专利名称：一种应用代谢组学技术预测猪日粮代谢能水平的方法
技术领域：
本发明涉及一种应用代谢组学技术预测猪日粮代谢能水平的方法。
背景技术：
能量是饲料的重要营养成分，动物的营养需要或营养供给均以能量为基础，能量饲料同时也在饲料成本中占据最大比例。近年来，由于玉米等原料在生产工业酒精等方面的应用，造成能量饲料出现短缺、价格越来越昂贵的现象。因此，如何在饲料中合理的利用能量，既满足仔猪对于能量的需要，又能避免能量饲料的浪费，就显得尤为重要。在目前集约化的养猪生产中，通常按照全进全出的工艺流程实现猪群在生产线上正常周转，同一批猪饲喂相同代谢能水平的日粮。这种生产工艺忽略了猪个体和亚群体的差异，以及不同猪场和环境对猪代谢能营养需要的影响。在养猪生产中，个体差异以及不同猪场和环境，会使相同的营养状况产生不同的代谢物谱系及生产性能；同样，不同的营养供给也会产生特异性的代谢物谱及生产性能。也就是说同样的能量水平对于不同的猪群来说，有效能值可能不同。因此，不同个体或亚群体、不同环境、不同健康状况的猪对日粮代谢能的需要是不同的。如果在配制日粮时没有考虑到其有效能值的变异，日粮的实际能值与期望能值间会有差异，若实际能值大于期望能值，则会造成饲料资源的浪费，甚至造成污染环境；若实际能值小于期望能值，则会降低或抑制猪的生产性能。动物营养学研究日益精细化，精确确定营养素的需要量来调控动物生长已成为国内外研究热点。为了降低饲料成本、节约饲料资源及减少养猪产业对环境的负面影响，在猪日粮配制过程中采用原料精确的有效能值是至关重要的。体内法测定原料有效能值费时费力且成本高，建立动态回归模型从而实现通过测定原料营养成分而预测其能值的方法也存在预测准确率低等缺点。代谢组学是定量分析生物体内源代谢产物种类、数量及其变化规律的科学，它通过测定代谢终产物来了解生物体的状况及内外因素引发的变化结果。由于其高通量的信息学特性及其基础上的模式识别优势，已被人类营养学家用于食谱、生活方式等因素与代谢物谱型之间的相关性研究，并试图将代谢组的识别模式作为人营养状况评价的新标准，实现个体或亚群体食谱推荐。由于研究对象的特殊性，无法进行人为的食谱操作，标志物的鉴定依赖于临床营养调查与分析，进展非常缓慢。迄今为止，还没有利用代谢组学数据建立血浆代谢标志物与日粮有效能值(代谢能、消化能和净能等)的动态回归预测方程，来准确预测仔猪日粮有效能值的报道。

发明内容
本发明的一个目的是提供定量检测如下I) 一6)中任一所述化合物组的产品或方法在检测或辅助检测猪所饲喂日粮的代谢能值中的应用:1)化合物 LLL ；2 )化合物LLL和化合物MLC ；
3)化合物LLL、化合物GPO和化合物ALL ；4)化合物LLL、化合物GPO、化合物ALL和脯氨酸；5)化合物LLL、化合物GP0、化合物ALL、化合物LPC、精氨酰苯丙氨酰精氨酸、化合物 GPl ；6)化合物LLL、化合物GP0、化合物ALL、脯氨酸、化合物LPC、精氨酰苯丙氨酰精氨酸、化合物GPl ；所述化合物LLL的结构式如式I所示:
权利要求
1.定量检测如下I) 一6)中任一所述化合物组的产品或方法在检测或辅助检测猪所饲喂日粮的代谢能值中的应用: · 1)化合物LLL; ·2)化合物LLL和化合物MLC； ·3)化合物LLL、化合物GPO和化合物ALL； ·4)化合物LLL、化合物GPO、化合物ALL和脯氨酸； ·5)化合物LLL、化合物GP0、化合物ALL、化合物LPC、精氨酰苯丙氨酰精氨酸、化合物GPl ； · 6 )化合物LLL、化合物GPO、化合物ALL、脯氨酸、化合物LPC、精氨酰苯丙氨酰精氨酸、化合物GPl ； 所述化合物LLL的结构式如式I所示:
