专利名称：白术药材tlc指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱的制作方法
技术领域：
本发明涉及白术药材指纹图谱的构建方法，本发明还涉及由此方法所得到的白术药材标准指纹图谱。
背景技术：
我国中药材品种繁多，来源复杂，由于地方差异，药材中同名异物、同物异名的现象十分常见。市场上以假乱真、以次充优的情况时有发生，即使对同一种药材，由于各地的生长环境、种植技术等的不同，质量也会有很大的差异。因此，采用什么方法对药材进行合理、有效的评价，是一项重要的任务。
传统的药材评价方法是用单一的化学成分作为评价指标，具有很大的局限性。中药指纹图谱为解决这一问题提供了钥匙。由于中药具有成分复杂、有效成分不完全明确的特点，指纹图谱的整体性和模糊性可以有效地反映同一物种个体的相似性。通过指纹图谱的特征性，能有效地鉴别中药的真伪，通过指纹图谱主要特征峰面积或比例的制定，能有效地控制中药的质量，确保其质量的相对稳定性，对有效地控制中药质量具有重要意义。国外对植物药指纹图谱也有相似的应用，德国银杏提取物制剂就是其中十分突出的一个例子。
白术为菊科(Compositae)植物白术Atractylodes macrocephala Koedz.的干燥根茎，产于浙江、安徽等地，具有健脾益气、燥湿利水、止汗、安胎的功效，在中药领域多有应用。本发明用薄层色谱法构建了白术药材的指纹图谱，为白术药材质量控制和真伪鉴别提供了一种全新的方法。

发明内容
本发明的目的是提供一种白术药材指纹图谱的构建方法，以及由此方法所得到的白术药材标准指纹图谱。
本发明的白术药材指纹图谱的构建方法包括下列步骤
(1).供试品溶液的制备精密称取白术药材粉末，加水超声提取，滤过，滤液加95％乙醇静置过夜，滤过，回收乙醇，转移至分液漏斗用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯蒸干，转移至刻度试管，定容，作为供试品溶液；(2).薄层层析精密吸取供试品溶液，点于硅胶G薄层板上，以体积比为20∶5∶8的环己烷-氯仿-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；(3).薄层扫描测定对薄层斑点进行扫描测定，计算各峰的比移值Rf，并以面积归一化法计算各峰的相对峰面积，得到白术药材的指纹图谱；扫描测定条件为扫描波长330nm；扫描灯氘灯；测定模式荧光。
按照上述本发明的方法，在制备供试品溶液时，加水超声提取时的加水量一般不少于5倍生药重量；提取时间一般不少于10min；滤液中加入95％乙醇的量以与水混合后乙醇浓度以体积计一般不小于50％。
按照上述本发明的方法，可得到白术药材的TLC指纹图谱。通过对多批(10批以上)白术药材的TLC色谱图进行比较，确定其共有特征峰，可得到由其共有特征峰构成的白术药材标准指纹图谱。
本发明通过对11批白术药材的TLC色谱图进行比较，确定其共有特征峰，得到了由其共有特征峰构成的白术药材标准指纹图谱。该标准指纹图谱有10个特征峰，各峰Rf值和相对峰面积范围分别为峰10.10，9.58～26.66％；峰20.13、1.00～9.10％；峰30.19、4.38～14.90％；峰40.33、4.30～12.55％；峰50.41、12.13～24.32％；峰60.50、3.66～9.44％；峰70.56、3.13～9.20％；峰80.70、15.18～31.24％；峰90.84、2.78～8.45％；峰100.93、1.28～3.37％。
本发明的优点如下由于中药具有成分复杂、有效成分不明确的特点，白术药材其成分的研究方面较少，没有一种能够较好地控制其质量的方法。而本指纹图谱的构建，将白术作为一个整体来对待，通过指纹图谱中主要特征峰面积或比例的制定，能有效地用来检测和控制白术的质量，为白术药材质量控制和真伪鉴别提供了一种全新的方法。且本发明具有方法简便可行、直观、稳定、重现性好、易于操作等特点。
下面结合实施例和附图对本发明做进一步的说明。


图1是11批白术药材样品的TLC图；图2是11批白术药材样品薄层扫描三维图谱；图3是白术药材标准指纹图谱。
具体实施例方式
本发明的实施例如下。
