专利名称：心肌梗死近期预警检测装置及试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及医学分子检验学领域，特别涉及一种心肌梗死近期预警检测装置
及试剂盒。
背景技术：
心肌梗死(Myocardial infarction,MI或acute myocardial infarction, AMI)， 常常发生在心冠状动脉突然阻塞，造成部分心脏血液供应突然中断，产生缺血和氧气短缺， 如不及时治疗就会导致心肌细胞死亡。心肌梗死是心血管疾病(又可总称为冠心病)的终 极转归，具有突发、无特异性前兆症状的特点，导致救治不及造成高死亡率。最近的流行病 学资料显示，全球每年因冠心病死亡约1700万人，其中一半以上死于心肌梗死。我国平均 每天就有2778人死于心肌梗死，堪称"第一杀手"。 心肌梗死虽然在一瞬间突发，但起因却是缘于一系列的病理生理过程。首先是出 现心脏冠状动脉粥样硬化，血小板聚集和血栓形成，导致冠状动脉管腔渐变狭窄、此时心肌 已经出现逐渐加重的缺血和再灌注的损伤。最后极度加厚的内膜十分粗糙的动脉会突然 闭塞或者动脉粥样硬化斑溃破脱落，导致心肌细胞骤然毫无血液和氧气的供应而死亡。从 临床角度看，它涵盖了一组连续进展的病症，包括不稳定心绞痛、非ST段抬高的心肌梗死 (NSTEMI)和ST段抬高的心肌梗死(STEMI)。心肌梗死的及时诊断通常是很困难的，特别 是梗死前的心肌缺血阶段更是不易。心电图常首先用来评估以胸部不适就诊的病人，但心 肌缺血的病人也可多表现为心电图未见异常，其灵敏度低于50%，致使延误治疗发展至心 肌梗死。目前临床上常用的血清学检查项目，如肌f丐蛋白(tropnins:Tnl， TnT)、肌红蛋白 (myoglobin,Myo)、酸激酶MB同功酶(creatine kinase-MB， CK-MB)禾PB-型钠尿肽(B-type natriuretic p印tide， BNP)等，仅在不可逆的细胞损害以及细胞膜的完整性被破坏之后， 在血中才会升高。短期和可逆的缺血发作，不会导致这些标志物血中水平升高，因此都是心 肌已经发生坏死的标志物，不能用作预警指标。只有在心肌发生缺血时就能高度表达的标 志物才能作为即将发生心肌梗死的预警信号，指导患者及时得到救助，避免心肌梗死的发 生。近期研究发现的心肌缺血修饰白蛋白(ischemia modified albumin, IMA)就是在心肌 发生缺血时高度表达的标志物，在心肌缺血发作后5-10min血中浓度即可升高，对于反映 心肌缺血情况具有灵敏度高、特异性强、反应迅速等优点。若能检测到IMA则能早期发现缺 血。特别是在典型急性胸痛而ECG正常或无诊断意义时，IMA是鉴别心肌缺血最有用的生 化指标，进一步证实了 IMA的临床应用价值。 美国Ischemia Technologies公司采用白蛋白-钴结合试验(Albumin cobalt bindingassay， ACB)来检测IMA，首先推出检测IMA的试剂盒，后来湖南颐康公司生产出类 似的产品。其主要原理是缺血修饰白蛋白对Co2+结合能力低于正常白蛋白，血清中白蛋 白与Co2+结合后，剩余的游离Co2+与有机显色物反应生成红褐色产物，在510nm的波长下 比色，其吸光度与Co2+浓度成正比，与标准品进行比较，即可计算出样本中ACB的浓度。然 而这种ACB检测IMA的方法明显存在下列的不足，严重影响了临床的进一步推广使用[0005] 1. ACB-IMA试剂盒及检测方法只能在几种日立和罗氏型号的全自动生化仪上使
