专利名称：一种检测髓过氧化物酶的试剂盒的制作方法
技术领域：
一种检测髓过氧化物酶的试剂盒技术领域[0001]本发明涉及一种试剂盒，特别是涉及一种检测髓过氧化物酶同型或亚型的免疫快速检测试剂盒。
背景技术：
[0002]髓过氧化物酶(myeloperoxidase, ΜΡ0)是中性粒细胞嗜天青颗粒产生的一种重要的过氧化物酶，主要存在于嗜中性粒细胞和单核细胞中。成熟的MPO由两个亚单位聚合而成，每个亚单位由一个59-64kDa的重链和一个14kDa的轻链构成，每个亚单位中含有一个共价结合的血红素，具有MPO特有的绿色光谱特性。MPO能催化过氧化氢与氯的反应产生次氯酸，具有很强的抗微生物作用，在机体产生和调节炎症反应方面发挥作用。然而，MPO 催化反应生成过量的氧化剂时，会导致氧化应激和氧化性组织损伤。[0003]髓过氧化物酶的活性与人类多种疾病的发生、发展密切相关，神经炎症疾病方面包括多发性硬化症，阿尔茨海默氏症，帕金森氏症和中风等。其他炎性疾病如慢性阻塞性肺病，囊肿性纤维化，动脉粥样硬化，炎症性肠病，疾病，肾小球损伤和类风湿关节炎。肺癌也显示和MPO水平升高有关。此外，根据之前的研究显示，MPO水平和心血管疾病密切相关。然而，这些以往的研究都没有涉及MPO同型和/或亚型与特定的疾病状态存在具体相关。[0004]目前，用于检测MPO的方法有酶联免疫吸附法、光激化学发光检测法、流式细胞仪测定法、毛细管电泳法等，这些方法操作复杂、反应时间长，且均未涉及到对MPO同型或亚型的检测。因此，急需一种专门检测MPO同型或亚型的检测方法，用于鉴定过敏症、炎症、心血管疾病或自身免疫性疾病的状态。同时，本发明试剂盒操作时间短，结果客观可靠，操作简便、不需要配备复杂仪器设备，结果直观肉眼可判断。发明内容[0005]本实用新型的目的在于提供一种特异性强，灵敏度高，操作简便、快速、高效、准确的检测髓过氧化物酶同型或亚型的免疫快速检测试剂盒，辅助诊断或预后过敏性疾病、炎症性疾病、心血管疾病或自身免疫性疾病的状态。[0006]本实用新型提供的检测髓过氧化物酶同型或亚型的免疫快速检测试剂盒，包括塑料盒体、衬垫、附着在衬垫上依次相连的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜检测层和吸收垫。衬垫的两端，分别设有样品垫和吸收垫；衬垫中部设有硝酸纤维素膜检测层。硝酸纤维素膜检测层与样品垫交界处，设有包被金标记的抗髓过氧化物酶同型或亚型抗体的金标垫。金标垫一端部分设置在样品垫之下，另一端部分设置在硝酸纤维素膜检测层之上。在与样品垫延续的检测层上设有检测线T和质控线C，检测线上包被有抗髓过氧化物酶同型或亚型抗体，质控线上包被有羊抗鼠IgG。[0007]所述金标垫设置在样品垫之下，与样品垫设有5_的重叠区；所述金标垫设置在硝酸纤维素膜检测层之上，与硝酸纤维素膜检测层设有2mm的重叠区，重叠区保证样品在样品垫、金标垫和检测层上无阻碍地流动。[0008]所述塑料盒体用于固定盒体内衬垫，盒体上设置加样区和检测观察区，用于滴加样品、观测检测结果。[0009]所述衬垫为PVC板，也可以代之以不吸水的硬质材料，用于固定盒内各组建。[0010]所述金标垫上抗髓过氧化物酶同型或亚型抗体的金标记为胶体金颗粒，也可以代之以荧光颗粒、乳胶颗粒、磁性颗粒或其他有色颗粒。[0011]本实用新型试剂盒具有如下有益效果[0012](I)检测速度快。全过程只需10分钟，可以实现单个样品或大量样品的检测；[0013](2)灵敏度高。最低检测单位为ng/ml ；[0014](3)特异性强。和其他心力衰竭标志物无交叉反应；[0015](4)操作简捷。检测过程无需其他试剂，样品无需特殊处理，可肉眼观测也可结合仪器使用。[0016](5)结果判断方便。快速检测试剂盒以肉眼可见的红色印记作为结果判断标准，即检测层上只有质控线(C线)显示红色，表示样品不含髓过氧化物酶同型或亚型，检测线(T 线)和控制线(C线)上均显示红色，表示样品含有髓过氧化物酶同型或亚型。结果判断明确、直观。[0017](6)检测样品范围广。全血、血浆、血清、细胞提取物或组织提取物均可用作试验样本，所需试剂和样品量少，样品量最低可至50-100 μ L。


[0018]图I为本实用新型的结构示意图，其中I为样品垫、和吸收垫，2为金标垫、，3为硝酸纤维素膜检测层，4为检测线Τ，5为质控线C，6为吸收垫，7为衬垫。[0019]图2为本实用新型的检测结果判读示意图，图2. a为阳性结果，图2. b为阴性结果，图2. c结果无效，图2. d结果无效。其中8为观察区，9为加样区，10为塑料盒体，T为检测线，C为质控线。
具体实施方式
[0020]
