥有机溶剂的方法，或者在非溶剂中收缩的方法(比如把含有有机溶剂的溶液置换成不含上述上述有机溶剂溶液的方法)等。
在用于使芯部分膨润的上述含有有机溶剂的溶液中，有机溶剂的含有比例，要达到使信号产生物质进入水不溶性高分子化合物的程度，只要其比例能够使上述水不溶性高分子化合物膨润就没有特别的限定，可以是比如40～60(vol/vol)％。
在本发明中，在存在于本发明封入信号产生物质的芯-壳型粒子表面上的反应性官能基上，还能够结合上可与上述反应性官能基反应的导入物(比如生理活性物质)。
上述导入物，只要能够与存在于封入信号产生物质的芯-壳型粒子表面上的反应性官能基反应即可，没有特别的限定，可以举出比如蛋白质(比如抗体或酶)或核酸(比如DNA或RNA)或细胞等。
导入物和与存在于封入信号产生物质的芯-壳型粒子表面上的反应性官能基结合的方法，可以根据上述导入物和反应性官能基的种类从公知的结合方法中进行适当的选择。
比如，在活性官能团是醛基的情况下，可以通过和生理活性物质[比如蛋白质(如抗原、抗体或受体等)、肽、低分子激素或DNA等]的氨基形成席夫碱，由此而结合。
而在反应性官能基是羧基的情况下，可以使用缩合剂(比如碳化二亚胺等)进行与生理活性物质的氨基之间的结合。或者预先用琥珀酰亚胺或马来酰亚胺将羧基活化，然后将其原样与生理活性物质混合也能够结合。
实施例下面，通过实施例具体说明本发明，但这些实施例并不限制本发明的范围。
实施例1(1)合成缩醛-PEG-PLA-甲基丙烯酰氩气下，在室温的反应容器中加入40mL溶剂四氢呋喃(THF)，然后加入0.32mL(2mmol)3，3’-二乙氧基-1-丙醇，再加入6.2mL(2mmol)浓度为0.3263mol/L的萘钾络合物在THF中的溶液，搅拌15min进行金属化。用冷却的注射器加入12mL(240mmol)环氧乙烷后，在室温下搅拌2天，进行开环聚合。然后加入84mL(84mmol)浓度为1mol/L的DL-丙交酯THF溶液，在室温下进行聚合3h。然后加入4.5mL(28mmol)甲基丙烯酸酐，在室温下搅拌2天，然后停止反应。
将得到的嵌段共聚物溶液在冷却到-15℃的2-丙醇中进行再沉淀，然后在-10℃下以6,000rpm的转速进行离心分离40min，除去溶剂。在重复此操作2次对嵌段共聚物进行精制以后，将其溶解于苯，进行冷冻干燥。
图1上显示的是此嵌段共聚物的1H-NMR波谱。聚乙二醇(PEG)的分子量由GPC的结果计算出。聚乳酸(PLA)的分子量由1H-NMR的结果，使用由GPC测量得到的PEG分子量计算出。PEG的分子量大约为5000，PLA的分子量大约为500。
(2)配制醛末端覆盖有PEG的粒子氩气下，在室温的反应容器中加入160mL用氩气置换的超纯水，然后在搅拌(400rpm)下滴加用氩气置换的30mg偶氮二异丁腈(AIBN)和3.4g嵌段共聚物[在实施例1(1)中配制的]在2mL苯乙烯中的溶液。
在室温下搅拌30min后，在60℃下搅拌(400rpm)18h，在80℃下再搅拌(400rpm)6h，由此进行聚合。在聚合反应结束以后，用滤纸[Filter paper 2(直径＝185mm)，Advantec公司制造]进行过滤将树脂块和碎屑分开，得到在表层上具有缩醛基的颗粒(acetalfunctionalized particle)。将此颗粒分散在水中，然后用1mol/L的盐酸将上述颗粒分散液的pH值调节到2.0，然后再搅拌2h。随后用1mol/L的NaOH将pH值调节到5.0，将保护基缩醛基解保护，在表层上导入醛基。
