专利名称：整体透明方法
技术领域：
本发明涉及一种整体透明方法，属于植物显微技术领域。
背景技术：
整体透明技术是利用透明剂浸透植物材料，或是利用某些染料或化学反应物质及透明剂 对植物材料进行处理，使材料的光学特性发生改变，透光性增强，从而能不经解剖即可观察 到材料的内部结构特征。现有的整体透明技术，多采用先对植物材料进行染色，然后通过对 植物材料的脱水、浸透等处理来改变材料的光学和透光特性。目前整体透明技术中最常用的 透明剂是冬青油，由于冬青油对植物材料的渗透、透明，需要在无水环境中进行，所以透明 前，先要对植物材料脱水，但材料脱水会引起其收縮。同时，由于油类透明剂对材料的浸透 、透明需要较长的时间，这使得制片处理程序较多，总的制片时间较长。另外对于野外用乙 醇溶液保存的材料，其颜色常常变深，使得整体染色与透明技术无法直接使用。

发明内容
本发明的目的在于提出一种整体透明方法，以简化操作步骤并获得更好的观察效果。 为了实现上述目的，本发明的技术方案采用了一种整体透明方法，该方法包括以下顺序 步骤
待观察部分植物材料的分离；
将植物材料浸泡在84消毒液中，直到植物材料变得透明； 植物材料的制片，观察。
所述的步骤B中的84消毒液可以替换为过氧化氢(H202)或次氯酸钠(NaOCl)溶液；透 明剂84消毒液为市售产品，其主要成分是次氯酸钠，有效氯含量为4. 5 5. 5 (质量体积比值 )，它是一种强氧化剂，具有一定的腐蚀作用，可用做离析剂，对棉纺物等具有漂白、脱色 作用；但随着存放时间的增加，其有效氯含量会降低，使用时应尽可能使用近期生产的产品
所述的步骤B中浸泡使用的是密闭容器。
所述的步骤C中的制片观察，可以选用直接观察的方法，即将植物材料取出放在凹玻片的凹槽内，在植物材料表面滴加84消毒液，盖上盖玻片进行观察。
所述的步骤C中的制片观察，还可以选用染色后观察的方法，在制片前对植物材料进行 染色，具体的操作方法为将植物材料从84消毒液中取出后，放入清水中浸泡漂洗，除去植物 材料上的残留物；然后将植物材料放入栀子色素溶液中浸泡染色，当植物材料被染上较深颜 色时，将其取出放在凹玻片的凹槽内，滴加清水，盖上盖玻片，进行观察。其中所述的栀子 色素溶液的制备方法为取10-30粒栀子果实(购自药店)，用适量开水浸泡，得到的黄色溶 液即为栀子色素溶液。
所述的步骤C中的制片观察，还可以选用以下方法将植物材料取出放在凹玻片的凹槽 内，在植物材料表面滴加无水乙醇和香柏油(又称油镜油)的混合液(无水乙醇与香柏油之 比50-100: 1)，使其完全覆盖植物材料，用吸水纸吸去扩散到周围的白色液体；待混合液 挥发将尽，植物材料完全暴露在空气中时，再次滴加无水乙醇和香柏油的混合液，重复2-4 次；然后在植物材料上滴加无水乙醇和香柏油的混合液，或者滴加香柏油，最后盖上盖玻片 进行观察。其中仅滴加香柏油的方法所得玻片可以长时间保存。
所述的植物材料取出可采用以下方法进行，取足以吸附植物材料的滤纸片，伸入84消毒 液中吸附植物材料，然后将吸附有植物材料的滤纸片转移到洗涤液中清洗，或移到四玻片的 凹槽内，滴加84消毒液、清水或生理盐水，使植物材料脱离滤纸表面，移除滤纸，使植物材 料进入凹玻片的凹槽内。
所述的制片观察，在制片前需要对植物材料进行显微解剖的，可采用如下方法依据植 物材料选取合适大小的擦镜纸，放入凹玻片的凹槽内，滴加84消毒液、清水或生理盐水使擦 镜纸吸附在凹槽玻璃的表面，然后将植物材料转移到擦镜纸上，用滤纸或吸水纸接触擦镜纸 边缘，将其上多余的液体吸去，使植物材料贴附在擦镜纸的表面，在解剖镜下，对贴附在擦 镜纸小片上的植物材料进行解剖，分离出所需要的结构。
所述的滴加84消毒液、清水或生理盐水，优选的方式是对于直接使用84消毒液封片的， 此步可滴加84消毒液；对于需对植物材料进行漂洗、染色或使用无水乙醇和香柏油的混合液 处理的，此步可滴加清水或生理盐水。