2.一种检测或辅助检测猪所饲喂日粮的代谢能值的方法，包括如下A)—F)步骤中的至少一个: A)将Xl代入方程I中，得到MEl;所述方程I为ME1=3252.2+79.8X1 ； B)将Xl和X2代入方程2中，得至IjME2 ;所述方程2为ME2=3252.0+75.1X1-75.0X2 ； C)将X1、X3和X4代入方程3中，得到ME3;所述方程3为ME3=3251.6+79.5 Xl - 53.7Χ3 - 24.0 Χ4 ； D)将Χ1、Χ3、Χ4和Χ5代入方程4中，得到ΜΕ4;所述方程4为ME4=3251.8+84.4 Χ1-45.8Χ3 - 34.0 Χ4-42.5 Χ5 ； 已)将Χ1、Χ3、Χ4、Χ6、Χ7和Χ8代入方程5中，得到ΜΕ5 ;所述方程5为ΜΕ5=3251.6+95.5Xl - 38.0 Χ3 - 20.8 Χ4 - 56.6 Χ6+52.7 Χ7-49.9 Χ8 ； F)将X1、Χ3、Χ4、Χ5、Χ6、Χ7和Χ8代入方程5中，得到ΜΕ6 ;所述方程6为ΜΕ6=3251.7+96.0 Xl-35.4 Χ3 - 28.4 Χ4 - 30.1 Χ5-46.6 Χ6+42.9 Χ7-40.2 Χ8 ； 所述MEl、ΜΕ2、ΜΕ3、ΜΕ4、ΜΕ5和ΜΕ6即为所述待测猪所饲喂日粮的代谢能值，单位为kcal/kg ； 所述Xl为待测猪离体血浆中所述化合物LLL的相对含量； 所述X2为待测猪离体血浆中所述化合物MLC的相对含量； 所述X3为待测猪离体血浆中所述化合物GPO的相对含量； 所述X4为待测猪离体血浆中所述化合物ALL的相对含量； 所述X5为待测猪离体血浆中所述脯氨酸的相对含量； 所述X6为待测猪离体血浆中所述化合物LPC的相对含量； 所述X7为待测猪离体血浆中所述精氨酰苯丙氨酰精氨酸的相对含量； 所述X8为待测猪离体血浆中所述化合物GPl的相对含量； 所述相对含量为取所述待测猪离体血浆中相应化合物的色谱峰面积的Ig值。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于: 所述色谱为液相色谱，所述液相色谱的检测条件具体如下:色谱柱为安捷伦ZORBAX超高压快速高分离度色谱柱C-18 ;流动相分别为A相为体积百分含量为0.1%的甲酸的水溶液，B相为体积百分含量为0.1%的甲酸的乙腈溶液；流速为0.3mL/min，温度为40°C，从5%-95%的B相梯度洗脱，分析时间为25min。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于:进行所述液相色谱前，将所述待测猪的离体血浆进行包括如下步骤的处理:取所述血浆按1:4的体积比加入提取液A中进行提取，获得上清液A，在所述上清液A中按1:1的体积比加入提取液B，获得上清液B，将所述上清液B进行所述检测； 所述提取液A为甲醇与乙腈按1:1的体积比混合后的溶液； 所述提取液B为甲醇与水按4:1的体积比混合后的溶液。
5.权利要求2—4中任一所 述方法在配制猪的日粮或饲料中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种应用代谢组学技术预测猪日粮代谢能水平的方法。所述方法是将待测猪的8种血浆代谢标志物溶血磷脂酰胆碱(18:3/0:0)、蔻酰基溶血性磷脂酰胆碱(14:0/0:0)、甘油磷酰乙醇胺(18:0/0:0)、溶血磷脂酰胆碱(20:4/20:4)、脯氨酸、膦脂酰胆碱(18:2/0:0)、精氨酰苯丙氨酰精氨酸和甘油磷酰乙醇胺(18:1(9Z)/0:0)中的一种至七种的相对含量代入本发明所建立的一元至七元方程中，得到待测猪所饲喂日粮的代谢能的预测值，使用七元方程得到的预测值与实际值的相对偏差不超过±1%。本发明对于及时评价营养状况以及优化配方，满足不同环境、生理和病理条件下猪的营养需要，提高猪生产效率具有重要的理论与实践意义。
文档编号G01N30/02GK103245747SQ20131019502
公开日2013年8月14日 申请日期2013年5月23日 优先权日2013年5月23日
发明者王军军, 林刚, 臧建军, 王晓秋, 李德发, 李溱, 戴兆来 申请人:中国农业大学