此后，为了进行脱盐，将100mL此颗粒分散液对2L蒸馏水进行一天的透析[分级分子量(MWCO)＝12000～14000，交换蒸馏水4次]，然后用滤纸[Filter paper 2(直径＝185mm)，Advantec公司制造]进行过滤，得到表层具有醛基的颗粒(aldehyde functionalizedparticle)，即醛末端嵌段聚合物-苯乙烯粒子(粒径＝65nm)。将得到的粒子(PEG分子量＝大约5000，PLA分子量＝大约500)进行扫描电子显微镜(SEM)照相，如在图2所示。
在实施例1(1)中，在进行环氧乙烷的开环聚合后，除了不加入DL-丙交酯THF溶液而加入甲基丙烯酸酐以外，重复如实施例1(1)和实施例1(2)的操作，配制PLA单元的长度变化了的比较用粒子(PEG分子量＝大约5000，PLA分子量＝0)，得到的比较用粒子的SEM照片显示在图3中。
(3)配制封入铕螯合物的粒子在1mL六水合氯化铕的水溶液(22mg/mL，蒸馏水)中加入1mL噻吩(チエノイル)甲酰三氟丙酮(TTA)的丙酮溶液(37mg/mL)，再加入2mL三辛基膦氧化物(TOPO)的丙酮溶液(43.5mg/mL)，配制成铕螯合物溶液。
另外，在5mL在实施例1(2)中配制的醛末端嵌段聚合物-苯乙烯粒子(粒径＝65nm)的悬浮液(18mg/mL，蒸馏水)中加入5mL丙酮并搅拌。在此混合液中加入0.12mL预先配制的铕螯合物溶液，再搅拌10sec。搅拌结束后，在室温和避光下静置30min以后，吹入氮气除去丙酮。此后，不取出粒子，通过0.2μm的过滤器除去由于除去丙酮而沉淀的铕螯合物，就得到了本发明的封入铕螯合物的粒子。
实施例2(1)配制封入铕螯合物粒子标识抗CRP的抗体在0.5mL在实施例1中配制的封入铕螯合物粒子中加入0.5mL的0.2mol/L磷酸缓冲液(pH值8.0)并搅拌以后，加入0.1mL抗C反应蛋白质(CRP)兔抗体F(ab’)2级分(20mg/mL生理食盐水)混合，在室温下静置1h进行反应。上述抗CRP兔抗体F(ab’)2级分是按照通常的方法由抗CRP兔抗体(Dako公司)配制的。在此反应液中，加入12mgNaBCNH3，在室温下进行15h的混合反应。
将反应液施用于用含有0.15M氯化钠的50mM tris盐酸缓冲液(pH值7.8)平衡化的フアクリルS-300柱子(1cm×45cm；药用)上，以10mL/h的流速分级为1mL/管。
用紫外部分的吸光度来监测最初溶出的粒子峰值，收集就成为装入封入铕的粒子标识的抗CRP抗体。
(2)由使用封入铕粒子标识抗CRP抗体的免疫试验法测定CRP在酶联免疫吸附测定使用的96穴板的各个穴中分别注入50μL的用生理食盐水稀释为4μg/mL的抗CRP兔抗体F(ab’)2级分，在4℃下静置一夜形成涂层。用1/15mol/L磷酸缓冲液(PBS；pH值7.4)洗涤各穴3次以后，将0.25mL含有1％牛血清白蛋白(BSA)的PBS分别注入各个穴中，在37℃下阻断1h。
在用1/15mol/L的PBS(pH值7.4)洗涤各个穴3次以后，将各50μL用含有0.1％吐温20和0.15M氯化钠的50mM tris盐酸缓冲液(pH值7.5)稀释的CRP标准品分别注入各个穴中，在37℃下静置1h进行反应。
在用1/15mol/L的PBS(pH值7.4)洗涤各个穴3次以后，将各50μL的在实施例2(1)中配制的封入铕粒子标识CRP抗体的稀释液[用含有0.1％吐温20、0.2％BSA和0.15M氯化钠的50mM tris盐酸缓冲液(pH值7.5)稀释1000倍]分别注入各个穴中，在37℃下静置1h进行反应。
在用1/15mol/L的PBS(pH值7.4)洗涤各穴5次以后，用时间分解荧光光度计(ワラック公司)测定板的时间分解荧光量1sec。结果入在表1和图4中所示。
