专利名称：蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留量的快速测定方法
技术领域：
本发明涉及一种蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留量的快速测定方法。
背景技术：
目前，测定蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留的方法主要有气相色谱法、液相色谱法和酶抑制法。色谱法的优点在于结果准确，但需要昂贵的仪器、熟练的操作人员，且操作烦琐、费时、有机溶剂消耗量大，包括样品预处理在内，分析单个样品需要大约2小时和几百毫升有机溶剂。色谱法一般用作标准方法或仲裁方法，难以应用于大量样品中氨基甲酸酯类农药残留的快速测定。酶抑制法的优点在于耗时少，单个样品的测定从样品预处理到得出结果所费时间为15～30分钟，已广泛应用于蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测。但该方法的灵敏度与使用的酶、所利用的显色反应以及反应时间、反应温度有密切的关系，且测定结果容易受到其它物质的干扰，经常出现漏检和误检。该方法的检测限随农药种类的不同有很大的差异，测定结果与色谱法的相关性差，并不能真正反应样品中农药的残留量。公开号为CN1349094的专利申请提供了一种残留有机磷、氨基甲酸酯农药速测方法及速测器。该方法通过被测水样和不含农药普通水样对底物(酯类化合物)水解，以酶作为催化剂，对比检测两种水解后的底物或水解产物以显色方法判断酶是否被农药抑制，而使其催化活性丧失或降低，以此测定农药残留量。速测器由塑料反应管、塑料取样管、隔离柱、封口胶组成，塑料反应管内装有酶与缓冲剂和内装显色剂的玻璃毛细管，塑料取样管内装有内装底物溶液的玻璃毛细管、棉花。

发明内容
本发明的目的在于提供一种灵敏度高，可以快速且准确地测定蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留量的方法，主要用于农贸市场和蔬菜生产基地等场合的快速检测。
本发明的步骤如下(1)萃取将蔬菜切碎或绞碎，称取5～20g于离心管中，加入2～10g无水硫酸钠和10～20ml的有机溶剂，将离心管置于超声波或机械振荡器中萃取至少2分钟，将萃取液转移到另一离心管中，所说的有机溶剂为乙酸乙酯，正己烷或它们的混合物。
(2)净化往装有萃取液的离心管中加入2～5g的无水硫酸钠和0.01～0.2g的活性炭，振荡试管，时间至少1分钟，使活性炭和溶液充分接触，静置至少1分钟，吸取上层溶液，并直接接入针筒式过滤器，过滤去除溶液中的悬浮物，滤液收集于试管中。
(3)浓缩将装有滤液的试管置于温度为35～70℃的水浴中，用氮气或空气将试管中的溶剂恰好完全吹扫干净。
(4)水解及衍生化往试管中加入0.5ml浓度为0.05M的NaOH溶液，静置5～15分钟，再加入0.5ml衍生化试剂溶液，静置1～5分钟。
(5)测定在激发波长为340nm，发射波长为445～460nm的条件下，测定衍生化后溶液的荧光强度。绝大部分氨基甲酸酯类农药的分子量为200左右，每一分子的氨基甲酸酯类农药水解后得到一分子的甲胺。典型的氨基甲酸酯类农药甲萘威(西维因)的分子量为201，因此可以用甲萘威的标准工作曲线来计算实验样品中氨基甲酸酯类农药的总残留量。
在步骤(1)中，称取的蔬菜可视样品中氨基甲酸酯类农药的残留量多少而定，所加入的无水硫酸钠可视样品含水量多少而定，所加入的有机溶剂可视样品体积而定，需将样品浸没。另外，衍生化试剂溶液的组成可为1L去离子水中含19.1g四硼酸钠、0.1g邻苯二甲醛、50μl巯基乙醇。在步骤(2)中，加入的活性炭要视萃取液的体积和颜色而定。在步骤(3)中，装有滤液的试管的水浴温度可视有机溶剂的沸点而定。
