专利名称：唑来膦酸原料、冻干及其注射液有关物质和含量的检验方法
技术领域：
本发明涉及唑来膦酸原料、冻干及其注射液有关物质和含量的检验方法。
背景技术：
恶性高钙血症是一种由癌症引起的可危及生命的骨代谢性并发症。约有10％的癌症患者患有高钙血症或骨钙水平升高，唑来磷酸为诺华公司开发的治疗高钙血证的药物，2000年在加拿大首次上市，目前在美国、英国等国家已上市销售。
唑来膦酸是异环型第三代的双膦酸类药物，是目前为止临床试验中显示作用最强的双膦酸盐化合物。本品能方便地静注，把帕米膦酸二钠静注所需的时间由2小时缩短到5分钟，所需的临床护理时间短、作用空间小及病人耗时短，因而优于帕米膦酸二钠的长时间静脉给药。其临床剂量仅为4mg，每月一次，却能产生比其它双膦酸类药物更明显更长久地抑制骨质吸收作用、降低疼痛中值百分数、降低肿瘤骨转移的发生率。开发商诺华公司(Novartis)认为本品疗效优于同类治疗药帕米膦酸二钠，并具有同等耐受性，与帕米膦酸二钠相比，本品能更快、更持久地使血钙水平恢复正常，因此有望在临床上替代帕米膦酸二钠。
本品传统的色谱检验系统基本上是全水相，其中不含有机相，平衡时间太长，而且对传统的色谱柱损伤很大，耗费成本较大，必须摸索出一种合理的色谱系统，制订出简便、快速、稳定的有关物质和含量的检验方法，以便有效地控制本品质量。

发明内容
本发明就是提供唑来膦酸原料、冻干及其注射液有关物质和含量的检验方法。
本发明是这样实现的，唑来膦酸原料、冻干及其注射液有关物质和含量的检验方法以十八烷基键合硅胶为填充剂；0.03％氢氧化四丁基铵水溶液-乙腈(100∶20)为流动相，检测波长为218nm，理论板数以唑来膦酸峰计算应不低于2500，流动相的配制为取10％氢氧化四丁基铵水溶液0.3ml，加至100ml水中，以磷酸调节pH＝2.55；其含量测定方法为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-四氢呋喃-0.05mol/L磷酸二氢铵(4∶1∶100，磷酸调节pH＝2.55)为流动相，检测波长为218nm。理论板数以唑来膦酸峰计算应不低于2500。
本发明能有效控制唑来膦酸原料、冻干及其注射液的质量，而且可以缩短检验时间，减轻对色谱柱的损伤，降低测试成本，满足企业生产的需要。
具体实施例方式
本发明是这样来实现的，唑来膦酸原料、冻干及其注射液有关物质检测方法为以十八烷基键合硅胶为填充剂；0.03％氢氧化四丁基铵水溶液[取10％氢氧化四丁基铵水溶液0.3ml，加至100ml水中](磷酸调节pH＝2.55)-乙腈(100∶20)为流动相，检测波长为218nm，理论板数以唑来膦酸峰计算应不低于2500。其含量测定方法为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-四氢呋喃-0.05mol/L磷酸二氢铵(4∶1∶100，磷酸调节pH＝2.55)为流动相，检测波长为218nm。理论板数以唑来膦酸峰计算应不低于2500。
唑来膦酸原料、冻干及其注射液有关物质检测方法1、仪器Agilent 1100高效液相色谱仪、AG285电子分析天平；2、试剂唑来膦酸对照品、10％四丁基氢氧化铵水溶液、磷酸、乙腈；3、测定方法①唑来膦酸取本品25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照高效液相色谱法试验(中国药典2000年版二部附录VD)，以十八烷基键合硅胶为填充剂；0.03％四丁基氢氧化铵水溶液[取10％四丁基氢氧化铵水溶液0.3ml，加至100ml水中](磷酸调节pH＝2.55)-乙腈(100∶20)为流动相，检测波长为218nm，理论板数以唑来膦酸峰计算应不低于2500。取对照溶液20μl注入液相色谱仪中，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10％～25％；再分别取供试品溶液和对照溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液中如有杂质峰，量取各杂质峰面积之和，应不大于对照溶液主峰面积(1.0％)，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1/2(0.5％)。
②注射用唑来膦酸取本品内容物适量(约相当于唑来膦酸25mg)，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照高效液相色谱法试验(中国药典2000年版二部附录VD)，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，0.03％四丁基氢氧化铵水溶液[取10％四丁基氢氧化铵水溶液0.3ml，加至100ml水中](磷酸调节pH＝2.55)-乙腈(100∶20)为流动相，检测波长为218nm，理论板数以唑来膦酸峰计算应不低于2500。取对照溶液20μl注入液相色谱仪中，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10％～25％；再分别取供试品溶液和对照溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液中如有杂质峰(辅料峰除外)，量取各杂质峰面积之和，应不大于对照溶液主峰面积(1.0％)，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1/2(0.5％)。
