专利名称：一种心可舒制剂指纹图谱的测定方法
技术领域：
本发明涉及以天然植物药材原料制成的心可舒制剂HPLC指纹图谱的构建方法， 以及由此法所得到的心可舒制剂HPLC标准指纹图谱。
背景技术：
心可舒制剂是由多种天然中药材经精工制作而成的中药复方制剂，现已证明其含有多种生物活性物质。主要成分包括丹参、葛根、三七、木香、山楂。药理及动物实验证实心可舒制剂具有活血化瘀，行气止痛之功能，达到增加冠脉流量，改善心肌的供血、供氧，改善左室做功，使心脏的“泵”功能加强而起到显著的治疗作用。冠心病心绞痛的基本病理过程是在冠状动脉痉挛，粥样硬化的基础上发生心肌氧代谢供需失调，供血不足，耗氧量增加是缺血性心脏病的主要因素。理想而有效的治疗药物是以增加冠状动脉血流量的同时又降低心肌耗氧量，在某些状态下降低心肌耗氧尤为重要。而心可舒制剂不但具有以上治疗特性，并对改善心肌的营养状态，增强心肌抗缺血能力，以及对由垂体后叶素引起的心肌缺血有明显的保护作用。通过临床观察治疗结果证实，心可舒制剂治疗冠心病疗效显著，对冠心病心绞痛缩短疗效时间，迅速缓解症状、病情，减轻患者痛苦和经济负担，提高生活质量起到其他抗冠心病心绞痛类药物无法比拟和替代的良好作用。心可舒制剂对心血管病具有标本兼治的独特作用，重在治本，因此远期疗效尤为突出，随用药持续时间的延长，疗效越加显著，无明显不良反应。对老年慢性病，如糖尿病， 高血脂、哮喘及外周血管病变患者无禁忌。心可舒制剂比β受体阻滞剂更适宜冠心病患者长期治疗，克服β受体阻滞剂用药过程中需慎重调整剂量的麻烦，所以是慢性患者长期治疗的新一代广谱高效的血管类药物。自心可舒制剂上市以来，因其治疗效果好，见效快，价格便宜，受到了广大患者的好评。随着科技不断创新和发展，发明人又对心可舒制剂做了更加深入的研究，为提高测定心可舒制剂的有效成分及其含量的准确性，本发明提供一种检测更加准确、操作更加便捷、快速的心可舒制剂HPLC指纹图谱的测定方法。

发明内容
本发明的目的在于提供一种心可舒制剂HPLC指纹图谱的测定方法，通过此测定方法，可控制心可舒制剂质量；本发明所述的心可舒制剂可以为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂等所有口服制剂。指纹图谱是将供试品和对照品的标准图谱相对照的技术，包括标准图谱的建立和供试品实际测定技术。本发明的心可舒制剂HPLC指纹图谱的比较测定方法如下(1)心可舒制剂供试品溶液的制备称取本品研燥细粉(液体制剂真空干燥后研细粉)，精密称取0. Ig置IOml量瓶中，精密加入70% (ν/ν)的甲醇5ml，密塞，称定重量， 超声处理20分钟，静置放冷，称重，70 %甲醇补足减失的重量，离心lOmin，取上清液，过 0. 45 μ m滤膜，即得。(2)对照品溶液的制备精密称取原儿茶醛、葛根素、大豆苷、大豆苷元、丹酚酸B 适量，加甲醇使溶解，精密称取丹参素钠适量，加30 %甲醇使溶解，分别制成对照品溶液； 原儿茶醛、葛根素、大豆苷、大豆苷元、丹酚酸B、丹参素钠分别为原儿茶醛为21yg/ml，葛根素为79 μ g/ml，大豆苷为50 μ g/ml，大豆苷元为50 μ g/ml，丹酚酸B为130 μ g/ml，丹参素钠为70yg/ml。(3)心可舒制剂中成分的定性定量测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ 1，进样，用高效液相色谱仪测定，得到色谱图，以对照品的色谱峰相对保留时间和峰面积为1，计算供试品的相对保留时间和相对峰面积；以定性定量，同时比较供试品的指纹图谱，对照品的指纹图谱和标准指纹图谱；其中所述高效液相色谱仪中的色谱柱，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相乙腈磷酸水。磷酸水(％ )92 10 乙腈(％ )8 90 ；线性梯度洗脱；T(min) 0 120 ；柱温10 50 0C ；检测波长278nm ；其中所述标准指纹图谱用以下方法建立，取10批心可舒制剂的，分别按上述供试品溶液的制备方法制得供试品溶液，根据检测所得的10批检测数据，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A》进行评价，在278nm检测波长下的相似度大于0. 