本发明还涉及84消毒液作为透明剂在整体透明方法中的应用，其具体的使用方法为
A、 待观察部分植物材料的分离；
B、 将植物材料浸泡在84消毒液中，直到植物材料变得透明；
C、 植物材料的制片，观察。
采用本发明的方法优势在于①本发明所使用的透明剂和染色液都是市售产品，购买方便，并且价格便宜；②本发明所使用的透明剂作透明处理时，处理前不需要对材料进行脱水 等处理，不仅避免了材料因脱水引起的收縮等问题，而且很大程度上縮短了透明所需的时间 ，简化了制片处理程序；③对于野外用乙醇溶液保存的材料，直接使用本方法即可得到较好 的观察效果；④使用滤纸取出植物材料的方法简单易行且材料易得；⑤使用擦镜纸固定植物 材料以便于在解剖镜下解剖植物材料的方法操作简单且材料易得。


图l为千金藤果实中分离出的幼嫩种子的图片；
图2为高梁子房中分离出的胚珠的图片；
图3为千金藤幼嫩种子的透明处理后的图片；
图4为千金藤幼嫩种子经84消毒液透明、制片后，观察到的图片； 图5为图4的植物材料经显微解剖分离出的千金藤球形胚的图片；
图6为千金藤幼嫩种子经透明、染色、制片后，在胚囊中观察到的球形胚的图片； 图7为高梁胚珠的透明处理后的图片；
图8为高梁胚珠的透明、染色、制片后的观察结果l可观察到胚珠表面突出的珠孔和隐
约可见的胚珠内的胚囊的图片，2为1经调焦后观察到的胚囊图片，3为上图胚囊的荧光显微
镜观察的图片。
具体实施例方式
以下材料分离实施例、实施例和效果实施例可以更详细的说明本发明，但不以任何形式 限制本发明。 材料分离实施例l 千金藤幼嫩种子的分离
先将胶块放在解剖镜视野中(参见洪亚平等发表在《安徽农业科学》上的论文在解剖 镜下利用胶块观察植物花形态的方法)，在解剖镜下用镊子将千金藤幼嫩果实从幼果序上摘 下，放在胶块上。用尖头镊子将幼果的两侧夹住，用解剖针沿着幼果的背缝线和腹缝线，将 外果皮和中果皮划开。用镊子和解剖针沿着划开的背缝线，将幼果掰开，用解剖针轻轻地将 幼嫩的种子从子房室内分离出来，分离出的幼嫩种子如图l。
材料分离实施例2
高梁胚珠的分离
将高梁的小花从小穗上摘下，粘在胶块上，用解剖针和镊子将其子房分离出来，粘放在胶块上，再用解剖针将胚珠分离出来，分离出的胚珠见图2。 实施例l
一种整体透明方法包括以下步骤
A、 待观察部分植物材料的分离；
B、 将分离出的植物材料浸泡在84消毒液(购自洛阳市洁康消毒剂厂)中，直到植物材 料变得透明；
C、 取O. 5X0. 7mm的滤纸片，伸入84消毒液中吸附透明好的植物材料，然后将吸附有植 物材料的滤纸片转移到凹玻片的凹槽内，滴加84消毒液，使植物材料脱离滤纸表面，移除滤 纸，使植物材料进入凹玻片的凹槽内，盖上盖玻片，进行观察。
实施例2
一种整体透明方法包括以下步骤
A、 待观察部分植物材料的分离；
B、 将分离出的植物材料浸泡在84消毒液(购自洛阳市洁康消毒剂厂)中，直到植物材 料变得透明；
C、 取9X15mm的擦镜纸，放入凹玻片的凹槽内，滴加84消毒液使擦镜纸吸附在凹槽玻璃 的表面，然后取0.5X0.7mm的滤纸片，伸入84消毒液中吸附透明好的植物材料，然后将吸附 有植物材料的滤纸片转移到凹玻片的凹槽内，滴加84消毒液，使植物材料脱离滤纸表面，移 除滤纸，使植物材料进入凹玻片的凹槽内的擦镜纸上，用滤纸或吸水纸接触擦镜纸边缘，将 其上多余的液体吸去，使植物材料贴附在擦镜纸的表面，在解剖镜下，对贴附在擦镜纸小片 上的植物材料进行解剖，分离出所需要的结构，封片后进行观察。
实施例3
一种整体透明方法包括以下步骤 待观察部分植物材料的分离；
将分离出的植物材料浸泡在84消毒液(购自洛阳市洁康消毒剂厂)中，直到植物材料变 得透明；