本发明的方法原理是将氨基甲酸酯类农药在碱性条件下水解为甲胺，甲胺与衍生化试剂(邻苯二甲醛和巯基乙醇)反应，生成强荧光物质，再以荧光检测器检测。最后由标准工作曲线计算出蔬菜样品中的氨基甲酸酯类农药的总残留量。本发明具有如下特点；(1)测定速度快使用本方法，单人次测定一个样品所需的时间约为15分钟。本方法的萃取、浓缩、水解及衍生化步骤可以同时实施于多个样品，使用本方法单人次测定12个样品所需的时间约为40分钟。(2)准确度高本方法使用少量有机溶剂萃取样品中的氨基甲酸酯类农药，借鉴的是色谱法的前处理方法，属无基底干扰时氨基甲酸酯类农药的标准测定方法之一。因此本方法的稳定性和可靠性高。本方法的测定结果和色谱法的测定结果有很好的一致性。(3)检测限低本方法对各种氨基甲酸酯类农药的检测限均低于0.1mg/kg，大大低于国家无公害蔬菜中典型氨基甲酸酯类农药的最大残留限量(1-2mg/kg)。利用活性炭对萃取液进行净化，去除了其中的色素和其它干扰物，使空白样品的荧光强度尽量小，从而获得很低的检测限。(4)设备简单、成本低本方法所用的设备都是一些小型设备，在市场上容易购得且价格低廉。所用试剂均为通用试剂，便宜易得。测定一个样品所需的费用不到1元。
具体实施例方式
实施例1青菜10g，切碎，装入离心管中；往离心管中加入10ml乙酸乙酯和3g无水硫酸钠，将离心管置于超声波振荡器中萃取2分钟，用微量移液器吸取约7ml萃取液于另一离心管中。
往装有萃取液的离心管中加入2g无水硫酸钠和0.025g活性炭，振荡1分钟，静置1分钟后用微量移液器吸取1ml上层溶液，将微量移液器吸头直接接入针筒式过滤器，推出溶液，过滤去除悬浮于溶液中的活性炭。滤液收集于试管中。
将装有滤液的试管置于温度为65℃的水浴中，用压缩空气将试管中的乙酸乙酯恰好完全吹扫干净。
往试管中加入浓度0.05mol/L的NaOH溶液0.5ml，静置5分钟，再加入0.5ml的衍生试剂溶液，静置2分钟。在激发波长为340nm，发射波长为445nm的条件下，测得扣除空白后溶液的荧光强度为I为0.228，根据甲萘威的标准工作曲线C＝0.502I-0.02，可计算得到实验样品中氨基甲酸酯类农药的总残留量为0.09mg/kg。
实施例2黄瓜10g，切碎，装入离心管中；往离心管中加入15ml正己烷和2g无水硫酸钠，将离心管置于超声波振荡器中萃取4分钟，用微量移液器吸取约7ml萃取液于另一离心管中。
往装有萃取液的离心管中加入5g无水硫酸钠和0.2g活性炭，振荡3分钟，静置2分钟后用微量移液器吸取1ml上层溶液，将微量移液器吸头直接接入针筒式过滤器，推出溶液，过滤去除悬浮于溶液中的活性炭。滤液收集于试管中。
将装有滤液的试管置于温度为55℃的水浴中，用压缩空气将试管中的正己烷恰好完全吹扫干净。
往试管中加入浓度0.05mol/L的NaOH溶液0.5ml，静置15分钟，再加入0.5ml的衍生试剂溶液，静置5分钟。在激发波长为340nm，发射波长为445nm的条件下，测得扣除空白后溶液的荧光强度为I为0.100，根据甲萘威的标准工作曲线C＝0.502I-0.02，可计算得到实验样品中氨基甲酸酯类农药的总残留量为0.03mg/kg。
实施例3西红柿10g，切碎，装入离心管中；往离心管中加入5ml正己烷、5ml乙酸乙酯和5g无水硫酸钠，将离心管置于超声波振荡器中萃取5分钟，用微量移液器吸取约5ml萃取液于另一离心管中。
往装有萃取液的离心管中加入3g无水硫酸钠和0.015g活性炭，振荡2分钟，静置3分钟后用微量移液器吸取1ml上层溶液，将微量移液器吸头直接接入针筒式过滤器，推出溶液，过滤去除悬浮于溶液中的活性炭。滤液收集于试管中。
将装有滤液的试管置于温度为70℃的水浴中，用压缩空气将试管中的正己烷和乙酸乙酯恰好完全吹扫干净。
