专利名称：一种三聚氰胺发光酶联免疫分析试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种试剂盒，特别是涉及一种三聚氰胺发光酶联免疫分析试剂
品.O
背景技术：
三聚氰胺是涉及食品安全的有害小分子有机物质，进入人体后，可发生取代反应 (水解)，生成三聚氰酸，三聚氰酸和三聚氰胺形成大的网状结构，造成人体结石，但一些生产厂家为提高奶粉中蛋白质含量指标违规添加三聚氰胺，如三鹿奶粉事件。目前对三聚氰胺的检测依赖高效液相色谱法和液相色谱-质谱法以及少数需从国外进口的检测平台，这些检测方法的前处理过程复杂，检测时间长，检测费用高，仪器设备较贵及缺乏自主知识产权等缺陷严重制约了我国对食品安全有害小分子的有效检测，危害了广大人民群众的身体健康及相关检测技术和行业的发展。因此，利用先进的技术平台，建立具有自主知识产权的检测试剂和方法，解决目前具有严重危害的食品安全有害小分子检测难及多种检测试剂和方法依赖国外进口问题已迫在眉睫。

实用新型内容针对上述不足，本实用新型提供一种使用成本低、操作方便、快速检测食品中三聚氰胺含量的发光酶联免疫分析试剂盒。本实用新型的技术方案是这样的一种三聚氰胺发光酶联免疫分析试剂盒，包括盒体，盒体内设有14个试剂瓶、1块酶联板、一块盖板膜、一组试剂瓶架和一个酶联板下凹槽，试剂瓶放置在试剂瓶架上，酶联板放置在酶联板下凹槽内，酶联板上盖有盖板膜。上述的一种三聚氰胺发光酶联免疫分析试剂盒，其中，所述的酶联板下凹槽设置在试剂瓶架的左端或右端。上述的一种三聚氰胺发光酶联免疫分析试剂盒，其中，所述的酶联板是可拆卸的 96孔酶联板，酶联板的微孔上包被用牛血清白蛋白藕联的三聚氰胺，制成固相抗原。进一步的，上述的一种三聚氰胺发光酶联免疫分析试剂盒，其中，所述的14个试剂瓶分别为两瓶装有样品标准品试剂瓶，六瓶装有标准溶液试剂瓶，一瓶装有样品稀释液试剂瓶，一瓶检测溶液A试剂瓶，一瓶装检测溶液B试剂瓶，一瓶装有洗涤原液试剂瓶，一瓶装有底物溶液的试剂瓶，一瓶装有终止液试剂瓶。更进一步的，上述的一种三聚氰胺发光酶联免疫分析试剂盒，其中，所述的14个试剂瓶分别为两瓶装有样品标准品试剂瓶，Iml ；六瓶装有标准溶液试剂瓶，3ml ；—瓶装有样品稀释液试剂瓶，20ml ；—瓶检测溶液A试剂瓶，Iml ；—瓶装检测溶液B的试剂瓶， Iml ；一瓶装有洗涤原液试剂瓶，30ml ；—瓶装有底物溶液试剂瓶，IOml ；—瓶装有终止液试剂瓶，10ml。 上述的一种三聚氰胺发光酶联免疫分析试剂盒，其中，所述的盒体为硬质盒体。[0012]与现有技术相比，本实用新型具有使用成本低、操作方便、灵敏度高、应用范围广等优点。
以下结合附图和具体实施例本实用新型的试剂盒作进一步的说明，但不构成对本实用新型的任何限制。

图1是本实用新型试剂盒示意图；图2是本实用新型打开示意图；图3是本实用新型的试剂架示意图；图3是本实用新型的酶联板的示意图。其中盒体1，试剂瓶架2，样品标准品试剂瓶3，标准溶液试剂瓶4，样品稀释液试剂瓶5，检测溶液A试剂瓶6，检测溶液B试剂瓶7，洗涤原液试剂瓶8，底物溶液试剂瓶9，终止液试剂瓶10，酶联板11，酶联板下凹槽12，盖板膜13。
具体实施方式
实施例1如图1至3所示，本实用新型一种三聚氰胺发光酶联免疫分析试剂盒，包括盒体1， 盒体1内设有试剂瓶架2，试剂瓶架2上放置有2瓶装有样品标准品试剂瓶3，容积为lml，6 瓶装有标准溶液试剂瓶4，容积为:3ml，1瓶装有样品稀释液试剂瓶5，容积为20ml，1瓶检测溶液A试剂瓶6，容积为1ml，1瓶装检测溶液B试剂瓶7，容积为1ml，1瓶装有洗涤原液试剂瓶8，容积为30ml，1瓶装有底物溶液试剂瓶9，容积为10ml，1瓶装有终止液试剂瓶10，容积为10ml，试剂瓶架的左端设有放置酶联板11的酶联板下凹槽12，其中，酶联板为96孔， 酶联板的微孔上包被用牛血清白蛋白藕联的三聚氰胺，制成固相抗原，酶联板下凹槽上方设有一块盖板膜13，以保证酶联板不受外界杂质的影响。实验原理本试剂盒应用发光酶标免疫分析法测定样品中三聚氰胺含量。用牛血清白蛋白(BSA)藕联的三聚氰胺包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入三聚氰胺待检样品、能与三聚氰胺特异性结合的anticalin分子标准品、HRP标记的抗噬菌体抗体，经过彻底洗涤后用底物鲁米诺显色。鲁米诺在过氧化物酶的催化下生成激发态中间体，当其回到基态时发光，光强度和样品中的三聚氰胺呈负相关，其检测波长为425nm，发光免疫分析仪检测，计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制1.酶联板1 一块(96孔，可拆卸)。2.标准品(冻干品)2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至lml，充分溶解，其浓度为lmg/L,再做系列倍比稀释，分别稀释为1000 μ g/L，500 μ g/L，250 μ g/L，125 μ g/L， 62. 5 μ g/L, 31. 2 μ g/L, 15. 6 μ g/L, 0 μ g/L,原液直接作为标准浓度1000 μ g/L，样品稀释液 3直接作为标准浓度0 μ g/L。3.样品稀释液1瓶，20ml/瓶。4.检测溶液A :1瓶，100 μ 1/瓶。临用前以检测稀释液按1 1000稀释，稀释前
