专利名称：一种鉴别山茱萸药材或衍生品的方法
技术领域：
本发明属于天然药用植物的鉴别领域，具体地，涉及一种鉴别山茱萸药材或衍生品的方法。
背景技术：
山茱萸(Salvia miltiorrhiza Bge.)是山茱萸科植物山茱萸(Cornusofficinalis Sieb.et Zucc.)的干燥成熟果肉，为我国著名的中药材。山茱萸归肝、肾经，药性微温，味酸、涩，具有补益肝肾、收涩固脱的功效[国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版一部.中国医药科技出版社，26]。其活性成分主要为环烯醚萜苷类化合物，具有降血糖、抗失血性休克、抑制血小板聚集、调节免疫、抗菌抗炎等作用[刘洪，等.南京中医药大学学报2003，19 (4): 254.]。定性鉴别上述某类活性成分或定量测定其某种活性成分含量，已成为评价山茱萸及其制剂质量的重要方法。例如中国药典2010版是用HPLC法对山茱萸药材中环烯醚萜苷类成分马钱苷进行定性和定量分析。但这种针对单一成分进行定性、定量分析的质量检测模式不能有效控制中药材的内在质量，无法满足当前对于客观有效地评价和控制山茱萸及其制剂质量的迫切要求。指纹图谱技术是目前国际公认的控制中药或天然药物质量最有效的方法。人们凭借实用的指纹图谱不仅可确认该产品的真伪，同时能评价其质量。目前，山茱萸药材及其制剂的环烯醚萜苷类化合物的指纹图谱研究工作，集中在HPLC指纹图谱[①王花红，等.西北植物学报2004，24 (10):1922.②李小娜，等.中华中医药杂志2006，21 (10):617.]。而HPLC指纹图谱由于受非色谱条件(如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等)影响较大和需用多个标准品等等原因，重复性和可行性均存在许多局限性。I⑶核磁共振碳谱偶联(I⑶13C NMR coupling)指纹图谱技术，也叫反门控去偶核磁共振碳谱偶联指纹图谱技术，该技术是在已研究多年的核磁共振氢谱(1H NMR)指纹图谱技术[赵天增，等.1HNMR指纹法鉴定植物中药，中草药2000，31 (11) =868-870]的基础上联合其他技术(例如目前应用最广泛的高效液相(HPLC)指纹图谱技术[谢培山等，中药色谱指纹图谱，人民卫生出版社，2005])提出的一种新的非单一手段综合指纹图谱技术。山茱萸的品质不在于某个单一成分，其疗效是多个成分协同配比的结果。因此，建立不仅能控制山茱萸活性成分，而且能控制这些活性成分之比例的IGD核磁共振碳谱偶联指纹图谱势在必行。山茱萸药材或衍生品核磁共振碳谱偶联指纹图谱的研究与应用，不仅可以解决我国山茱萸药材或衍生品鉴别和评价的难题，也为加强山茱萸药材或衍生品内在成分研究的系统化与标准化，实现与国际接轨提供了科学的保证。随着该技术在其他中药材或衍生品中的推广应用，该技术的重大科学价值必将日趋突出
发明内容
为了解决现有技术的问题，本发明的目的在于提供一种鉴别山茱萸药材或衍生品的方法，该方法利用了 IGD核磁共振碳谱偶联指纹图谱技术。为了实现上述目的，本发明提供的鉴别山茱萸药材或衍生品的方法，包括以下步骤:I)对山茱萸药材或衍生品进行提取，得到含有活性成分组的山茱萸环烯醚萜苷特征提取物；2)对所述山茱萸环烯醚萜苷特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，根据指纹图谱得到所述山茱萸环烯醚萜苷特征提取物中若干个活性成分特征峰峰强度；并用相同方式(IGD核磁共振碳谱指纹图谱)测定出所述各活性成分相应标准参照品的特征峰峰强度；3)通过定量分析手段测定得到所述标准参照品的绝对含量；4)利用所述特征峰峰强度(各活性成分特征峰峰强度及相应标准参照品的特征峰峰强度)的比值和所述绝对含量，计算出山茱萸药材或衍生品中各活性成分的含量及该类活性成分的总含量，即活性成分组的含量。