9的图谱为标准指纹图谱；其中所述标准指纹图谱在278nm检测波长下的指纹图谱具有14个特征峰，其中归属山楂的有2个特征峰；归属丹参的有3个特征峰；归属葛根的有7个特征峰；4号峰为丹参素，5号峰为原儿茶醛，7号峰为葛根素，11号峰为大豆苷，12号峰为丹酚酸B，13号峰为大豆苷元；一般来说，标准标准指纹图谱和对照品的指纹图谱应重合，该图谱对于同一产品具有唯一性，可以用来判断被测样品中是否含有对照品成分及其含量。本发明的测定方法，采用高效液相色谱法，其色谱条件优选为色谱柱为Phenomenex Luna C-18 (4. 6 X 250mm ；5 μ m)；Agilent Hypersil C-18 (4. 6X 250mm ；5 μ m)；Diamonsil C-18 (4. 6 X 250mm ；5 μ m)；Elite Lichrosorb Rp-18e (4.6X250mm ；5 μ m)；Merck Lichrospher Rp_18e (4. 6X 250mm ；5 μ m)柱温30°C，流动相A为乙腈，B为磷酸水，洗脱方式梯度洗脱，流动相流速1.Oml/min,进样量10μ 1。其中，所述流动相A为乙腈，流动相B为0. 05%磷酸水溶液。其中，所述梯度洗脱时间为50-100分钟，优选为70-80分钟，进一步优选为75分钟。优选的，本发明的色谱条件为色谱柱:Phenomenex Luna C-18 (4. 6X 250mm ；5 μ m)，流动相乙腈-0. 05 %磷酸水，流动相A为乙腈，流动相B为0. 05 %磷酸水溶液，洗脱方式梯度洗脱，检测波长278nm，柱温30°C，流速 l.Oml/min，进样量 10 μ 1，理论塔板数按葛根素峰计算不低于50000，与其它峰的分离度均大于1. 0，所有组分均在60min内被检测完。其中，梯度洗脱过程如下
权利要求
1.一种心可舒制剂指纹图谱的测定方法，其特征包括以下步骤(1)心可舒制剂供试品溶液的制备称取本品研燥细粉(液体制剂真空干燥后研细粉)，精密称取0. Ig置IOml量瓶中，精密加入70% (ν/ν)的甲醇5ml，密塞，称定重量，超声处理20分钟，静置放冷，称重，70%甲醇补足减失的重量，离心lOmin，取上清液，过0. 45 μ m 滤膜，即得；(2)对照品溶液的制备精密称取原儿茶醛、葛根素、大豆苷、大豆苷元、丹酚酸B适量， 加甲醇使溶解，精密称取丹参素钠适量，加30%甲醇使溶解，分别制成对照品溶液；原儿茶醛、葛根素、大豆苷、大豆苷元、丹酚酸B、丹参素钠分别为原儿茶醛为21 μ g/ml，葛根素为 79 μ g/ml，大豆苷为50 μ g/ml，大豆苷元为50 μ g/ml，丹酚酸B为130 μ g/ml，丹参素钠为 70 μ g/ml ；(3)心可舒制剂中成分的定性定量测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 ομ 1，进样，用高效液相色谱仪测定，得到色谱图，以对照品的色谱峰相对保留时间和峰面积为1，计算供试品的相对保留时间和相对峰面积；同时比较供试品的指纹图谱，对照品的指纹图谱和标准指纹图谱；其中所述高效液相色谱仪中的色谱柱，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相 乙腈磷酸水，磷酸水(％ )92 10 乙腈(％ )8 90 ；线性梯度洗脱；T(min) 0 120 ； 柱温10 50°C ；检测波长278nm ；其中所述标准指纹图谱用以下方法建立，取10批心可舒制剂的，分别按上述供试品溶液的制备方法制得供试品溶液，根据检测所得的10批检测数据，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A》进行评价，在278nm检测波长下的相似度大于0. 9的图谱为标准指纹图谱；其中所述标准指纹图谱在278nm检测波长下的指纹图谱具有14个特征峰，其中归属山楂的有2个特征峰；归属丹参的有3个特征峰；归属葛根的有7个特征峰；4号峰为丹参素， 5号峰为原儿茶醛，7号峰为葛根素，11号峰为大豆苷，12号峰为丹酚酸B，13号峰为大豆苷兀。
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，高效液相色谱法的色谱条件为色谱柱为:Phenomenex Luna C-18 柱，(250X4. 6mm, 5 μ m),柱温30°C，流动相A为乙腈，B为磷酸水，洗脱方式梯度洗脱，流动相流速1.0ml/min，进样量10μ1。
3.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述流动相A为乙腈，流动相B为 0. 05%磷酸水溶液。
