专利名称：光敏染料锇配合物及其制备方法、癌变早期 dna 氧化损伤快速检测试剂盒及检测方法
技术领域：
本发明具体涉及一种光敏染料锇配合物及其制备方法、使用该光敏染料锇配合物进行癌变早期DNA氧化损伤快速检测的试剂盒及检测方法。
背景技术：
癌症，一旦发现大多已处于晚期，令医者回天乏术，只有早期诊断才能防患于未然。化学反应、辐射以及单线态氧、超氧自由基和羟基自由基等需氧代谢的副产物都可导致DNA的氧化损伤，产生基因突变，诱发肿瘤、机体细胞的老化和某些退行性疾病。而DNA的四个碱基中鸟嘌呤G最容易被氧化，其主要氧化产物是8-氧-7，8- 二氢脱氧鸟嘌呤(8-羟基鸟嘌呤，8-oxoG)，它在体内形成后较为稳定，是DNA氧化损伤的重要生物标识物，对它的监测可以反映DNA受损程度，从而对癌变进行早期预警、预防。因此，快速、专一、可靠地检测DNA中的8-oxoG方法的研究，具有十分重要的理论和现实意义。目前DNA中8-oxoG的常规检测方法主要有:酶联免疫分析、高效液相色谱与电化学/质谱联用、毛细管气象色谱-质谱联用、凝胶电泳等。但这些方法都不具备专一性，并且需要先对DNA进行水解、酶解、衍生化、杂交等预处理，再借助专门的技术和仪器进行检测，分析时间较长，限制了它们在常规体检及门诊化验上的推广应用。三联卩比卩定锇(Os(bpy) 33+, 0.63V vs Ag/AgCl)是文献报道(R.C.Holmberg, Μ.T.Tierney, P.A.Ropp, E.E.Berg, M.ff.Grinstaff, Η.H.Thorp, Inorg.Chem.2003, 42, 6379 ；V.A.Szalai, M.J.Singer, H.H.Thorp, J.Am.Chem.Soc.2002, 124, 1625 ；P.A.Ropp, H.H.Thorp, Chem.Biol.1999, 6，599 ； A.Mugweru, B.Wang, J.Rus I ing, Anal.Chem.2004, 76, 5557 ；L.Dennany, R.J.Forster, B.White, M.Smyth, J.F.Rusling, J.Am.Chem.Soc.2002，124，1625)中唯一可以专一氧化 8-oxoG (0.5±0.IV vs Ag/AgCl)的化
学试剂，目前它已在8-oxoG的电化学检测中得到了很好的应用，其原理如下所示。
权利要求
1.一种光敏染料锇配合物，其特征在于，该光敏染料锇配合物具有下列结构通式1: LL，L，，Os-Y4( 1 ) 通式I中，Y为卤素离子、C104_、BF4_、PF6_*0Ts_，L、L’各自独立地选自以下配体:
2.一种用于制备权利要求1所述的光敏染料锇配合物的方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)制备以L、L’为配体的锇配合物中间体 将各自独立地选自下述化合物的配体L、L’与以Y’为负离子的金属锇盐同时或依次进行配位反应，得到通式LL’ Os-Y’的锇配合物中间体，反应温度为20-200°C，反应时间为l-24h，反应溶剂选自甲醇、乙醇、乙二醇、乙腈、水、DMF、DMS0以及其中任意两种或两种以上按照任意比例组成的混合溶剂，
3.一种癌变早期DNA氧化损伤快速检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括A、B、D三种成分: (1)成分A:主体化合物八元瓜环； (2)成分B:作为客体化合物I的权利要求1所述的光敏染料锇配合物； (3)成分D:纯水或磷酸盐、硼酸盐缓冲溶液。
4.如权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,该试剂盒还进一步包括: (4)成分C:作为客体化合物II的荧光小分子，该荧光小分子具有下列结构通式II:
5.一种癌变早期DNA氧化损伤快速检测方法，其特征在于，该方法使用权利要求3所述的试剂盒进行检测，具体包括如下步骤: (1)首先将成分A、B按照摩尔比1-5:1的比例溶解到成分D中，以成分B的浓度计，配成浓度为10 μ M-1mM的溶液，然后取适量的该溶液加入到透明容器中，惰性气体除氧，密封待用； (2)将待测样品加入到上述透明容器中，光照15-30分钟后，肉眼观察颜色变化或用光学仪器检测吸收光谱变化。
6.一种癌变早期DNA氧化损伤快速检测方法，其特征在于，该方法使用权利要求4所述的试剂盒进行检测，具体包括如下步骤: (1)首先将成分Α、B、C按照摩尔比1-5:1:1的比例溶解到成分D中，以成分B或C的浓度计，配成浓度为IOyM-1mM的溶液，然后取适量的该溶液加入到透明容器中，惰性气体除氧，密封待用； (2)将待测样品加入到上述透明容器中，光照15-30分钟后，肉眼观察颜色变化或用光学仪器检测紫外可见吸收和/或荧光发射光谱变化。
7.如权利要求5或6所述的检测方法，其特征在于，所述光照采用的光源为太阳光或能够激发所述光敏 染料锇配合物的照明灯光。
全文摘要
本发明提供了一种光敏染料锇配合物及其制备方法、使用该光敏染料锇配合物进行癌变早期DNA氧化损伤快速检测的试剂盒及检测方法。光敏染料锇配合物具有结构通式LL’L’’Os-Y4，其中Y为卤素离子、ClO4-、BF4-、PF6-或OTs-，L、L’各自独立地选自2,2’-联吡啶及其衍生物、邻菲罗啉及其衍生物或DPPZ，L’’为具有2,2’-联吡啶和4,4’-联吡啶结构的配体。试剂盒至少包括主体化合物八元瓜环(成分A)、上述光敏染料锇配合物(成分B)及纯水或磷酸盐、硼酸盐缓冲溶液(成分D)。使用该试剂盒，仅需一滴血样，即使在不借助任何仪器设备的条件下，凭借肉眼，在可见光照射下即可专一、快速检测8-oxoG。
文档编号G01N21/31GK103205135SQ201310148539
公开日2013年7月17日 申请日期2013年4月25日 优先权日2013年4月25日
发明者孙世国, 慕道洲, 彭孝军, 蔡明珠, 王继涛 申请人:大连理工大学