专利名称：一种检测白木香是否产生沉香的方法
技术领域：
本发明属于生物化学领域，具体涉及一种检测白木香是否产生沉香的方法。
背景技术：
沉香(AquilariaResin、Aloeswood、Agarwood 或 Eaglewood)是具有悠久应用历史的传统名贵药材以及名贵天然香料、木料。沉香入药的历史久远，在中国和日本至少有3000年的历史。《本草纲目》中记载沉香能“治上热下寒，气逆喘急，大肠虚闭，小便气淋，男子精冷”。沉香性辛，微温，无毒，具有行气镇痛、温中止呕、纳气平喘等功效，对于治疗腹胀、胃寒、肾虚、气喘有明显疗效，自古以来，沉香通常被加工成传统中药饮片，目前沉香是160多个中成药的组方原料，《中国基本中成药》中使用沉香的中成药达47种。沉香还是一种在亚洲广受欢迎和广泛应用的传统名贵香料，在熏烧时则香气浓郁，能覆盖其它气味，而且留香时间甚长，是制造香精油和天然香水的高档香料。沉香是佛教所供奉的七宝之一，象征修行者持戒清静之香，也可以说是解脱者心灵的芳香，被作为佛部的供养香料。沉香产生于瑞香科(Thymelaeaceae)植物中，能够产生沉香的树种约32个，其中沉香属(Aquilaria) 25个,拟沉香属(Gyrinops) 7个。我国主要以白木香[Aquilariasinensis (Lour. )Gilg]为主，又名土沉香，为热带及亚热带常绿乔木，是我国产沉香的唯一植物资源，分布于我国的广东、广西、海南、台湾及云南等地，也是广东道地药材“十大广药”之一。沉香树在自然条件下正常生长，木质白色，较为柔软，没有香气，不产生树脂，在自然界，沉香树因受到虫蚁、伤病等损害会分泌树脂，并浸润、沉积于木质部中，经多年结聚而成，树龄越长，香脂沉积越久，沉香品质越好。根据创伤能够刺激沉香树分泌树脂的经验，在生产实践中香农往往采用砍伤法、半断杆法、凿洞法、火烧法等人工造香技术来刺激白木香，一般能够导致结香。目前，经过若干年的发展，已发展了较为成熟的人工结香技术，在数个专利中也有详述。但目前的结香技术均面临一个重要的问题，即从外观很难辨别白木香树是否已经结香。传统方法是砍下已具有黑色树脂的心材部分，用火点燃，闻其气味，判断手感、质是否重。该方法具有较大的破坏性，易造成局部创面过大，虽凭经验不会影响植株的存活，但仍无法观察到树干上其他部位的结香情况，同时对沉香成品的商品性就有较大的影响。

发明内容
本发明的目的是提供一种快速的、非破坏性的检测白木香树中是否产生沉香的方法，利用该方法通过检测树叶中的一种或两种分子的含量即可确定沉香的形成情况，确定米收时间。本发明通过比较结香及未结香的白木香叶片中的化学成分含量的变化，发现了两种化学分子的含量与沉香的形成相关，可作为白木香产生沉香的信号，为快速的、非破坏性的沉香药材采收时间及质量评价提供依据，从而实现了本发明的目的。本发明的检测白木香是否产生沉香的方法，其特征在于，包括以下步骤，采集白木香树的树叶，测定树叶中是否含有生育酚，如果含有生育酚则该白木香树中产生了沉香，如果不含有生育酚则该白木香树中还没有产生沉香；或者采集白木香树的树叶，阴干后，测定阴干树叶中的角鲨烯含量，如果角鲨烯相对含量超过6%，则该白木香树中产生了沉香，如果角鲨烯相对含量没有超过6%则该白木香树中还没有产生沉香。所述的生育酚为a -生育酚、0 -生育酚和Y -生育酚中的一种或两种或三种。本发明的测定树叶中是否含有生育酚以及测定树叶中的角鲨烯含量可经由气相色谱-质联用仪(GC-MS)进行检测，其中生育酚还可以利用标准品进行比对的色谱方法进行测定。通过本发明的方法能快速的、在非破坏性的情况下检测白木香是否产生沉香，不影响白木香植株的生长，不会对未来产生沉香的商品性造成破坏，可同时检测大量样品，对于沉香药材标准化生产具有重要的应用价值。