4.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述梯度洗脱时间为50-100分钟。
5.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述梯度洗脱时间为70-80分钟。
6.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述梯度洗脱过程为时间(分钟)流动相A流动相B0-218 12%92% 88%21-3112% 17%88% 83%31-5517 38%83% 62%55-6538% 90%62% 10%65-7590%10%
7.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，高效液相色谱法的色谱条件为 色谱柱为 Phenomenex Luna C-18 柱，Q50X4. 6mm，5 μ m)；流动相乙腈 _0· 05%磷酸水，流动相A为乙腈，流动相B为0. 05 %磷酸水溶液，洗脱方式梯度洗脱，检测波长278nm， 柱温30°C，流速1. Oml/min,进样量10 μ 1，理论塔板数按葛根素峰计算不低于50000，与其它峰的分离度均大于1. 0，所有组分均在60min内被检测完， 其中，梯度洗脱过程如下时间(分钟)流动相A流动相B0-218 12%92% 88%21-3112% 17%88% 83%31-5517 38%83% 62%55-6538% 90%62% 10%65-7590%10%
8.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，包括以下步骤(1)制备供试品溶液，(2)制备对照品溶液，(3)取上述溶液，分别注入高效液相色谱仪进行测定，得到色谱图，(4)比较上述溶液的色谱图，即可， 其中，步骤1)供试品溶液的制备取心可舒片粉碎至细粉约0. lg，精密称定，置IOml量瓶中，精密加入70%甲醇5ml， 密塞，称定重量，超声处理20min，放冷，再称定重量，用70 %甲醇补足减失的重量，离心 IOmin,取上清液，过O. 45 μ m微孔滤膜，即得， 其中，步骤2、对照品溶液的制备精密称取原儿茶醛、葛根素、大豆苷、大豆苷元、丹酚酸B适量，加甲醇使溶解，精密称取丹参素钠适量，加30%甲醇使溶解，分别制成对照品溶液原儿茶醛、葛根素、大豆苷、大豆苷元、丹酚酸B、丹参素钠分别为21 μ g/ml，葛根素为79μ g/ml，大豆苷为50μ g/ml，大豆苷元为50 μ g/ml，丹酚酸B为130 μ g/ml，丹参素钠为70 μ g/ml， 其中，步骤幻高效液相色谱条件色谱条件色谱柱为Phenomenex Luna C-18柱Q50 X 4. 6mm, 5 μ m)；流动相乙腈-0. 05%磷酸水，流动相A为乙腈，流动相B为0. 05%磷酸水溶液，洗脱方式梯度洗脱， 检测波长278nm，柱温30°C，流速1. Oml/min，进样量10 μ 1，理论塔板数按葛根素峰计算不低于2000，与其它峰的分离度均大于1. 0，所有组分均在60min内被检测完，其中，梯度洗脱过程如下
9.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，选择75min作为图谱的分析时间。
10.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，其中心可舒制剂可以为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂等所有口服制剂。
全文摘要
本发明涉及一种药用制剂的检测方法，具体涉及一种中药制剂心可舒指纹图谱的测定方法。本发明主要采用高效液相色谱法检测，色谱柱为PHENOMENEX LUNAC-18柱；流动相乙腈-0.05％磷酸水，流动相A为乙腈，流动相B为0.05％磷酸水溶液，检测波长278nm，柱温30℃，流速1.0ml/min，进样量10μl，理论塔板数按葛根素峰计算不低于2000，与其它峰的分离度均大于1.0，所有组分均在60min内被检测完。
文档编号G01N30/74GK102183590SQ20111003306
公开日2011年9月14日 申请日期2011年1月31日 优先权日2011年1月31日
发明者曾英姿, 王培 , 臧恒昌 申请人:山东沃华医药科技股份有限公司