用。而我国医院的急诊化验室一般不配备大型生化分析仪，但心肌缺血、心肌梗死都为急诊
病人，这为IMA指标在临床快速诊断心肌缺血方面推广使用形成了障碍。 2. ACB-IMA试剂盒检测IMA的阳性预测值(Positive Predictive Value,简称
PPV)较低，主要是WA阴性样品0D值非特异性升高，当背景干扰足够大时就可使IMA阴性结
果超过临界值变成IMA假阳性，使得IMA的阳性预测值较低，某种程度上降低了 IMA在临床
上的使用价值。 综上所述，心肌缺血最终导致心肌梗死病情险恶，IMA是发生心脏缺血最理想、最 可靠的指标，也是能预测即将发生心肌梗死的早期标志物。但现有试剂盒及检测方法上的 不足又限止了其进一步推广使用，因此迫切需要开发一种高特异性的检测IMA的试剂盒无 需自动生化分析仪，并能用于床边快速检测的试剂盒以满足临床心肌缺血诊断和心肌梗死 预警的急切、简便和准确的需要。

实用新型内容本实用新型针对上述领域的空白，提供一种心肌梗死近期预警装置及试剂盒，能 够又早又准地预警心肌梗死，操作简便迅速，能在心肌受到致命性的打击之前给出明确的 诊断。 心肌梗死近期预警检测装置，由反应盒及盒中铺垫的吸水材料与硝酸纤维素膜组 成，其特征在于所述反应盒顶部设置有与盒内腔相通的进样孔，所述进样孔垂直往下依次 为遮蔽住进样孔的硝酸纤维素膜、紧贴着硝酸纤维素膜的吸水材料，所述进样孔处显示的 硝酸纤维素膜上设置有检测斑，所述检测斑上固定了 a型兔抗人IMA抗体。 所述进样孔的孔沿为凸沿。 所述进样孔显示的硝酸纤维素膜上还设置有质控斑，所述质控斑上包被羊抗兔抗 体，所述质控斑与所述检测斑不完全重叠。 所述检测斑与质控斑分别为直线，两条直线十字交叉。 心肌梗死近期预警检测试剂盒，其特征在于包括试剂瓶、量血吸管及上述心肌梗 死近期预警检测装置。 所述试剂瓶指盛装样品稀释液瓶、纳米胶体金标记13型兔抗人心肌缺血修饰白 蛋白抗体的显色液瓶和洗涤液瓶。 所述量血吸管由开口端和封闭端的两段管组成，开口端的管径比封闭端的管径 细。 所述进样孔直径为13mm，所述开口端管的容积为50iU。 所述试剂盒内有紧贴试剂盒内壁的支架，所述支架上设置有反应盒槽，试剂瓶槽 和量血吸管槽，所述反应盒槽中放置有所述心肌梗死近期预警检测装置，试剂瓶槽内放置 有试剂瓶，量血吸管槽放置有量血吸管。 本实用新型心肌梗死近期预警检测装置，心肌梗死近期预警检测装置，由反应盒 及盒中铺垫的吸水材料与硝酸纤维素膜组成，其特征在于所述反应盒顶部设置有与盒内 腔相通的进样孔，所述进样孔垂直往下依次为遮蔽住进样孔的硝酸纤维素膜、紧贴着硝酸 纤维素膜的吸水材料，所述进样孔处显示的硝酸纤维素膜上设置有检测斑，所述检测斑上固定了 a型兔抗人IMA抗体。该装置的特点在于，依据酶免疫双抗夹心法原理使用纳米胶 体金快速班点免疫渗滤技术定性测定人血清、血浆中抗IMA抗体含量，检测时，待测血不需 要在硝酸纤维素膜上进行水平渗滤，而是从进样孔处直接滴加在硝酸纤维素膜上固定有抗 抗体的位置，待测血中的IMA抗体与膜上固定的a型兔抗人IMA抗体发生专一识别结合反 应，在几十秒内待测血中其余大部分杂质在硝酸纤维膜下层的吸水材料的吸力作用下，迅 速被垂直吸到吸水材料中；然后立即从进样孔中加入显色液进行显色，最后加入洗涤液洗 涤杂质并观察结果。 