往试管中加入浓度0.05M的NaOH溶液0.5ml，静置10分钟，再加入0.5ml的衍生试剂溶液，静置3分钟。在激发波长为340nm，发射波长为445nm的条件下，测得扣除空白后溶液的荧光强度为I为0.500，根据甲萘威的标准工作曲线C＝0.502I-0.02，可计算得到实验样品中氨基甲酸酯类农药的总残留量为0.23mg/kg。
实施例4西红柿10g，切碎，装入离心管中；往离心管中加入5ml正己烷、10ml乙酸乙酯和10g无水硫酸钠，将离心管置于超声波振荡器中萃取6分钟，用微量移液器吸取约5ml萃取液于另一离心管中。
往装有萃取液的离心管中加入4g无水硫酸钠和0.01g活性炭，振荡4分钟，静置4分钟后用微量移液器吸取1ml上层溶液，将微量移液器吸头直接接入针筒式过滤器，推出溶液，过滤去除悬浮于溶液中的活性炭。滤液收集于试管中。
将装有滤液的试管置于温度为35℃的水浴中，用压缩空气将试管中的正己烷和乙酸乙酯恰好完全吹扫干净。
往试管中加入浓度0.05M的NaOH溶液0.5ml，静置8分钟，再加入0.5ml的衍生试剂溶液，静置4分钟。在激发波长为340nm，发射波长为445nm的条件下，测得扣除空白后溶液的荧光强度为I为0.500，根据甲萘威的标准工作曲线C＝0.502I-0.02，可计算得到实验样品中氨基甲酸酯类农药的总残留量为0.23mg/kg。
权利要求
1.蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留量的快速测定方法，其特征在于其步骤如下(1)萃取将蔬菜切碎或绞碎，称取5～20g于离心管中，加入2～10g无水硫酸钠和10～20ml的有机溶剂，将离心管置于超声波或机械振荡器中萃取至少2分钟，将萃取液转移到另一离心管中，所说的有机溶剂为乙酸乙酯，正己烷或它们的混合物；(2)净化往装有萃取液的离心管中加入2～5g的无水硫酸钠和0.01～0.2g的活性炭，振荡试管，时间至少1分钟，使活性炭和溶液充分接触，静置至少1分钟，吸取上层溶液，并直接接入针筒式过滤器，过滤去除溶液中的悬浮物，滤液收集于试管中；(3)浓缩将装有滤液的试管置于温度为35～70℃的水浴中，用氮气或空气将试管中的溶剂恰好完全吹扫干净；(4)水解及衍生化往试管中加入0.5ml浓度为0.05M的NaOH溶液，静置5～15分钟，再加入0.5ml衍生化试剂溶液，静置1～5分钟；(5)测定在激发波长为340nm，发射波长为445～460nm的条件下，测定衍生化后溶液的荧光强度，用甲萘威的标准工作曲线计算实验样品中氨基甲酸酯类农药的总残留量。
2.如权利要求1所述的蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留量的快速测定方法，其特征在于在步骤(1)中，衍生化试剂溶液的组成为1L去离子水中含19.1g四硼酸钠、0.1g邻苯二甲醛、50μl巯基乙醇。
全文摘要
涉及一种蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留量的快速测定方法，使用有机溶剂对蔬菜中的氨基甲酸酯类农药进行萃取，利用活性炭去除萃取液中的色素和其它干扰物质；用空气或氮气将净化后的萃取液中的溶剂完全吹扫干净，在残余物中加入强碱溶液，将氨基甲酸酯类农药水解为甲胺；再加入衍生化试剂衍生甲胺，最后用荧光检测器测定衍生物；由标准工作曲线计算出蔬菜样品中的氨基甲酸酯类农药的总残留量。测定速度快，单人次测定12个样品所需的时间约为40分钟；准确度高，测定结果和色谱法的测定结果有很好的一致性；检测限低，对各种氨基甲酸酯类农药的检测限均低于0.1mg/kg；设备简单、测定成本低，测定一个样品所需的费用不到1元。
文档编号G01N21/75GK1584557SQ200410059679
公开日2005年2月23日 申请日期2004年6月15日 优先权日2004年6月15日
发明者李权龙, 袁东星, 郭祥群 申请人:厦门大学