具体实施例方式以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。实施例1 :取未结香的10月龄白木香苗的叶片，阴干，粉碎(过60目筛)，得叶片粉末。取白木香的叶片粉末约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入三氯甲烷50mL，密塞摇匀，称定重量，冷浸24h。超声30min，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，转移至ImL量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，用微孔滤膜过滤(0. 45 u m)，取续滤液。上样气相色谱-质联用仪，色谱条件为色谱柱为Varian CPsi15CB (30mX0. 25mmX0. 25 y m)弹性石英毛细管柱；进样口温度250°C;载气为高纯度氮气，流速1. OmL/min,进样量为I y L,不分流进样。升温程序90°C保温4min, 1°C /min升温至145°C保温30min, 2V /min升温至180°C保温lmin, 2V /min升温至230°C保温60min。质谱条件为离子源为EI ;电离能量70ev ;电离电压1977mV，离子温度171°C，溶剂延时4min ;质量扫描范围50 550m/z。通过HPMSD化学工作站，应用Wileyl38质谱数据库进行鉴定，并采用峰面积归一化法计算各化合物的相对百分含量。结果未检出a-生育酚、￠-生育酚、Y-生育酚，检出角鲨烯的相对含量为
1.126%。本实施例的白木香的叶片中不含有生育酚，角鲨烯的相对含量小于6%，由此推断，本实施例的白木香未结香，这与本实施例的白木香是未结香的白木香的结论一致。实施例2:取未结香的2年生白木香树的叶片，含量测定方法同实施例1。结果未检出a-生育酚、￠-生育酚、Y-生育酚，检出角鲨烯的相对含量为
2.437%。本实施例的白木香的叶片中不含有生育酚，角鲨烯的相对含量小于6%，由此推断，本实施例的白木香未结香，这与本实施例的白木香是未结香的白木香的结论一致。实施例3:取未结香的4年生白木香树的叶片，含量测定方法同实施例1。

结果未检出a-生育酚、￠-生育酚、Y-生育酚，检出角鲨烯的相对含量为
4.197%。本实施例的白木香的叶片中不含有生育酚，角鲨烯的相对含量小于6%，由此推断，本实施例的白木香未结香，这与本实施例的白木香是未结香的白木香的结论一致。实施例4 取未结香的10年生白木香树的叶片，含量测定方法同实施例1。结果未检出a-生育酚、￠-生育酚、Y-生育酚，检出角鲨烯的相对含量为
4.803%。本实施例的白木香的叶片中不含有生育酚，角鲨烯的相对含量小于6%，由此推断，本实施例的白木香未结香，这与本实施例的白木香是未结香的白木香的结论一致。实施例5 取未结香的15年生白木香树的叶片，含量测定方法同实施例1。结果未检出a-生育酚、￠-生育酚、Y-生育酚，检出角鲨烯的相对含量为
3.825%。本实施例的白木香的叶片中不含有生育酚，角鲨烯的相对含量小于6%，由此推断，本实施例的白木香未结香，这与本实施例的白木香是未结香的白木香的结论一致。实施例6 取4年生虫蛀后自然结香的白木香树的叶片，含量测定方法同实施例1。结果检出a -生育酚、0 -生育酚、Y-生育酚及角鲨烯的相对含量分别为4. 687%、
