专利名称：电化学发光检测喹诺酮类抗生素的方法
技术领域：
本发明属于电化学发光检测技术领域，具体涉及一种电化学发光检测喹诺酮类抗生素的方法。
背景技术：
喹诺酮类抗生素(FQs)是一类全合成的抗菌药物，具有抗菌效果好、动力学特征好、作用机制独特等优点。经过几十年的发展，现已发展到第四代，广泛应用于人体以及生物体各种病菌感染的治疗中。目前最常用的几种喹诺酮类抗生素有:氧氟沙星(0FLX)、左氧氟沙星(LVFX)、诺氟沙星(NFLX)、环丙沙星(CPFX)。但是，随着喹诺酮类抗生素的广泛应用，其可能产生的毒副作用和不良影响也越来越受到人们的关注。有证据显示在人体及生物体中残留的喹诺酮类抗生素会使病菌产生抗药性(A.ff.Knight, etal.,Analyst, 1996，121，101R),从而影响人体及生物体的病菌治疗。还有可能对人体及生物体器官产生毒害作用，不良反应大多数是胃肠道反应，偶见头晕、头痛等中枢神经系统反应。最令人震惊的是有报道显示喹诺酮类抗生素有诱发心律失常的潜在危险(D.Katritsis, et al., Pacing Clin Electrophysiol, 2003, 26(12), 2317 ；R.C.0wens, etal.，Pharmacotherapy, 2002，22 (5)，663 ;刘芳等，现代生物医学进展，2008,8 (12)，2596)。同时，喹诺酮类抗生素在食品中残留不仅会对人们的健康造成危害，还可能对经济发展造成影响，近年来因为食品中喹诺酮类抗生素残留量超标造成的拒收、退货和索赔事件时有发生，严重影响了我国的对外货易和国际形象。许多国家出台了新的关于喹诺酮类抗生素在食品中的最大残留量的规定，例如:欧盟规定诺氟沙星在家禽以及猪等的可食用组织中的最大残留量为50 μ g/kg ;氧氣沙星在牛奶等乳制品中的最大残留量为75 μ g/kg。因此，严格规范使用、监测喹诺酮类抗生素在人体、生物体以及食品中的残留量具有重要意义。目前，药物制剂及生物体中喹诺酮类抗生素的检测方法主要有高效液相色谱法(张娜锋等，中药药师，2006，9 (6)，507 ;马素英等，安徽农业科学，2008，36 (26)，11177 ;刘明生等，饲料工业，2007，28 (21)，39)、液相色谱-质谱联用法(厉文辉等，分析测试学报，2009，29 (10)，987 ;包晓丽等，分析化学，研究报告，2009，37 (03)，389)、微生物效价法(郑晶等，中国卫生检验杂志，2006，16 (01)，79)、分光光度法(邵耀东等，畜牧与兽医，2010，42 (10)，63)、荧光光度法(鲍霞，光谱实验室，2001,18 (2)，265)、化学发光法(刘二保等，光谱学与光谱分析，2004，124(14)，399 ；CN102565401A)等。但这些方法存在操作复杂、仪器价格比较昂贵、应用有毒试剂、灵敏度有待提高等缺点。因此迫切需要建立一种灵敏度高、操作简便的方法实现对喹诺酮类抗生素的监控。电化学发光(ECL)是被测物在电极表面直接氧化产生的电活性物质经历电子转移反应形成激发态后激发态能量以光的形式释放出来。电化学发光检测法因具有灵敏度高、线性范围宽、仪器操作简便等优点而备受关注，已被广泛应用于分析化学中的各个领域。利用商品化单核联吡啶钌金属配合物Ru(bpy)32+ (结构如下所示)ECL检测喹诺酮类抗生素已见报道(K.Suzuki, et al., Shokuhin Eiseigaku Zasshi, 1999, 23-40 ;Β.Deng, etal., Anal.Bioanal.Chem.2006, 385, 1336)。但是,通过此方法检测喹诺酮类抗生素时,所需要的Ru(bpy)32+浓度较高，并且线性范围不宽，特别是在检测某些喹诺酮类抗生素时，无法满足食品中最大残留限量的检测要求。例如:Ru(bpy)32+ECL检测恩诺沙星时，检测限为
3.0×l0-8mol/L (Zhifeng Fu, et al.，Chromatographia, 2009，69，1101),而恩诺沙星在牛奶、肌肉、脂肪等食品中的最大残留限量为100 μ g/kg (2.7×10_8mol/L) ;Ru(bpy)32+ECL检测环丙沙星时，检出限为 2.0 × l0-7mol/L (Matthew S.Burkhead, et al., Analyticachimica acta, 2008,613, 152)，而环丙沙星在牛奶、肉类食品中的最大残留量为100 μ g/kg(3.0×l0-8mol/L)。
权利要求
1.一种电化学发光检测喹诺酮类抗生素的方法，其特征在于，该方法使用具有下列通式的双核联吡啶钌/锇金属配合物电化学发光检测喹诺酮类抗生素，(L)2M-L, -M，(L)2 通式中:M、M’为Ru或Os，L选自2，2’ -联吡啶或1，10-邻菲咯啉，L’选自以下配体:
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述双核联吡啶钌/锇金属配合物为具有以下结构的双核联吡啶钌金属配合物:
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述双核联吡啶钌/锇金属配合物在测定溶液中的浓度在IX 10_5 KT1moVL范围内选择。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液或硼酸盐缓冲溶液。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述缓冲溶液的pH值在5 10范围内选择。
6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述缓冲溶液的浓度在0.1 Imol/L范围内选择。
7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述工作电极与电化学工作站相连，电化学工作站以在O 2.0V范围内进行电位扫描的方式向所述工作电极输出电压。
8.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述工作电极为玻碳电极、金电极、钼电极中的任意一种。
9.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述喹诺酮类抗生素选自氧氟沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星、 环丙沙星和恩诺沙星中的一种。
全文摘要
本发明提供了一种使用具有下列通式的双核联吡啶钌/锇金属配合物电化学发光检测喹诺酮类抗生素的方法，(L)2M-L’-M’(L)2通式中M、M’为Ru或Os，L选自2,2’-联吡啶或1,10-邻菲咯啉，L’选自以下配体式中n为3～20的整数，A为甲基或H。本发明的有益效果是能够更加高效地检测样品中的喹诺酮类抗生素，检测限低、线性范围宽、灵敏度高、重现性好，测试可在瞬间完成。
文档编号G01N21/76GK103091305SQ201310013250
公开日2013年5月8日 申请日期2013年1月14日 优先权日2013年1月14日
发明者刘凤玉, 孙世国, 高玉龙 申请人:大连理工大学