取O. 6X0. 7mm的滤纸片，伸入84消毒液中吸附透明好的植物材料，然后将吸附有植物材 料的滤纸片转移到清水中浸泡漂洗，除去植物材料上的残留物；然后将植物材料用滤纸片转 移到栀子色素溶液中浸泡染色，当植物材料被染上较深颜色时，用滤纸片将其取出转移到凹 玻片的凹槽内，滴加清水，使植物材料脱离滤纸表面，移除滤纸，使植物材料进入凹玻片的凹槽内，盖上盖玻片，进行观察；其中所使用的栀子色素溶液的制备方法为取30粒栀子果实 (购自药店)，用适量开水浸泡，得到的黄色溶液即为栀子色素溶液。 实施例4
一种整体透明方法包括以下步骤
A、 待观察部分植物材料的分离；
B、 将分离出的植物材料浸泡在双氧水中，直到植物材料变得透明；
C、 取O. 7X0. 7mm的滤纸片，伸入双氧水中吸附透明好的植物材料，然后将吸附有植物 材料的滤纸片转移到清水中浸泡漂洗，除去植物材料上的残留物；然后将植物材料用滤纸片 转移到栀子色素溶液中浸泡染色，当植物材料被染上较深颜色时，用滤纸片将其取出转移到 凹玻片的凹槽内，滴加生理盐水，使植物材料脱离滤纸表面，移除滤纸，使植物材料进入凹 玻片的凹槽内的，盖上盖玻片，进行观察；其中所使用的栀子色素溶液的制备方法为取10粒 栀子果实(购自药店)，用适量开水浸泡，得到的黄色溶液即为栀子色素溶液。
实施例5
一种整体透明方法包括以下步骤 待观察部分植物材料的分离；
将分离出的植物材料浸泡在84消毒液(购自洛阳市洁康消毒剂厂)中，直到植物材料变 得透明；
取O. 7X0. 5mm的滤纸片，伸入84消毒液中吸附透明好的植物材料，然后将吸附有植物材 料的滤纸片转移到凹玻片的凹槽内，滴加清水，使植物材料脱离滤纸表面，移除滤纸，使植 物材料进入凹玻片的凹槽内，在植物材料表面滴加无水乙醇和香柏油的混合液，无水乙醇与 香柏油之比为50: 1，使其完全覆盖植物材料，用吸水纸吸去扩散到周围的白色液体；待混 合液挥发将尽，植物材料完全暴露在空气中时，再次滴加无水乙醇和香柏油的混合液，重复 2次；然后在植物材料上滴加无水乙醇和香柏油的混合液，或者滴加香柏油，然后盖上盖玻
片，进行观察。其中仅滴加香柏油的方法所得玻片可以长期保存。
实施例6
一种整体透明方法包括以下步骤
A、 待观察部分植物材料的分离；
B、 将分离出的植物材料浸泡在次氯酸钠溶液中，直到植物材料变得透明；C、取0.7X0.6mm的滤纸片，伸入次氯酸钠溶液中吸附透明好的植物材料，然后将吸附 有植物材料的滤纸片转移到四玻片的四槽内，滴加清水，使植物材料脱离滤纸表面，移除滤 纸，使植物材料进入凹玻片的凹槽内，在植物材料表面滴加无水乙醇和香柏油的混合液，无 水乙醇与香柏油之比为100: 1，使其完全覆盖植物材料，用吸水纸吸去扩散到周围的白色液 体；待混合液挥发将尽，植物材料完全暴露在空气中时，再次滴加无水乙醇和香柏油的混合 液，重复4次；然后在植物材料上滴加无水乙醇和香柏油的混合液，或者滴加香柏油，然后 盖上盖玻片，进行观察。其中仅滴加香柏油的方法所得玻片可以长期保存。
效果实施例l
千金藤幼嫩种子的制片观察
使用材料分离实施例l的方法获得待观察植物材料，运用实施例l的方法对植物材料进行 透明(如图3)、制片观察结果如图4。 效果实施例2
显微解剖透明后千金藤幼嫩种子获得的球形胚的制片观察
使用材料分离实施例l的方法获得待观察植物材料，运用实施例2的方法对植物材料进行 透明、显微解剖并制片，观察结果如图5。 效果实施例3
千金藤幼嫩种子的制片观察
使用材料分离实施例l的方法获得待观察植物材料，运用实施例3的方法对植物材料进行 透明、染色、制片，观察结果如图6。 效果实施例4 高梁胚珠的制片观察
使用材料分离实施例2的方法获得待观察植物材料，运用实施例3的方法对植物材料进行 透明(如图7)、染色、制片，观察结果如图8。
权利要求
1.一种整体透明方法，其特征在于所述方法包括以下顺序步骤A、待观察部分植物材料的分离；B、将植物材料浸泡在84消毒液中，直到植物材料变得透明；C、将植物材料取出后制片观察。
