专利名称：一种人血清乳腺癌特异抗原检测酶联免疫吸附试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明的人血清乳腺癌特异抗原检测酶联免疫吸附试剂盒，涉及防治乳腺癌的早期筛查、诊断技术领域。
背景技术：
乳腺癌是妇科最常见的恶性肿瘤，寻找乳腺癌的特异性抗原有助于乳腺癌的早期筛查、诊断、治疗，我们在科研工作中发现了乳腺癌的相应抗原BRCAA1基因，并筛选出一个新的乳腺癌特异抗原表位SSKQKRSHK，经临床血清标本筛查发现对乳腺癌的检测具有较强的灵敏度与特异性，据此，我们开发出相应检测试剂盒。

发明内容
本发明的目的是提出乳腺癌特异性抗原和特异性抗原表位检测酶联免疫吸附试剂盒。
本发明的技术方案是通过ELISA试验，检测人血清中的乳腺癌抗原BRCAA1与特异抗原表位SSKQKRSHK的微量诊断方法，该方法的主要技术方案是1.大肠杆菌表达BRCAA1抗原→提取BRCAA1抗原→免疫新西兰白兔→从血清中提取IgG抗体→亲和层析法纯化IgG抗体，作为诊断抗体I；2.一个新的抗原表位SSKQKRSHK人工合成→免疫家兔→从血清中提取IgG抗体→亲和层析法纯化IgG抗体作为诊断抗体II；3.将诊断抗体I和诊断抗体II用辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记，作为诊断的二抗，即标记抗体。经多次改进，现已制成成品。
4.用抗体I和抗体II包被酶标板，加待检人血清标本，加标计抗体，加底物显示试验结果；即双抗体夹心酶联免疫吸附试验。
通过ELISA试验检测人血清中乳腺癌抗原与特异性抗原表位的微量诊断方法的实施方案1.确定试剂盒成分用抗体包被了的微孔反应板1块；小牛血清 3ml×1瓶；
酶标记抗体 3.2ml×1瓶；阳性对照1ml×1瓶；阴性对照1ml×1瓶；浓缩25倍的洗涤液30ml×1瓶；显色剂A 4ml×1瓶；显色剂B 4ml×1瓶；终止剂 3.5ml×1瓶；封板片 3片血清标本保存液 1瓶；2.确定实施操作方法取待检血清，加入保存液的试管中，立分混匀后，2500转/分钟离心10分钟；孔中加入小牛血清和待检血清标本各一滴，设阴/阳性对照各两孔，每孔加入阴性对照或阳性对照各两滴，在37度下封板1小时；酶标板甩去孔内液体，注入洗液，放10秒钟，甩干，重复4次，甩干；每孔加酶标记的抗体1滴，在37度下封板1下时；洗板同前；加显色剂A与显色剂B各1滴，在37度下静置20分钟，每孔加终止剂1滴；读取450nm处激发光时的OD光密度值。
具体实施例方式试剂盒成分有用抗体包被了的微孔反应板1块；小牛血清3ml×1瓶；酶标记抗体3.2ml×1瓶；阳性对照1ml×1瓶；阴性对照1ml×1瓶；浓缩25倍的洗涤液30ml×1瓶；显色剂A 4ml×1瓶；显色剂B 4ml×1瓶；终止剂3.5ml×1瓶；封板片3片；血清标本保存液1瓶；按照实施操作方法取待检血清，加入保存液的试管中，立分混匀后，2500转/分离心10分钟；孔中加入小牛血清和待检血清标本各一滴，设阴/阳性对照各两孔，每孔加入阴性对照或阳性对照各两滴，在37度下封板1小时；微孔板甩去孔内液体，注入洗液，放10秒钟，甩干，重复4次，甩干；每孔加酶标记的抗体1滴，在37度下封板1下时；洗板同前；加显色剂A与显色剂B各一滴，在37度下静置20分钟，每孔加终止剂1滴；读取450nm处激发光时的OD光密度值。
此试剂盒可在2～5℃下，保存一年，性质不变，适用于各大医院与基层医院开展乳腺癌的早期筛查，辅助诊断工作。
权利要求
1.一种人血清乳腺癌特异性抗原检测酶联免疫吸附试剂盒，盒内成分有用抗体包被了的微孔反应板1块；小牛血清3ml×1瓶；酶标记抗体 3.2ml×1瓶；阳性对照1ml×1瓶；阴性对照1ml×1瓶；浓缩25倍的洗涤液30ml×1瓶；显色剂A 4ml×1瓶；显色剂B 4ml×1瓶；终止剂 3.5ml×1瓶；封板片 3片血清标本保存液 1瓶；其特征是包被微孔反应板的抗体是由两种抗体组成的，其中抗体I是用大肠杆菌表达的BRCAA1蛋白免疫新西兰白兔得到的抗体；抗体II是用筛选出特异性乳腺癌抗原表位SSKQKRSHK免疫家兔得到的抗体。
2.一种人血清乳腺癌特异抗原检测酶联免疫吸附试剂盒，其特征是所述试剂盒的操作方法是取待检血清，加入保存液的试管中，充分混匀后，2500转/分钟离心10分钟；孔中加入小牛血清和待检血清标本各一滴，设阴/阳性对照各两孔，每孔加入阴性对照或阳性对照各两滴，在37℃下封板1小时；洗板甩去孔内液体，注入洗液，放10秒钟，甩干，重复4次，拍干；每孔加酶结合抗体1滴，在37度下封板1小时；洗板同前；加显色剂A显色剂B各一滴，在37℃下停放20分钟，每孔加终止液1滴；读取450nm激发光时的OD光密度值。
全文摘要
本发明的人血清乳腺癌特异抗原检测酶联免疫吸附试剂盒，涉及乳腺癌的早期筛查、诊断、防治技术领域，该试剂盒是通过ELISA试验，检测人血清中相应抗原BRCAA1与特异抗原表位SSKQKRSHK的微量诊断方法，用于检测人血清中的乳腺癌抗原，具有足够高的灵敏性和特异性，能满足乳腺癌的早期筛查、诊断、防治工作；经改进，现已制成有效的乳腺癌特异抗原检测酶联免疫吸附试剂盒，这种试剂盒为乳腺癌的防治、早期筛查、诊断工作提供了准确、简便、有效的检测工具。
文档编号G01N33/543GK1773284SQ20051003096
公开日2006年5月17日 申请日期2005年11月2日 优先权日2005年11月2日
发明者崔大祥 申请人:崔大祥