一方面，该装置的垂直渗滤设计比水平渗滤的方式进行检测节约了数 分钟时间，即加快了检测反应的速度，另一方面，该装置的垂直渗滤设计，使得待测液中的 杂质能够迅速被渗透到反应盒底部，而非特异性大分子杂质透过洗液被冲洗掉，检测几乎 不受其它杂质干扰，即本装置的设计保证了检测过程的灵敏度和特异性，使得该装置可采 用全血进行检查，即不需要进行血清分离过程，在病床边取微量的全血，立刻即可在该装置 中进行反应；采用胶体金标抗体作为显色标记，使整个检测反应摆脱高端仪器的限制，任何 地方任何人只要看了简单的说明就可对患者做预警检测；对于心肌梗死近期预警而言，检 测方式的简便和快速程度往往是能否来得及采取急救措施的关键，本实用新型的设计所带 来的上述两方面的优点，恰恰满足了心肌梗死近期预警的争取时间的需要。同时由于包被 的a型兔抗人IMA多克隆抗体只与血液中IMA抗原发生特异性反应，而显色液是胶体金标 记的P型兔抗人IMA多克隆抗体，其也与IMA抗原发生特异性反应，同时起到显色标记的 作用，从包被物的方面保证了本实用新型检测装置的预警监测具有良好的特异性，且直接 以胶体金为标记物省却了酶对底物的反应，更加简便、快速，综合以上优点，说明本实用新 型能够为心肌梗死发作提供真正及时、准确、有效的预警。 本实用新型心肌梗死近期预警检测装置的进样孔的孔沿为凸沿，由于在进样孔滴 加待测血后，需要立即在进样孔中加入显色液和洗涤液，尤其是洗涤液用量会比较多，因 此，容易溢到进样孔四周，不利于检测人员操作和观察结果，而凸沿的设计，使进样孔中的 反应液体犹如在碗中一样，不会四处飘贱。 所述进样孔显示的硝酸纤维素膜上还设置有质控斑，所述质控斑上包被羊抗兔抗 体，质控斑与检测斑不完全重叠或分离，质控斑作为本实用新型装置是否失效的依据，反应 时若质控斑不显示，说明装置失效或者试剂失效，能够排除假阴性。质控斑与检测斑理论上 只要相互分离，能分别观察到就可。观察到一个红斑时为阴性，观察到两个红斑时为阳性。 本实用新型优选将质控斑与检测斑设置成两条线十字交叉的直线，当检测结果为 阴性时，显色为一个红色的减号；检测结果阳性时，显色为红色的加号，能形象通俗地表示 阴性和阳性检测结果，便于识别和记录。 本实用新型的目的在于解决心肌梗死近期预警中检测速度没有发病速度快的问 题，上述装置非常显著地提高了预警速度。为了进一步提供更为方便快捷的心肌梗死预警 工具，本实用新型提供一种试剂盒，主要包括上述预警检测装置，还包括可以用来盛装预警 检测反应中所需试剂的试剂瓶和量血吸管。这些试剂瓶主要指检测反应中必须的试剂盛 装样品稀释液的稀释液瓶、纳米胶体金标记P型兔抗人IMA抗体的显色液瓶和洗涤液瓶。 使用时，用量血吸管吸取定量的病人血液放入盛有稀释液的样品稀释液瓶中混匀，将血液 稀释液倒入进样孔中，待所有液体渗透到反应盒中后，将显色液瓶中的显色液倒进进样孔， 显色后立即用洗涤液瓶中的洗涤液冲洗进样孔处的硝酸纤维素膜，得出结果。[0023] 本实用新型的心肌梗死近期预警检测装置的特点是可以采用全血进行检测，但检 测所用的血液量太多则影响特异性，有较多的干扰也不利于洗涤步骤彻底达到效果，血量 也不能太少，影响其灵敏性，因此，本实用新型优选在量血吸管上标记刻度，定量待测血的 量。本实用新型的量血吸管优选设计成，由开口端和封闭端的两段管组成，开口端管径比 封闭端管径细，开口端管的长度所量的血液量正好为进样孔处硝酸纤维素膜上包被的抗抗 体反应所需的最适血量，本实用新型优选所述进样孔直径为13mm，所述开口端管的容积为 50iU。吸血时血液一到两端管的交界处就停止，非常易于判断和紧急情况下操作，不用多 取血液。 本实用新型提供的试剂盒内，优选设置一个紧贴盒内壁的支架，支架上设置有反 应盒槽，试剂瓶槽和量血吸管槽，反应盒槽中放置有上述心肌梗死近期预警检测装置，试剂 瓶槽内放置有试剂瓶，量血吸管槽放置有量血吸管。