以下结合附图和实施例详细描述本实用新型试剂盒的结构和使用方法。[0021]如图I显示的本实用新型试剂盒的结构示意图衬垫7由PVC板制成，衬垫7的两端，分别设有样品垫I和吸收垫6，衬垫7中部设有硝酸纤维素膜检测层3。硝酸纤维素膜检测层3与样品垫I交界处，设有包被金标记的抗髓过氧化物酶同型或亚型抗体的金标垫 2，金标垫2 —端部分设置在样品垫I之下，另一端部分设置在硝酸纤维素膜检测层3之上。 在与样品垫I延续的检测层3上设有检测线T4和质控线C5，检测线4上包被有抗髓过氧化物酶同型或亚型抗体，质控线5上包被有羊抗鼠IgG。金标垫2设置在样品垫I之下，与样品垫设有5_的重叠区；金标垫2设置在硝酸纤维素膜检测层3之上，与硝酸纤维素膜检测层设有2mm的重叠区。[0022]使用本实用新型试剂盒检测髓过氧化物酶同型或亚型实施例[0023]样本采集于晨起7 10时对患者进行空腹抽前臂血，立即加入EDTA或肝素等抗凝剂，离心后取血清置于-20°C备检。[0024]检测方法[0025]将试剂盒平放，取待测样品缓慢滴加4-5滴于试剂盒的加样区中(尽量滴加于加样区中部，以保证测试结果准确)，静置等待10分钟。在吸水材料的作用下，待检样品缓慢移动到检测区和质控区，膜反应体系启动。无论待检样本中有无髓过氧化物酶同型或亚型， 质控区处都应显现一条颜色条带，这是重要的判断标准，可以确定是否加入足够量的样品， 层析过程是否正常，同时也可以作为判断检测盒是否合格的一个内在标准。[0026]结果判定[0027]I.若待检样品中髓过氧化物酶同型或亚型的浓度高于检测阈值时，即样品中的髓过氧化物酶同型或亚型与固定在膜上的检测区内的单抗结合，因而检测区内会出现一条红色检测带，表示阳性(+)结果，即在质控区内和检测区内内均出现一条颜色条带，如图2.a 所示。(注意由于待检样品中髓过氧化物酶同型或亚型的浓度有所不同，因而测试区内的颜色条带可能出现颜色深浅的现象。但是，在一定时间内，不论测试区内的颜色条带颜色深浅，都可判定为阳性。)[0028]2.在层析过程中，若待测的外周血样品中不含有髓过氧化物酶同型或亚型或其浓度低于检测灵敏度时，即样本中没有特异性抗原与膜上的检测带内的单抗发生免疫反应， 因而检测区内不会出现一条颜色检测带，表示阴性(_)结果，即仅在质控区内出现一条颜色带,如图2. b所示。[0029]3.若质控区未出现颜色条带，则检测过程失败。可能的原因为操作过程不正确、试剂盒已变质损坏或出现质量问题，如图2. c和2. d所示。[0030].取本实施例所述的试剂盒对10份急性冠状动脉综合症(ACS)患者血样和6份正常人血样随机采集外周血标本，盲检结果如下[0031]
权利要求1.一种检测髓过氧化物酶的试剂盒，包括塑料盒体、衬垫、附着在衬垫上依次相连的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜检测层和吸收垫，其特征在于衬垫的两端，分别设有样品垫和吸收垫，衬垫中部设有硝酸纤维素膜检测层，硝酸纤维素膜检测层与样品垫交界处，设有包被金标记的抗髓过氧化物酶同型或亚型抗体的金标垫，金标垫一端部分设置在样品垫之下，另一端部分设置在硝酸纤维素膜检测层之上，在与样品垫延续的检测层上设有检测线T和质控线C，检测线上包被有抗髓过氧化物酶同型或亚型抗体，质控线上包被有羊抗鼠IgG0
2.如权利要求I所述的试剂盒，其特征在于所述金标垫设置在样品垫之下，与样品垫设有5_的重叠区；所述金标垫设置在硝酸纤维素膜检测层之上，与硝酸纤维素膜检测层设有2mm的重叠区。
3.如权利要求I所述的试剂盒，其特征在于所述塑料盒体上设置加样区和观察区。
4.如权利要求I所述的试剂盒，其特征在于所述衬垫为PVC板，也可以代之以不吸水的硬质材料。
5.如权利要求I所述的试剂盒，其特征在于所述金标垫上抗髓过氧化物酶同型或亚型抗体的金标记为胶体金颗粒，也可以代之以荧光颗粒、乳胶颗粒、磁性颗粒或其他有色颗粒。
专利摘要本实用新型提供一种检测髓过氧化物酶的试剂盒，包括塑料盒体、衬垫、附着在衬垫上依次相连的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜检测层和吸收垫。衬垫的两端分别设有样品垫和吸收垫，衬垫中部设有硝酸纤维素膜检测层。检测层与样品垫交界处，设有包被金标记的抗髓过氧化物酶同型或亚型抗体的金标垫，金标垫一端设置在样品垫之下，另一端设置在检测层之上。检测层上设有检测线和质控线，检测线包被有抗髓过氧化物酶同型或亚型抗体，质控线包被有羊抗鼠IgG。本实用新型试剂盒灵敏度高、操作简捷、结果判断方便、检测样品范围广，用于辅助诊断或预后过敏性疾病、炎症性疾病、心血管疾病或自身免疫性疾病的状态，具有良好的经济效益和社会效益。
文档编号G01N33/544GK202814978SQ201220465120
公开日2013年3月20日 申请日期2012年9月7日 优先权日2012年9月7日
发明者张开山, 苏广宇, 高阳, 刘碧莲 申请人:杭州华得森生物技术有限公司