1仪器与试药1.1仪器CAMAG AUTOMATIC TLC SAMPLER薄层自动点样仪；CAMAG TLCSCANNER 3薄层色谱扫描仪；CAMAG REPROSTAR 3薄层成像系统；CAMAG TLCPLATE HEATER III薄层板加热器；CAMAG双槽展开缸(瑞士CAMAG公司)；KQ3200超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1.2试药白术药材(共11批)由广州中一药业有限公司提供，分别来自于浙江、安徽、江苏等地。经鉴定均系《中国药典》所指定的品种。实验所用试剂均为分析纯。
2白术药材指纹图谱的构建2.1供试品溶液的制备分别精密称取每批白术药材粉末(过40目筛)2g，加水20ml，超声提取30min，加95％乙醇34ml，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇，至余液约为5ml，移至分液漏斗，用10ml蒸馏水洗涤，洗涤液并入分液漏斗，以乙酸乙酯20ml提取，乙酸乙酯提取液50℃蒸干，乙酸乙酯溶解转移入5ml刻度试管，定容至3ml，作为供试品溶液。
2.2薄层层析分别精密吸取每批白术药材供试品溶液3μl点于Merck预制板(20cm×20cm)上，以环己烷-氯仿-乙酸乙酯(20∶5∶8)为展开剂，预饱和20min，展开，取出，晾干，喷以以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。
2.3薄层扫描扫描波长λ＝330nm；扫描灯氘灯；光束狭缝5.00mm×0.1mm；扫描速度25mm/s；测定模式荧光。得到的11批白术药材样品的TLC图和三维扫描图分别如图1和图2所示。
2.4指纹特征的确定通过对比11批药材的薄层扫描图，选取1～10号峰作为白术药材的指纹特征峰，构成白术药材的标准指纹图谱(见图3)。
各样品Rf值、相对峰面积见表1～表3。
表1白术样品Rf值样品 峰1 峰2 峰3 峰4 峰5 峰6 峰7 峰8 峰9 峰1010.10 0.13 0.19 0.32 0.39 0.47 0.55 0.69 0.84 0.9420.10 0.13 0.19 0.32 0.39 0.48 0.54 0.66 0.81 0.9330.10 0.13 0.19 0.32 0.40 0.47 0.55 0.67 0.82 0.9340.10 0.13 0.19 0.32 0.41 0.49 0.55 0.68 0.83 0.9350.09 0.13 0.19 0.32 0.41 0.51 0.56 0.69 0.84 0.9360.09 0.13 0.19 0.33 0.41 0.51 0.56 0.69 0.83 0.9370.10 0.13 0.20 0.32 0.41 0.50 0.57 0.70 0.84 0.9380.10 0.13 0.20 0.33 0.43 0.51 0.58 0.71 0.84 0.9390.10 0.13 0.19 0.33 0.41 0.51 0.58 0.71 0.85 0.9310 0.10 0.13 0.20 0.33 0.42 0.50 0.58 0.72 0.86 0.9311 0.10 0.14 0.20 0.34 0.44 0.51 0.59 0.74 0.87 0.94表2白术样品相对峰面积值(％)样品 峰1 峰2 峰3峰4峰5峰6 峰7 峰8峰9 峰10114.87 9.10 4.38 12.55 24.32 4.06 4.18 21.08 4.18 1.28226.66 1.00 8.27 4.30 15.20 3.66 3.13 31.24 4.69 1.85323.71 3.89 8.19 8.66 12.13 8.15 6.74 19.74 5.50 3.28413.42 4.89 6.69 6.47 17.44 9.40 7.84 22.03 8.45 3.3759.89 6.48 6.80 11.73 19.67 6.70 4.62 27.46 5.29 1.3769.58 5.75 5.22 8.33 22.99 8.55 6.53 23.60 6.76 2.70715.75 4.64 