这样有利于试剂盒的运输与试剂的保 存。 综上所述，本实用新型提供的预警检测装置及试剂盒能够做到迅速预警早期心肌 梗死；检测过程依据酶免疫双抗夹心法原理，以胶体金为标记物省却了酶对底物的反应，更 加简便、快速，能够做到未雨绸缪，预先准备的作用，专门用于迅速预警心肌梗死的发生，可 以起到橙色预警的作用。所谓预警，就是要在发生心肌梗死之前做出即将发病的诊断，使 患者及时就医，消除或减轻心肌梗死造成的不可逆转的心肌损害。就像台风、地震、洪水等 重大灾害的预报一样，按照灾害来袭的紧急程度和严重程度分级，颜色依次为蓝、黄、橙、红 色，分别代表一般、较重、严重和特级严重。 一般来说，在橙色信号是表明灾害近期即将发 生，人们就不宜外出了并且要做好防灾准备，到红色时灾害已经开始发生。照此类比，目前 临床上所使用的一些血清学指标如高血脂和高胆固醇等应属于远期预警信号；而肌钙蛋 白、肌红蛋白、酸激酶MB同功酶和B-型钠尿肽(B-type natriuretic p印tide， BNP)等应 属"红色"信号，心肌细胞的死亡已经在大量发生，此时送医已是争分夺秒，生命处于极大的 危险之中。本实用新型的试剂盒则属于"橙色"预警的级别，预示心脏冠状动脉的粥样硬化 斑即将脱落造成堵塞或这时血管已经狭窄到即将闭死，短则几小时，长则几天，发生心肌梗 死的危险性极大，因此患者应立即就医，密切观察病情变化，及时得到救治，这样就能大大 降低心肌梗死的发病率。

图1本实用新型心肌梗死近期预警检效 图2本实用新型心肌梗死近期预警检效 图3本实用新型心肌梗死近期预警检效 图4本实用新型心肌梗死近期预警检效 图5本实用新型心肌梗死近期预警检效
l装置的内部层次示意图 l装置的正面形状示意图 l装置的截面示意图 l装置俯视示意图
J试剂盒俯视示意图 图5-1本实用新型心肌梗死近期预警检测试剂盒中的量血吸管示意图 其中1-反应盒，2-凸沿、3-进样孔、4-硝酸纤维素膜、5-吸水材料、6-检测斑、 7-质控斑、8-试剂盒外壳、9-支架、10-反应盒槽、11-试剂瓶槽、12-量血吸管槽、13-量血 吸管，13A-开口端管，13B-封闭端管。
具体实施方式
如图1、2及3所示，本实用新型心肌梗死近期预警检测装置，由1反应盒及盒中铺 垫的吸水材料5与硝酸纤维素膜4组成，其特征在于所述反应盒1顶部设置有与盒内腔相 通的进样孔3，所述进样孔3垂直往下依次为遮蔽住进样孔3的硝酸纤维素膜4、紧贴着硝 酸纤维素膜的吸水材料5，所述进样孔3处显示的硝酸纤维素膜4上设置有检测斑6，所述 检测斑6上固定了 a型兔抗人IMA抗体。该装置的特点在于，依据酶免疫双抗夹心法原理 使用纳米胶体金快速班点免疫渗滤技术定性测定人血清、血浆中抗IMA抗体含量，检测时， 待测血不需要在硝酸纤维素膜4上进行水平渗滤，而是从进样孔3处直接滴加在硝酸纤维 素膜4上固定有a型兔抗人IMA多克隆抗体的位置，待测血中的IMA抗体与膜上固定的a 型兔抗人IMA抗体发生专一识别结合反应，在几十秒内待测血中其余大部分杂质在硝酸纤 维膜5下层的吸水材料4的吸力作用下，迅速被垂直吸到吸水材料4中；然后立即从进样孔 3中加入显色液进行显色，最后加入洗涤液洗涤杂质并观察结果。 本实用新型心肌梗死近期预警检测装置的进样孔3的孔沿为凸沿2，由于在进样 孔3滴加待测血后，需要立即在进样孔3中加入显色液和洗涤液，尤其是洗涤液用量会比较 多，因此，容易溢到进样孔3的四周，不利于检测人员操作和观察结果，而凸沿2使进样孔3 中的反应液体犹如在碗中 一样，不会四处飘贱。 