专利名称：一种快速检测猪流感h1n1病毒的胶体金试纸条的制作方法
技术领域：
本实用新型属于预防兽医学检验领域，具体地说是涉及一种'I^I检测猪流感H1N1 病毒的胶体^i式纸条。
背景技术：
猪流感病毒(swine influenza virus, SIV)属于正粘病毒科A型流自毒属，能
引起不同曰龄、性另诉n品种的猪发生急性、热性和高度撤虫性呼吸道传染病，其临床上
以突发、高热、咳嗽、呼吸困难、衰竭和死亡为特征。1918年美国首次J隨了猪流感 的暴发，1930年sh叩e从猪体中首次分离出H1N1亚型猪流感病毒。迄今为止，猪流感 己遍布美、欧、亚、非等世界各地。目前，已经发现的SIV包括H1N1、H1N2、H1N7、H3N2、H3N6、 H4N6、 H5N1和H9N2等亚型。但以经典H1N1，禽类H1N1和类人H3N2亚型毒株为主。我 国猪流感于1969年由台湾首次报道，1991年首^A猪群中分离到H1N1亚型猪流感病 毒。郭元吉(1985)、倪汉忠(2000)、张苏华(2002)、李海燕(2003)等X寸我国不同 地区做了血清学调查，结果表明，随年份的递增，我国猪流感阳性^tf加。
目前，X^E感病毒的检测方法主魏病毒分离、血清学诊断以及力吁生物学方法，
但病毒分离时间长，要求条件高，分离率低，而采集患者急性期与恢复期双份血^it行 抗術则定来确认，又不會扱时进衍会断，因此，使这些方法在《顿中穀舰大柳蹄1J，
也未见有可用的^a或者其它的检测工具。
发明内容
本实用新型的目的是樹共一种t^I检测猪流感H1N1病毒的胶体^i式纸条，它能满 足现有技术的Jl^需求。
一种^I检测猪流感HlNl病毒的胶体^i錄氏条，^#征在于有一底衬、i繊衬上 面的中部粘帖H劍莫，该包I剣莫中部有一鲍被猪流感H1N1病毒抗体的检测线和一条 包被抗鼠抗体的控制线，包柳莫的上面左右分另鹏帖一涂覆金标抗体的鹏纤维膜和吸 7KI氏；涂覆金标抗体的自纤维MJL面粘贴一样品垫。
本实用新型禾佣现代国际最先进的胶体金免疫层析技术，ilf共一种现地农户、基层自测等用的检测猪流感H皿病毒的胶体锁氏条，该i錄氏条具有特异性强、灵鹏高、 检测繊快靴点，且不需4顿仪器设备，成本i據，操作简便，會『泛应用于现i她
户、基层及个A^t^t流感mNi病毒的检测。


附图为本实用新型的纵剖结构示意图。
具体实施方式

本实用新型決速检测猪流感H皿病毒的胶体^i尨氏条，如图所示，有一底衬l、该 底衬1上面的中部粘帖一包MI莫4,该包被膜4中部有一条包被猪流感H1N1病毒抗体的 检测线6和一純被抗鼠抗体的控制线7，包柳莫4的上面左右分另鹏帖一涂覆金标抗 体的,纤维膜3和吸7KI氏5;涂覆金标抗体的自纤维膜3上面粘贴一样品垫2。
本实用新型的制造方法如下
用BALB/C小鼠免疫猪流感H1N1病毒，取其脾细胞与SP2/0细胞融合^1瘤细胞株， 进行筛选，取瘤细胞,于BALB/C小鼠臓空，使其产^7jC。提取小鼠月勤X^行纯化 筛选，获得能与猪流感H1N1病毒产生中和反应的单克隆抗体用于胶体金t射己。
制备包!湖莫4时，将0.05M、 pH9.6的碳麟缓冲液(PBS)用0.22u膜过滤，制成 包被缓冲液。另将20g牛血清白蛋白(BSA)和20g脱脂奶溶于lOOOmlO. 01M、pH7. 0的PBS 用0.22u膜过滤，制j^i寸闭工作液。调试喷膜机，用，包被缓冲液^ 畢OT流感H1N1 病毒的单克隆抗体和抗鼠IgG多克隆抗体，分别在硝酸纤维膜中部J^麟，两线间隔5ram， 应细致均匀，室温晾干20辦中，该两鄉的液体分别渗入硝酸纤维膜中，即分别为检测 线6和控制线7。用上述封闭工作液将硝酸纤^I于37"C封闭60 6H中，取出后置于37 。C烘干处理两小时，制成包MI莫4。