9.15 7.03 18.00 6.71 6.33 23.47 7.01 1.90815.07 5.05 10.91 9.40 15.20 8.87 5.72 22.35 5.68 1.75919.18 4.41 12.59 7.91 15.39 7.68 9.20 15.64 5.73 2.2710 14.40 5.04 14.26 8.27 13.93 9.44 6.95 18.27 6.33 3.1111 22.82 6.37 14.90 9.61 12.75 7.51 6.50 15.18 2.78 1.57表3特征峰Rf值及相对峰面积范围特征峰 Rf值 相对峰面积(％)峰1 0.109.58～26.66峰2 0.131.00～9.10峰3 0.194.38～14.90峰4 0.334.30～12.55峰5 0.4112.13～24.32峰6 0.503.66～9.44峰7 0.563.13～9.20峰8 0.7015.18～31.24峰9 0.842.78～8.45峰10 0.931.28～3.3权利要求
1.一种白术药材TLC指纹图谱的构建方法，依次包括以下步骤(1).供试品溶液的制备精密称取白术药材粉末，加水超声提取，滤过，滤液加95％乙醇静置过夜，滤过，回收乙醇，转移至分液漏斗用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯蒸干，转移至刻度试管，定容，作为供试品溶液；(2).薄层层析精密吸取供试品溶液，点于硅胶G薄层板上，以体积比为20∶5∶8的环己烷-氯仿-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；(3).薄层扫描测定对薄层斑点进行扫描测定，计算各峰的比移值Rf，并以面积归一化法计算各峰的相对峰面积，得到白术药材的指纹图谱；扫描测定条件为扫描波长330nm；扫描灯氘灯；测定模式荧光。
2.按照权利要求1所述的方法，其特征是在制备供试品溶液时，加水超声提取时的加水量不少于5倍生药重量；提取时间不少于10min；滤液中加入95％乙醇的量以与水混合后乙醇浓度以体积计不小于50％。
3.一种按照权利要求1或2所述方法得到的白术药材TLC指纹图谱。
4.按照权利要求3所述的白术药材TLC指纹图谱，其特征是该指纹图谱是通过比较11批白术药材的TLC色谱图，由其共有特征峰构成的白术药材标准指纹图谱。
5.按照权利要求4所述的白术药材TLC指纹图谱，其特征是该指纹图谱有10个特征峰，各峰Rf值和相对峰面积范围分别为峰10.10，9.58～26.66％；峰20.13、1.00～9.10％；峰30.19、4.38～14.90％；峰40.33、4.30～12.55％；峰50.41、12.13～24.32％；峰60.50、3.66～9.44％；峰70.56、3.13～9.20％；峰80.70、15.18～31.24％；峰90.84、2.78～8.45％；峰100.93、1.28～3.37％。
全文摘要
本发明涉及白术药材TLC指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱。首先，取白术药材粉末，加水超声提取，滤过，滤液加95％乙醇，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇，水提醇沉液以乙酸乙酯提取，乙酸乙酯蒸干，定容，作为供试品溶液；吸取供试品溶液，点于硅胶G薄层板上，以环己烷－氯仿－乙酸乙酯(20∶5∶8)为展开剂，预饱和20min，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；再进行荧光扫描，测定波长λ＝330nm；获得白术药材指纹图谱。并通过对11批白术药材的TLC指纹图谱进行比较，确定了其共有指纹特征，得到白术药材的标准指纹图谱。本发明为白术药材质量控制和真伪鉴别提供了一种全新的方法。
文档编号G01N30/95GK1529162SQ200310111788
公开日2004年9月15日 申请日期2003年10月16日 优先权日2003年10月16日
发明者苏薇薇, 劳业兴, 吴忠, 王永刚, 彭维, 招嘉文 申请人:中山大学