③唑来膦酸注射液取本品，作为供试品溶液；量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照高效液相色谱法试验(中国药典2000年版二部附录VD)，以十八烷基键合硅胶为填充剂；0.03％四丁基氢氧化铵水溶液[取10％四丁基氢氧化铵水溶液0.3ml，加至100ml水中](磷酸调节pH＝2.55)-乙腈(100∶20)为流动相，检测波长为218nm，理论板数以唑来膦酸峰计算应不低于2500。取对照溶液20μl注入液相色谱仪中，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10％～25％；再分别取供试品溶液和对照溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液中如有杂质峰(辅料峰除外)，量取各杂质峰面积之和，应不大于对照溶液主峰面积(1.0％)，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1/2(0.5％)。
唑来膦酸原料、冻干及其注射液含量检测方法1、仪器Agilent1100高效液相色谱仪、AG285电子分析天平；2、试剂唑来膦酸对照品、10％四丁基氢氧化铵水溶液、磷酸、乙腈；3、测定方法①唑来膦酸取本品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml中约含50μg的唑来膦酸溶液，作为供试品溶液。另取120℃下干燥至恒重的唑来膦酸对照品，同法制成对照品溶液。照高效液相色谱法(中国药典2000年版二部附录VD)测定，用十八烷基键合硅胶为填充剂，乙腈-四氢呋喃-0.05mol/L磷酸二氢铵(4∶1∶100，磷酸调节pH＝2.55)为流动相，检测波长为218nm。理论板数以唑来膦酸峰计算应不低于2500。精密量取供试品及对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，按外标法计算即得。
②注射用唑来膦酸取本品内容物适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml中约含50μg的唑来膦酸溶液，作为供试品溶液。另取120℃下干燥至恒重的唑来膦酸对照品，同法制成对照品溶液。照高效液相色谱法(中国药典2000年版二部附录VD)测定，用十八烷基键合硅胶为填充剂，乙腈-四氢呋喃-0.05mol/L磷酸二氢铵(4∶1∶100，磷酸调节pH＝2.55)为流动相，检测波长为218nm。理论板数以唑来膦酸峰计算应不低于2500。精密量取供试品及对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，按外标法计算即得。
③唑来膦酸注射液精密量取本品3ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取120℃干燥至恒重的唑来膦酸对照品适量，精密称定，加流动相溶解并制成每1ml约含50μg的溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法(中国药典2000年版二部附录VD)测定，用十八烷基键合硅胶为填充剂，乙腈-四氢呋喃-0.05mol/L磷酸二氢铵(4∶1∶100，磷酸调节pH＝2.55)为流动相，检测波长为218nm。理论板数以唑来膦酸峰计算应不低于2500。精密量取供试品及对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，按外标法计算即得。
权利要求
1.唑来膦酸原料、冻干及其注射液有关物质和含量的检验方法以十八烷基键合硅胶为填充剂；0.03％氢氧化四丁基铵水溶液-乙腈100∶20为流动相，检测波长为218nm，理论板数以唑来膦酸峰计算应不低于2500，流动相的配制为取10％氢氧化四丁基铵水溶液0.3ml，加至100ml水中，以磷酸调节pH＝2.55；其含量测定方法为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-四氢呋喃-0.05mol/L磷酸二氢铵4∶1∶100，磷酸调节pH＝2.55为流动相，检测波长为218nm。理论板数以唑来膦酸峰计算应不低于2500。
全文摘要
本发明公开了唑来膦酸原料、冻干及其注射液有关物质和含量的检验方法。以十八烷基键合硅胶为填充剂； 0.03％氢氧化四丁基铵水溶液－乙腈(100∶20)为流动相，检测波长为218nm，理论板数以唑来膦酸峰计算应不低于2500，流动相的配制为取10％氢氧化四丁基铵水溶液0.3ml，加至100ml水中，以磷酸调节pH＝2.55；其含量测定方法为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈－四氢呋喃－0.05mol/L磷酸二氢铵(4∶1∶100，磷酸调节pH＝2.55)为流动相，检测波长为218nm。理论板数以唑来膦酸峰计算应不低于2500。它简便、快速、稳定的有关物质和含量的检验方法，以便有效地控制生产质量。
文档编号G01N30/88GK1693891SQ20051004009
公开日2005年11月9日 申请日期2005年5月16日 优先权日2005年5月16日
发明者蔡伟, 张玉斌, 曹燕锋, 刘江华, 戚苏明, 王喜习, 尹必喜 申请人:扬子江药业集团有限公司