制造涂a^标抗体的,纤维膜3时，将10g氯金酸用1000ml双蒸7jC溶解，配成 7K溶液；将10g拧檬酸三钠用1000ml双蒸水溶解，配成水溶液；将13.8g碳酸钾溶于 1000ml双蒸水，用0. 22u膜过滤，酉己制^^,7jC溶液；将20g BSA溶于1000ml 0. OIM、 pH7. 0的PBS中，用0. 22u膜过滤配j^gi己洗涤液;将10g BSA、 5g脱脂奶粉、0. 5g NaN3 和lml Tween-20在1000 ml 0. OIM、 pH 7.0 PBS中溶解，用0.22u膜滤过，酉己齢标 抗体保存液。用双蒸水将1%氯金酸##成0.01%,置电炉^^弗，按每100毫升0.01% 氯金働队4毫升1%掛蒙酸三纳，继续蕭弗，直到液体呈亮红色即停効鹏，7賴卩至室添补足勿JC。夕卜观应纯净，透亮，无沉淀和漂浮物，即为烧制成的胶体金。用0.1M 碳,7jC溶液调胶体金的pH {直至7.6，按10微克抗体/毫升胶体金加入抗猪流感H1N1 病毒的单克隆抗体，混匀，静置30辦中，以12000rpm离心30全H中，弃去上清，将所 得沉淀用硫洗涤液洗涤两次，最后一次弃去上清液，将所得沉淀用十分之一初始胶体 金^f只的金标抗体保存液溶解，酉己制齢标抗体。将JL^fei己好的标抗体均匀地涂敷在 玻璃纤维膜上，每毫升溶液涂敷铺10平方棘，千燥，帝幌覆金标抗体的鹏纤维膜3。 戶;f^衬l、样品垫2和吸7KIK5是本领i^l用的材料。将上述包被膜4、 S^标抗
体的自纤维膜3、底衬l、样品垫2和船KI氏5依次粘贴起来，得至lji彩舒反，最后将该 试鄉反切割跡同宽度的i錄氏条即可。
本实用新型可用来检测血液样品或者棉拭子等处理样品，由于检测线6和控制线7 倉,产生特异功能，从而满足郷敏户、基层检测的需求。在縱氏条的检测线6和控制 线7位置上各出现一条紫红色条带为阳性结果；仅i彩氏条的鹏线7位置上出现一条紫 红色絲为阴性结果；在i錄氏条的检测线6和控制线7位置上均未出现紫红色条带为无 效结果。
权利要求1.一种快速检测猪流感H1N1病毒的胶体金试纸条，其特征在于有一底衬(1)、该底衬(1)上面的中部粘帖一包被膜(4)，该包被膜(4)中部有一条包被猪流感H1N1病毒抗体的检测线(6)和一条包被抗鼠IgG抗体的控制线(7)，包被膜(4)的上面左右分别粘帖一涂覆金标抗体的玻璃纤维膜(3)和吸水纸(5)；涂覆金标抗体的玻璃纤维膜(3)上面粘贴一样品垫(2)。
2. 根据权利要求1所述的快速检测猪流感H1N1病毒的胶体金试纸 条，其特征在于所述的检测线(6)中包被的猪流感H1N1病毒的抗体为高 纯度的抗单克隆抗体和/或多克隆抗体。
3. 根据权利要求1所述的快速检测猪流感H1N1病毒的胶体金试纸 条，其特征在于所述的涂覆金标抗体的玻璃纤维膜(3)中有由胶体金颗粒 标记的抗猪流感H1N1病毒的单克隆抗体。
专利摘要一种快速检测猪流感H1N1病毒的胶体金试纸条，其特征在于有一底衬、该底衬上面的中部粘帖一包被膜，该包被膜中部有一条包被猪流感H1N1病毒抗体的检测线和一条包被抗鼠抗体的控制线，包被膜的上面左右分别粘帖一涂覆金标抗体的玻璃纤维膜和吸水纸；涂覆金标抗体的玻璃纤维膜上面粘贴一样品垫。本实用新型利用现代国际最先进的胶体金免疫层析技术，提供一种现地农户、基层自测等用的检测猪流感H1N1病毒的胶体金试纸条，该试纸条具有特异性强、灵敏度高、检测速度快等优点，且不需使用仪器设备，成本低廉，操作简便，能广泛应用于现地农户、基层及个人对于猪流感H1N1病毒的检测。
文档编号G01N33/577GK201413328SQ200920026848
公开日2010年2月24日 申请日期2009年6月2日 优先权日2009年6月2日
发明者凌红丽, 崔尚金, 蒋贻海, 贾德强, 高亚东 申请人:青岛康地恩药业有限公司;青岛宝依特生物制药有限公司