如图4所示，所述进样孔3显示的硝酸纤维素膜4上还设置有质控斑7，所述质控 斑7上包被羊抗兔抗体，质控斑7可作为本实用新型装置是否失效的依据，反应时若质控斑 7不显示，说明装置失效或者试剂失效，能够排除假阴性。质控斑7与检测斑6理论上只要 相互不完全重叠，能观察区别出来即可。本实用新型优选将质控斑7与检测斑6设置成直 线，两条直线十字交叉，当检测结果为阴性时，显色为一个红色的减号；检测结果阳性时，显 色为红色的加号。 本实用新型为了进一步提供更为方便快捷的心肌梗死预警工具，如图5所示，本 实用新型提供一种试剂盒，主要包括如图2、3中所示的预警检测装置，还包括可以用来盛 装预警检测反应中所需试剂的试剂瓶和量血吸管13。这些试剂瓶主要指检测反应中必须的 试剂盛装样品稀释液的稀释液瓶、纳米胶体金标记P型兔抗人IMA抗体的显色液瓶和洗 涤液瓶。紧急情况下，用量血吸管13吸取定量的待测血液放入盛有稀释液的样品稀释液瓶 中混匀，将血液稀释液倒入进样孔3中，待所有液体渗透到反应盒1中后，将显色液瓶中的 显色液倒进进样孔，显色后立即用洗涤液瓶中的洗涤液冲洗进样孔3处的硝酸纤维素膜4， 得出结果。 本实用新型的心肌梗死近期预警检测装置的特点是可以采用全血进行检测，但检 测所用的血液量太多则影响特异性，有较多的干扰也不利于洗涤步骤彻底达到效果，血量 也不能太少，影响其灵敏性，因此，本实用新型提供的试剂盒优选在量血吸管13上标记刻 度，定量待测血的量。本实用新型的量血吸管13进一步优选设计成，由开口端管13A和封 闭端管13B的两段管组成，开口端管13A的管径比封闭端管13B管径细，开口端管13A的长 度所量的血液量正好为反应所需的最适血量，本实用新型优选所述进样孔直径为13mm，所 述开口端管的容积为50iU。吸血时血液一到开口端管13A与封闭端管13B的交界处就停 止，如图5-1所示，非常利于紧急情况下准确操作而不浪费患者的血液。 如图5所示，本实用新型提供的试剂盒内，优选设置一个紧贴试剂盒外壳8的内壁
7的支架9，所述支架9上设置有反应盒槽IO，试剂瓶槽11和量血吸管槽12，所述反应盒槽 10中放置有图2或图3所示的心肌梗死近期预警检测装置，试剂瓶槽11内放置有试剂瓶， 量血吸管槽12放置有量血吸管13。 使用方法 1.血液样品的采集与贮存(1)于手指尖处针剌取全血，无须抗凝，立即吸50 ii L 加入到瓶A样品稀释液中，摇匀，立即用于测试不可贮存。(2)血清或血浆样本可在2-8°C 保存5天，在-2(TC可保存三个月，在-S(TC可保存一年。(3)抗凝的全血标本可在4t:短时 间保存，但必须在取样48h内检测。(4)各种样品在检测前必须调至室温(20-25°C )才能 检测，切忌加热或反复冻融。(5)血液样品只有在检测前才能稀释。 2.测试步骤(l)确认所测样品和本实用新型提供的试剂盒各组分已至室温，并 混悬摇匀；(2)将心肌梗死近期预警检测装置平放于台面，进样孔3向上；(3)使用量血吸 管13取50iiL血样加入到盛有样品稀释液的稀释液瓶中，摇匀；(4)立即将稀释液瓶中样 品稀释混合液倒入心肌梗死近期预警检测装置的进样孔3中的硝酸纤维素膜4上，样品约 在30秒左右被膜完全吸入；(5)将显色液瓶中的显色液再次混悬摇匀，立即倒入进样孔3 中，10秒之内，进样孔3处胶体金的红色显现。(6)将洗涤液瓶中的洗涤液倒入进样孔3中， 清洗浮色，立即观察结果。 3.