表1CRP抗原浓度 时间分解荧光量(ng/mL)016110.14 17131.4 256614 19259140 152695产业上利用的可能性本发明的封入信号产生物质粒子，可用作生理活性物质的标识物质，在进行了利用生理活性物质的活性的结合反应后，由信号产生物质产生的信号灵敏度良好，能够特异性地检出测定的对象物质。因此，这种封入信号产生物质的粒子，作为安全而简便的优异的标识物质，可应用于广泛的领域中。
当今，以高灵敏度测定在农药或环境激素等低分子量物质，使各种生体引起异常时释放到体液中的抗原或抗体，或者来自侵入生体内的病毒的抗原、与其对抗的抗体、DNA或RNA等有意义的物质是非常多的。因此，开发了用放射性同位素、酶、荧光物质或色素等对测定的对象物质具有结合活性的物质进行标识，由各种操作法进行测定的方法。但是，本发明的封入信号产生物质粒子，与公知的标识物质相比，是在灵敏度、操作容易以及非特异性反应少等方面都很优异的标识物质。
以上按着特定的形态说明了本发明，本领域的从业人员所做的不言自明的各种改变或改良都包含在本发明的范围内。
权利要求
1.封入信号产生物质的芯-壳型粒子，该粒子由(1)基本上由水不溶性高分子化合物组成的芯部分和(2)基本上由具有反应性官能基的水溶性高分子化合物组成且以刷状覆盖于前述芯部分表面的壳部分构成，且上述芯部分和上述壳部分，作为整体，是由水不溶性高分子和水溶性高分子的嵌段聚合物形成的，其特征在于，在上述芯部分中封入信号产生物质。
2.如权利要求1中所述的封入信号产生物质的芯-壳型粒子，其中水溶性高分子化合物是聚乙二醇。
3.如权利要求1或2中所述的封入信号产生物质的芯-壳型粒子，其中水不溶性高分子化合物是聚苯乙烯。
4.如权利要求1～3中任何一项的封入信号产生物质的芯-壳型粒子，其中的反应性官能基是醛基、氨基、羧基、马来酰亚胺基或琥珀酰亚胺基。
5.如权利要求1～4中任何一项的封入信号产生物质的芯-壳型粒子，其中信号产生物质是色素。
6.如权利要求1～4中任何一项的封入信号产生物质的芯-壳型粒子，其中信号产生物质是荧光物质。
7.如权利要求1～4中任何一项的封入信号产生物质的芯-壳型粒子，其中信号产生物质是镧系螯合物。
8.制造权利要求1中所述的封入信号产生物质的芯-壳型粒子的方法，其特征在于，通过使(a)芯-壳型粒子和(b)信号产生物质浸渍在含有能够膨润下述水不溶性高分子化合物的有机溶剂的溶液中，从而将上述信号产生物质封入芯部分，该芯-壳型粒子由(1)基本上由水不溶性高分子化合物组成的芯部分和(2)基本上由具有反应性官能基的水溶性高分子化合物组成并以刷状覆盖在上述芯部分表面上的壳部分构成，而且上述芯部分和上述壳部分，作为整体，是由水不溶性高分子和水溶性高分子的嵌段聚合物形成的。
全文摘要
本发明公开了封入信号产生物质的芯－壳型粒子及其制造方法，该粒子由(1)基本上由水不溶性高分子化合物组成的芯部分和(2)基本上由具有反应性官能基的水溶性高分子化合物组成且以刷状覆盖于前述芯部分表面的壳部分构成，且上述芯部分和上述壳部分，作为整体，是由水不溶性的高分子和水溶性高分子的嵌段聚合物形成的，其特征在于，在上述芯部分中封入信号产生物质。上述封入信号产生物质的芯－壳型粒子，作为不使用受到处理限制的放射性物质、不使用具有稳定性问题的酶、具有比荧光物质更高的灵敏度，不发生非特异性吸附的标识物质是有用的。
文档编号G01N33/58GK1618019SQ02811100
公开日2005年5月18日 申请日期2002年5月30日 优先权日2001年5月30日
发明者片冈一则, 长崎幸夫, 柴田直哉, 星野信广 申请人:株式会社三菱化学药得论, 那野伽利阿株式会社