专利名称：一种简便快速测定茶叶中γ-氨基丁酸的方法
技术领域：
本发明涉及一种简便快速测定茶叶中Y -氨基丁酸的方法。
技术背景
γ -氨基丁酸(GABA)茶具有显著的降血压及改善肝功能等保健功效，已成为近年 国内外研发热点，这样就迫切要求为富GABA茶的研发及质检提供一种简便快速准确的测 定方法，目前国内外大多利用Berthelot显色反应原理的分光光度法对食品中的GABA进行 定量分析，但由于茶叶富含茶多酚等还原性很强的成分严重干扰Berthelot显色反应的问 题，影响检测结果的稳定性及准确性。利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)吸附除去茶样中 的茶多酚，然后进行基于Berthelot反应的分光光度法定量测定茶叶中r_氨基丁酸含量。 本发明为富GABA茶的研发及质检提供了一种简便快速定量测定茶叶中Y -氨基丁酸的改 良分光光度法。发明内容
本发明的目的是提供一种简便快速测定茶叶中Y -氨基丁酸的方法，该方法测定 茶叶GABA含量具有较高的可靠性和稳定性。
本发明提供的技术方案是一种简便快速测定茶叶中Y-氨基丁酸的方法，利用 不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)去除茶样中的茶多酚类物质，然后基于Berthelot反应的分 光光度法测定茶叶中r-氨基丁酸含量。
所述利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮去除茶样中的茶多酚类物质为将粒度为40目 的茶叶粉碎样2. O g置于研钵中，加体积百分比10%冰醋酸5 mL研磨成勻浆，再加入10%冰 醋酸5 mL混勻，然后转移至三角烧瓶中，将三角烧瓶置于沸水浴中加热浸提45min，趁热抽 滤得滤液；按Iml滤液50-200mg不溶性聚乙烯吡咯烷酮的比例，在滤液中加入不溶性聚乙 烯吡咯烷酮，有白色沉淀物产生，振荡后放置30°C水浴锅中，吸附10-30min，离心去沉淀， 取上清液；所述基于Berthelot反应的分光光度法测定茶叶中r_氨基丁酸含量为取上述 上清液1ml，加0. 01 mol/L四硼酸钠缓冲液lmL，体积百分比6%重蒸苯酚溶液lmL，有白色 絮状物产生，振荡溶解，混勻后再加入体积百分比7. 5%的Naao溶液5mL，振荡；于沸水中 加热IOmin后置于冰浴中5min，取上清液，加入体积百分比60%的乙醇溶液2. OmL，于波长 645nmUcm比色皿测定其吸光度，再据标准曲线便可计算出茶叶中Y-氨基丁酸含量。
本发明通过与纸电泳法的比较实验、α-氨基酸的干扰实验及加标样的回收实验 确定该方法的特异性、稳定性及准确性。结果表明本发明利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮去除 茶样中的茶多酚类物质，消除茶多酚干扰；利用本发明与纸电泳法两种方法测得的茶叶中 GABA含量无显著差异(t=3. 464 < t0.05=4. 303)；本发明测定茶叶GABA含量具有较高的可 靠性，平均加样回收率为98.洲；同时α -氨基酸对该方法测定茶叶中GABA含量没有明显 干扰(变异系数为1.47%<5%)，表明该法对于Y-氨基酸具有较好的特异性。
具体实施方式
茶叶样品预处理称取粒度为40目的茶叶粉碎样2.0 g置于研钵中，加10% (V/V)冰醋酸5 mL研磨成 勻浆，再加入10% (V/V)冰醋酸5 mL混勻，将勻浆转移至150 mL三角烧瓶中，取蒸馏水(已 沸腾)40mL，分3次冲洗研钵，将冲洗液倒入三角烧瓶后置于沸水浴中加热浸提45min，趁热 抽滤，滤液用蒸馏水定容至50mL得样液。
处理茶样在Iml样液中加入50-200mg的PVPP，有白色沉淀物产生，振荡后放置30°C水浴锅中， 吸附时间10-30min，离心去沉淀，取上清液待用。
茶叶中GABA含量的分光光度法的测定取上述上清液1ml，加0. 01 mol/L四硼酸钠缓冲液lmL，6% (体积百分比)重蒸苯酚溶 液lmL，有白色絮状物产生，振荡溶解，混勻后再加入7.5% (V/V)NaaO溶液5mL，振荡。于 沸水中加热IOmin后置于冰浴中5min，取上清液，加入60% (V/V)的乙醇溶液2. OmL,于波 长645nm、lcm比色皿测定其吸光度，再据标准曲线便可计算出茶叶中GABA含量。
通过上述分光光度法测得的3个富GABA茶样的GABA含量分别为1.725、 2. 675和1. 650mg/g,与纸电泳法两种方法测得的茶叶中GABA含量无显著差异(t=3. 464 < to. 05=4. 303)。
权利要求
1.一种简便快速测定茶叶中Y-氨基丁酸的方法，利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮去除茶 样中的茶多酚类物质，然后基于Berthelot反应的分光光度法测定茶叶中r_氨基丁酸含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮去除茶 样中的茶多酚类物质为将粒度为40目的茶叶粉碎样2. O g置于研钵中，加体积百分比10% 冰醋酸5 mL研磨成勻浆，再加入体积百分比10%冰醋酸5 mL混勻，将勻浆转移至三角烧瓶 中，将三角烧瓶置于沸水浴中加热浸提45min，趁热抽滤得滤液；按Iml滤液50-200mg不 溶性聚乙烯吡咯烷酮的比例，在滤液中加入不溶性聚乙烯吡咯烷酮，有白色沉淀物产生，振 荡后放置30°C水浴锅中，吸附10-30min，离心去沉淀，取上清液；所述基于Berthelot反应 的分光光度法测定茶叶中r-氨基丁酸含量为取上述上清液1ml，加0. 01 mol/L四硼酸钠 缓冲液lmL，体积百分比6%重蒸苯酚溶液lmL，有白色絮状物产生，振荡溶解，混勻后再加 入体积百分比7. 5% Natno溶液5mL，振荡；于沸水中加热IOmin后置于冰浴中5min，取上 清液，加入体积百分比60%的乙醇溶液2. OmL,于波长645nm、Icm比色皿测定其吸光度，再 据标准曲线便可计算出茶叶中Y-氨基丁酸含量。
全文摘要
本发明涉及一种简便快速测定茶叶中γ-氨基丁酸的方法，利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮去除茶样中的茶多酚类物质，然后基于Berthelot反应的分光光度法测定茶叶中r-氨基丁酸含量。本发明通过与纸电泳法的比较实验、α-氨基酸的干扰实验及加标样的回收实验确定该方法的特异性、稳定性及准确性。结果表明本发明利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮去除茶样中的茶多酚类物质，消除茶多酚干扰；利用本发明与纸电泳法两种方法测得的茶叶中GABA含量无显著差异；本发明测定茶叶GABA含量具有较高的可靠性，平均加样回收率为98.2%；同时α-氨基酸对该方法测定茶叶中GABA含量没有明显干扰，表明该法对于γ-氨基酸具有较好的特异性。
文档编号G01N21/31GK102033047SQ20101056091
公开日2011年4月27日 申请日期2010年11月26日 优先权日2010年11月26日
发明者刘仲华, 施玲, 李顺文, 杨新河, 毛清黎, 毛雅慧, 龚雨顺 申请人:毛清黎