结果判读(1)进样孔3中央硝酸纤维素膜上显示红色的正号(+)，表明血样中 IMA阳性；(2)进样孔3中央硝酸纤维素膜上显示红色的负号(_)，表明血样中IMA阴性；(3) 若进样孔3中央硝酸纤维素膜上无线条显示则表明反应失败。 血液IMA检测敏感性试验 以200mg/L的IMA蛋白(购自美国J&J BioMed Inc.)为首样，倍比稀释ll孔。将 各个质量浓度分别在本实用新型试剂盒中的装置上做检测实验，并设空白对照。结果观察 见表2，所标记的金溶液最小检测浓度为3. 13mg/L，所需的量为lOiU。
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权利要求心肌梗死近期预警检测装置，由反应盒及盒中铺垫的吸水材料与硝酸纤维素膜组成，其特征在于所述反应盒顶部设置有与盒内腔相通的进样孔，所述进样孔垂直往下依次为遮蔽住进样孔的硝酸纤维素膜、紧贴着硝酸纤维素膜的吸水材料，所述进样孔处显示的硝酸纤维素膜上设置有检测斑，所述检测斑上固定了α型兔抗人IMA抗体。
2. 根据权利要求1所述心肌梗死近期预警检测装置，其特征在于所述进样孔的孔沿为 凸沿。
3. 根据权利要求1所述心肌梗死近期预警检测装置，其特征在于所述进样孔显示的硝 酸纤维素膜上还设置有质控斑，所述质控斑上包被羊抗兔抗体，所述质控斑与所述检测斑 不完全重叠。
4. 根据权利要求3所述心肌梗死近期预警检测装置，其特征在于所述检测斑与质控斑 分别为直线，两条直线十字交叉。
5. 心肌梗死近期预警检测试剂盒，其特征在于盒内包括盛装有反应试剂的试剂瓶、量 血吸管及权利要求1所述的心肌梗死近期预警检测装置。
6. 根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂瓶指盛装样品稀释液瓶、纳米 胶体金标记P型兔抗人IMA抗体的显色液瓶和洗涤液瓶。
7. 根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述量血吸管由开口端和封闭端的两 段管组成，开口端的管径比封闭端的管径细。
8. 根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述进样孔为圆形孔，直径为13mm，所 述开口端的管的容积为50iU。
9. 根据权利要求5 8任一所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒内包括紧贴盒内壁 的支架，所述支架上设置有反应盒槽，试剂瓶槽和量血吸管槽，所述反应盒槽中放置有权利 要求1所述的心肌梗死近期预警检测装置，试剂瓶槽内放置有试剂瓶，量血吸管槽放置有 量血吸管。
专利摘要本实用新型“心肌梗死近期预警检测装置及试剂盒”，属于医学分子检验学领域，心肌梗死近期预警检测装置，由反应盒及盒中铺垫的吸水材料与硝酸纤维素膜组成，其特征在于所述反应盒顶部设置有与盒内腔相通的进样孔，所述进样孔垂直往下依次为遮蔽住进样孔的硝酸纤维素膜、紧贴着硝酸纤维素膜的吸水材料，所述进样孔处显示的硝酸纤维素膜上设置有检测斑，所述检测斑上固定了α型兔抗人IMA抗体。并提供一种包括上述装置的试剂盒。本实用新型装置及试剂盒能够又早又准地预警心肌梗死，操作简便迅速，能在心肌受到致命性的打击之前给出明确的诊断。
文档编号G01N33/543GK201503434SQ20092022290
公开日2010年6月9日 申请日期2009年9月24日 优先权日2009年9月24日
发明者焦守恕 申请人:同昕生物技术(北京)有限公司