根据预先计算好的每次实验所需总量配置。[0027]5.检测溶液B :1瓶，100 μ 1/瓶。临用前以检测稀释液按1 1000稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需总量配置。6.检测稀释液2瓶，IOml/瓶。7.洗涤原液1瓶，30ml/瓶。使用时用蒸馏水稀释25倍。8.底物溶液1瓶，IOml/瓶。9.终止液1 瓶，IOml/瓶。其中所述的样品稀释液包含磷酸盐缓冲液；所述检测溶液A是anticalin ；所述检测溶液B是辣根过氧化物酶HRP标记的抗噬菌体抗体；所述洗涤原液包含磷酸盐缓冲液；所述底物溶液是鲁米诺溶液；所述终止液是硫酸溶液；所述酶联板是96孔酶联板。标本的采集及保存采集食品样品，干燥管中用样品稀释液充分溶解，室温IOOOg离心10分钟，取上清即可检测，或将样品-20 V保存以后检测，但应避免反复冻融。操作步骤各种试剂在使用前平衡至室温。1.加样分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。除空白孔外，余孔分别加标准溶液或待测样品IOOul。2.不用洗涤，每孔加检测溶液A工作液100ul，37°C，轻轻震荡60分钟。3.洗涤工作液洗板3次，每次350ul/每孔，甩干。4.每孔加检测溶液B工作液lOOul，37°C，60分钟，洗板5次，甩干。5.依序每孔加底物溶液90ul，37°C避光显色10分钟。6.依序每孔加终止溶液50ul，终止反应。发光免疫分析仪在425nm波长测量各孔发光强度。特异性本试剂盒可同时检测三聚氰胺各个分型，且与其他蛋白无交叉反应。计算以标准物的浓度为横坐标(对数坐标)，光强度为纵坐标(普通坐标)，在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的光强度值由标准曲线查出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与光强度值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的光强度值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。检测范围15μ g/L 1000 μ g/L本实用新型并不限于以上实施方式，只要是本说明书及权利要求书中提及的方案均是可以实施的。
权利要求1.一种三聚氰胺发光酶联免疫分析试剂盒，包括盒体(1)，其特征在于，盒体(1)内设有十四个试剂瓶、一块酶联板(11)、一组试剂瓶架( 和一个酶联板下凹槽(12)，试剂瓶放置在试剂瓶架⑵上，酶联板(11)放置在酶联板下凹槽(12)内，酶联板(11)上盖有盖板膜(13)。
2.根据权利要求1所述的一种三聚氰胺发光酶联免疫分析试剂盒，其特征在于，所述的酶联板下凹槽(1 设置在试剂瓶架的左端或右端。
3.根据权利要求1所述的一种三聚氰胺发光酶联免疫分析试剂盒，其特征在于，所述的酶联板是可拆卸的96孔酶联板，酶联板(11)的微孔上包被用牛血清白蛋白藕联的三聚氰胺，制成固相抗原。
4.根据权利要求1所述的一种三聚氰胺发光酶联免疫分析试剂盒，其特征在于，所述的十四个试剂瓶分别为两瓶装有样品标准品试剂瓶(3)，六瓶装有标准溶液试剂瓶0)， 一瓶装有样品稀释液试剂瓶(5)，一瓶检测溶液A试剂瓶(6)，一瓶装检测溶液B试剂瓶 (7)，一瓶装有洗涤原液试剂瓶(8)，一瓶装有底物溶液试剂瓶(9)，一瓶装有终止液试剂瓶 (10)。
5.根据权利要求4所述的一种三聚氰胺发光酶联免疫分析试剂盒，其特征在于，所述的十四个试剂瓶分别为两瓶装有样品标准品试剂瓶(3)，lml，六瓶装有标准溶液试剂瓶 G)，:3ml，一瓶装有样品稀释液试剂瓶(5)，20ml，一瓶检测溶液A试剂瓶(6)，lml，一瓶装检测溶液B试剂瓶(7)，1ml，一瓶装有洗涤原液试剂瓶，30ml，一瓶装有底物溶液试剂瓶， 10ml，一瓶装有终止液试剂瓶，10ml。
6.根据权利要求1所述的一种三聚氰胺发光酶联免疫分析试剂盒，其特征在于，所述的盒体(1)为硬质盒体。
专利摘要一种三聚氰胺发光酶联免疫分析试剂盒，旨在提供一种使用成本低、操作方便、灵敏度高、应用范围广的试剂盒，属于食品化学检测技术领域；其技术要点，盒体内设有14个试剂瓶、1块酶联板、一组试剂瓶架和1个酶联板下凹槽，试剂瓶放置在试剂瓶架上，酶联板放置在酶联板下凹槽内，酶联板上盖有盖板膜；本实用新型可用于食品中三聚氰胺含量的检测。
文档编号G01N33/543GK201984069SQ20112007375
公开日2011年9月21日 申请日期2011年3月18日 优先权日2011年3月18日
发明者张宏斌 申请人:广州济恒医药科技有限公司