2. 根据权利要求l所述的一种整体透明方法，其特征在于步骤B中所述的84消毒液可以替换为过氧化氢或次氯酸钠溶液。
3. 根据权利要求l所述的一种整体透明方法，其特征在于步骤B中 所述的浸泡使用的是密闭容器。
4. 根据权利要求l所述的一种整体透明方法，其特征在于步骤C中 所述的制片观察，具体操作方法为将植物材料取出放在凹玻片的凹槽内，在植物材料表面滴加84消毒液，盖上盖玻片，进行观察。
5. 根据权利要求l所述的一种整体透明方法，其特征在于步骤C中所述的制片观察，其中制片前还可以对植物材料进行染色，具体的操作方法为将植物材料取出后，放入清水中浸泡漂洗，除去植物材料上的残留物；然后将植物材料放入栀子色素溶液 中浸泡染色，当植物材料被染上颜色时，将其取出放在凹玻片的凹槽内，滴加清水，盖上盖 玻片，进行观察。
6.根据权利要求5所述的一种整体透明方法，其特征在于所述的栀 子色素溶液的制备方法为取10-30粒栀子果实，用适量开水浸泡，得到的黄色溶液即为栀子 色素溶液。
7.根据权利要求l所述的一种整体透明方法，其特征在于步骤C中所述的制片观察，具体操作方法为将植物材料取出放在凹玻片的凹槽内，在植物材料表面滴加无水乙醇和香柏油的混合液，无水乙醇与香柏油之比为50-100: 1，使其完全覆盖植物材 料，用吸水纸吸去扩散到周围的白色液体；待混合液挥发将尽，植物材料完全暴露在空气中 时，再次滴加无水乙醇和香柏油的混合液，重复2-4次；然后在植物材料上滴加无水乙醇和 香柏油的混合液，或者直接滴加香柏油，然后盖上盖玻片，进行观察。
8.根据权利要求1至7中任意一项所述的一种整体透明方法，其特征 在于所述的植物材料取出可采用以下方法进行，取足以吸附植物材料的滤纸片，伸入84消 毒液中吸附植物材料，然后将吸附有植物材料的滤纸片转移到洗涤液中清洗，或移到四玻片 的凹槽内，滴加84消毒液、清水或生理盐水，使植物材料脱离滤纸表面，移除滤纸，使植物 材料进入凹玻片的凹槽内。
9.根据权利要求1至7中任意一项所述的一种整体透明方法，其特征 在于所述的制片观察，在制片前需要对植物材料进行显微解剖的，可采用如下方法依据植物材料选取合适大小的擦镜纸，放入凹玻片的凹槽内，滴加84消毒液、清水或生理盐水使擦镜纸吸附在凹槽玻璃的表面，然后将植物材料转移到擦镜纸上，用滤纸或吸水纸接触擦镜 纸边缘，将其上多余的液体吸去，使植物材料贴附在擦镜纸的表面，在解剖镜下，对贴附在 擦镜纸小片上的植物材料进行解剖，分离出所需要的结构。
10.根据权利要求8或9所述的一种整体透明方法，其特征在于所述 的滴加84消毒液、清水或生理盐水，优选的方式是对于直接使用84消毒液封片的，此步可滴 加84消毒液；对于需对植物材料进行漂洗、染色或使用无水乙醇和香柏油的混合液处理的， 此步可滴加清水或生理盐水。
全文摘要
本发明公开了一种整体透明方法，所述方法包括以下顺序步骤A.待观察部分植物材料的分离；B.将植物材料浸泡在84消毒液中，直到植物材料变得透明；C.将植物材料取出后制片观察。采用本发明的方法优势在于①本发明所使用的透明剂和染色液都是市售产品，购买方便，并且价格便宜；②本发明的透明剂作透明处理时，处理前不需要对材料进行脱水等处理，不仅避免了材料因脱水引起的收缩等问题，而且很大程度上缩短了透明所需的时间，简化了制片处理程序；③对于野外用乙醇溶液保存的材料，直接使用本方法即可得到较好的观察效果；④使用滤纸取出植物材料的方法简单易行且材料易得；⑤使用擦镜纸固定植物材料以便于在解剖镜下解剖植物材料的方法操作简单且材料易得。
文档编号G01N1/30GK101672737SQ20091030839
公开日2010年3月17日 申请日期2009年10月17日 优先权日2009年10月17日
发明者仝克勤, 张有福, 李友军, 洪亚平, 韩赞平 申请人:河南科技大学