专利名称：变色剂组合物及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有两种有机酸碱指示剂的变色剂组合物，特别是涉及可用来完成酶联免疫诊断试剂盒样品液加血清变色显示的变色剂组合物。
已知一般单色酸碱指示剂的变色范围在1-2个PH单位，在中和滴定中，选择合适的酸碱指示剂能够指示强酸滴定强碱，强碱滴定强酸，强酸滴定弱碱以强碱滴定弱酸，但对于弱碱滴定弱酸的反应，由于敏锐指数要求较高，单一酸碱指示剂不能达到实际要求。比如在酶联免疫诊断试剂盒的操作中，极弱碱性的临床血清加入极弱酸性样品稀释液时，采用单一指示剂不能明显指示颜色变化，因为该操作中样品液在加入临床血清前后，PH的变化在0.05-0.1个单位。
但在酶联免疫试剂盒临床实际操作时，由于微孔反应板板孔多，每次血清加样量小，只有5微升，加入血清与否肉眼无法直观判断，所以临床操作中容易发生漏加血清或重复加血清的差错。如果能使微量血清加入样品液后有直观的颜色变化，临床操作时就不容易再出差错。
本发明的目的就是提供一种灵敏变色的变色剂，用它加入试剂盒样品液后，样品液成为一种能长期稳定存放的可变色样品液，试剂盒使用者在用这种样品液操作时不会漏加血清样品，也不会重复加入血清样品。
现已发现，将两种单色酸碱指示剂按一定比例混合就能形成一种灵敏指示微小酸度变化的变色剂。
根据本发明，上述变色剂组合物中包括有机指示剂(A)和有机指示剂(B)。组分(A)为(i)或(ii)。(i)的结构式为
式中R1代表H，Na，K；R2代表溴基或H；(ii)结构式如下
式中R3代表H，Na，K；组分(B)为另一种有机指示剂，其结构式为
其中R4代表I或Cl；这两种组分均为常用酸碱指示剂，一般均有市售。
组分(A)用无水乙醇或稀碱溶液配制，乙醇兑水浓度为40-60％，最好为60％，稀碱浓度为0.1M-1.0M，最好使用0.1M NaOH，(A)组分固体指示剂含量为0.1-2％，最佳含量为1.0％；组分(B)用无水醇或稀碱溶液配制，采用乙醇兑水浓度为40-60％，最好为60％，稀碱浓度为0.1M-1.0M，最好为0.1M NaOH，(B)组分固体指示剂含量为0.1-2％，最佳含量为0.1％。
本发明组合物由上述(A)的溶液与(B)的溶液按一定体积配制，VA/VB可以为5-20，最佳比例为VA/VB＝10。
本发明变色剂在酶联免疫诊断试剂盒中使用时直接加入样品稀释液使用，配比浓度为2.0％-0.05％，最佳为1％，即每100毫升样品液加1毫升变色剂。
本发明叙述了变色剂的组成，各组分结构特征及在组合物所占比例，以及该变色剂的配制方法和在酶联免疫诊断试剂盒的使用方法。
本发明提出的组合物可应用于酸度变化为0.05-0.10个PH单位的变色指示，尤其适用于酶联免疫诊断试剂盒中样品液的加血清变色显示中。采用本发明变色剂配制成的样品稀释液配色稳定，临床操作加入微量血清即有直观颜色变化，防止漏加血清或重复加入血清的差错发生。
实施例
以下所述实施例说明了本发明。但本发明不仅限于下述实施例。
准确称取溴甲酚紫1.000克固体，用60毫升无水乙醇溶解，再加纯水定溶至100毫升，即得本发明中(A)式的指示剂溶液，再准确称取0.100克中性红固体，用40毫升无水乙醇溶解，再加纯水定容至100毫升，即得符合本发明中(B)式的指示剂。然后取上述10毫升溴甲酚紫指示剂加入100毫升上述中性红乙醇液指示剂，充分混匀，即得本发明所述变色指示剂。
按以下组分配制酶联免疫试剂盒样品稀释液(纯水定溶至100毫升)
为了观察本发明变色剂能否适应实际应用酸度略有不同的样品稀释液，采用几种不同动物血清配制成五种酸度略有差异的样品稀释液，编号为①、②、③、④、⑤，取上述五种样品稀释液各100ml加入1ml本发明变色指示剂，结果均得一呈玫瑰红色半透明液体，用酸度计测这五种变色样品稀释液酸碱度，然后在96孔微孔反应板中各加入100μl该样品稀释液，分别按编号加入临床血清，各孔加5μl，观察颜色变化，记录结果如下
权利要求
1.一种变色剂组合物，包括有机指示剂(A)和有机指示剂(B)，组分(A)为(i)或(ii)，其中(i)的通式为
式中R1代表H，K，Na；R2代表溴基或H，(ii)为结构式为
式中R3代表H，K，Na；组分(B)的结构式为
其中R4代表I或Cl。
2.按照权利要求1所述组合物，其中组分(A)中含固体指示剂的含量为0.10-2.0％，最佳含量为1.0％。
3.按照权利要求1-2所述组合物，其中组分(A)用无水乙醇或稀碱溶液配制，无水乙醇加纯水的浓度为40-60％，最佳为60％，稀碱浓度为0.1M-1.0M，最佳为0.1MNaOH。
4.按照权利要求1所述组合物，其中组分(B)含固体指示剂的含量为0.1-2.0％，最佳含量为0.1％。
5.按照权利要求1～4所述组合物，其中组分(B)用无水乙醇或稀碱溶液配制，乙醇兑水浓度为40-60％，最佳为60％；稀碱浓度为0.1M-1.0M，最佳为0.1MNaOH。
6.按照权利要求1所述组合物，本发明由(A)的溶液与(B)的溶液按一定体积配制，VA/VB可以为5～20，最佳比例VA/VB为10。
7.按照权利要求1～6所述任何一种组合物用于酶联免疫诊断试剂样品稀释液加血清变色显示。
8.按照权利要求1～7所述组合物，用于酶联诊断试剂盒本发明变色组合物按100～200毫升样品稀释液加1毫升本发明变色组合物，其中最佳为每100毫升样品稀释液加入1毫升本发明变色组合物。
9.按照权利要求1～7所述组合物用于酸联免疫诊断试剂盒时，样品稀释液的PH值可以为7.00-7.30，其中最佳为7.20。
10.按照权利要求1～8所述组合物，本发明适用于任何一种酸度变化为0.05-0.10个PH单位的变色要求。
全文摘要
本发明变色剂组合物中包括两种有机指示剂溶液,其中一种为溴甲酚紫或间甲酚紫或对硝基苯酚的醇或稀碱溶液。另一种为中性红的醇或稀碱溶液。该变色剂组合物可以有效地应用于酶联免疫诊断试剂盒样品稀释液加血清变色显示,能有效防止临床操作中漏加血清或重复加血清的差错。
文档编号G01N33/531GK1201907SQ9710446
公开日1998年12月16日 申请日期1997年6月9日 优先权日1997年6月9日
发明者金红军, 汪建, 李志杰, 张久春, 熊云陵 申请人:金红军