0.582%,0. 101% 及6. 336%。本实施例的白木香的叶片中含有生育酚，角鲨烯的相对含量大于6%，由此推断，本实施例的白木香已经产生沉香，这与本实施例的白木香是结香的白木香的结论一致。实施例7:取7年生虫蛀后自然结香的白木香树的叶片，含量测定方法同实施例1。结果检出a -生育酚、P -生育酚、Y-生育酚及角鲨烯的相对含量分别为3. 126%、
1.237%,0. 107%及8. 124%。本实施例的白木香的叶片中含有生育酚，角鲨烯的相对含量大于6%，由此推断，本实施例的白木香已经产生沉香，这与本实施例的白木香是结香的白木香的结论一致。实施例8 取35年生虫蛀后自然结香的白木香树的叶片，含量测定方法同实施例1。结果检出a -生育酚、P -生育酚、Y-生育酚及角鲨烯的相对含量分别为2. 146%、
0.107%,0. 104%及10. 227%。本实施例的白木香的叶片中含有生育酚，角鲨烯的相对含量大于6%，由此推断，本实施例的白木香已经产生沉香，这与本实施例的白木香是结香的白木香的结论一致。实施例9 取35年生刀砍(物理损伤)后结香的白木香树叶,含量测定方法同实施例1。结果检出a -生育酚、P -生育酚、Y-生育酚及角鲨烯的相对含量分别为0. 716%、
1.794%、1. 835%及7. 495%。本实施例的白木香的叶片中含有生育酚，角鲨烯的相对含量大于6%，由此推断，本实施例的白木香已经产生沉香，这与本实施例的白木香是结香的白木香的结论一致。实施例10 取6年生人工接种镰刀菌(Fusarium sp.)后结香的白木香树的叶片,含量测定方法同实施例1。结果检出a -生育酚、0 -生育酚、Y -生育酚及角鲨烯的相对含量分别为5. 632%、0.709%,2. 195%及15. 427%。本实施例的白木香的叶片中含有生育酚，角鲨烯的相对含量大于6%，由此推断，本实施例的白木香已经产生沉香，这与本实施例的白木香是结香的白木香的结论一致。
权利要求
1.一种检测白木香是否产生沉香的方法，其特征在于，包括以下步骤，采集白木香树的树叶，测定树叶中是否含有生育酚，如果含有生育酚则该白木香树中产生了沉香，如果不含有生育酚则该白木香树中还没有产生沉香；或者采集白木香树的树叶，阴干后，测定阴干树叶中的角鲨烯含量，如果角鲨烯相对含量超过6%，则该白木香树中产生了沉香，如果角鲨烯相对含量没有超过6%则该白木香树中还没有产生沉香。
2.根据权利要求1所述的检测白木香是否产生沉香的方法，其特征在于，所述的生育酚为a-生育酚、0 -生育酚和Y-生育酚中的一种或两种或三种。
3.根据权利要求1所述的检测白木香是否产生沉香的方法，其特征在于，所述的测定树叶中是否含有生育酚以及测定阴干树叶中的角鲨烯含量是经由气相色谱-质联用仪进行检测。
4.根据权利要求1所述的检测白木香是否产生沉香的方法，其特征在于，所述的测定树叶中是否含有生育酚是利用标准品进行比对的色谱方法进行测定。
全文摘要
本发明公开了一种检测白木香是否产生沉香的方法。它是采集白木香树的树叶，测定树叶中是否含有生育酚，如果含有生育酚则该白木香树中产生了沉香，如果不含有生育酚则该白木香树中还没有产生沉香；或者采集白木香树的树叶，阴干后，测定阴干树叶中的角鲨烯含量，如果角鲨烯相对含量超过6%，则该白木香树中产生了沉香，如果角鲨烯相对含量没有超过6%则该白木香树中还没有产生沉香。通过本发明的方法能快速的、在非破坏性的情况下检测白木香是否产生沉香，不影响白木香植株的生长，不会对未来产生沉香的商品性造成破坏，可同时检测大量样品，对于沉香药材标准化生产具有重要的应用价值。
文档编号G01N30/02GK103063773SQ20121057604
公开日2013年4月24日 申请日期2012年12月26日 优先权日2012年12月26日
发明者王磊, 高晓霞, 章卫民, 潘清灵, 吴关庆 申请人:广东省微生物研究所