其中，步骤I)中，山茱萸环烯醚萜苷特征提取物的制备方法，包括:称取山茱萸药材或饮片粉碎，加入体积为6 10倍量、2(Γ25%的乙醇回流提取或超声提取2 3次，每次提取f 2小时，过滤后合并滤液，减压浓缩；取浓缩后的滤液，用其重量为f 2倍量的大孔吸附树脂装柱，先后以10 20%乙醇、30 50%乙醇和90 95%乙醇冲柱，收集30 50%乙醇洗脱液，减压蒸干，即得山茱萸环烯醚萜苷特征提取物。这里表示乙醇浓度的百分数均为质量浓度。进一步地，回流提取的温度为9(T95°C，超声提取的温度为6(T65°C。进一步地，山茱萸药材或饮片粉碎后过24飞0目筛。进一步地，所述大孔吸附树脂的型号为HP-20、D-101、D-201、SP-825或SP-70，优选 HP-20、D-101 或 SP-825。进一步地，所述大孔吸附树脂的径高比为8 15:1，优选1(Γ12:1。进一步地，用于冲柱的乙醇的体积为浓缩后滤液的20-40倍，优选三次冲柱的体积分布为20-25,30-40和20-25倍。其中，步骤2)中，对山茱萸环烯醚萜苷特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，溶解山茱萸环烯醚萜苷特征提取物的溶剂为氘代氯仿(⑶Cl3)、氘代甲醇(⑶3C(X:D3)或氘代二甲基亚砜(DMS0-d6)，优选氘代甲醇；山茱萸环烯醚萜苷特征提取物和相应溶剂的质量体积比为55:1飞5:1 (mg:mL)，优选60:1。山茱萸饮片可用上述方法进行鉴别；其他山茱萸衍生品，如山茱萸环烯醚萜苷提取物可直接作为山茱萸环烯醚萜苷特征提取物，用上述方法进行鉴别。其中，步骤2)中，山茱萸环烯醚萜苷特征提取物中的活性成分特征峰为C-1l吸收峰，其化学位移为5C164.0^220.00其中，步骤2)中，所述峰强度可以采用峰高法、面积积分法或重量法计算。其中，步骤3)中，所述定量分析手段为:高效液相(HPLC)法。进一步地，所述高效液相法的条件包括:流动相为乙腈冰=10^20:8(Γ9，优选15:85 ;检测波长为240nm。

其中，步骤3)中，所述标准参照品的绝对含量是指:用定量分析手段测定的标准参照品的质量百分含量。
进一步地，山茱萸环烯醚萜苷特征提取物中的活性成分的标准参照品为马钱苷。其中，步骤4)中，计算各活性成分的含量的偶联公式为:
权利要求
1.一种鉴别山茱萸药材或衍生品的方法，包括以下步骤: 1)对山茱萸药材或衍生品进行提取，得到含有活性成分组的山茱萸环烯醚萜苷特征提取物； 2)对所述山茱萸环烯醚萜苷特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，根据指纹图谱得到所述山茱萸环烯醚萜苷特征提取物中若干个活性成分特征峰峰强度；并用相同方式测定出所述各活性成分相应标准参照品的特征峰峰强度； 3)通过定量分析手段测定得到所述标准参照品的绝对含量； 4)利用各活性成分特征峰峰强度及相应标准参照品的特征峰峰强度的比值和所述绝对含量，计算出山茱萸药材或衍生品中各活性成分的含量及活性成分组的含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤I)中，山茱萸环烯醚萜苷特征提取物的制备方法，包括:称取山茱萸药材或饮片粉碎，加入体积为6 10倍量、2(Γ25%的乙醇回流提取或超声提取2 3次，每次提取Γ2小时，过滤后合并滤液，减压浓缩；取浓缩后的滤液，用其重量为I 2倍量的大孔吸附树脂装柱，先后以10 20%乙醇、30 50%乙醇和90 95%乙醇冲柱，收集3(Γ50%乙醇洗脱液，减压蒸干，即得山茱萸环烯醚萜苷特征提取物。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂的型号为ΗΡ-20、D-1OU D-20USP-825或SP-70 ;所述大孔吸附树脂的径高比为8 15:1。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，步骤2)中，对山茱萸环烯醚萜苷特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，溶解山茱萸环烯醚萜苷特征提取物的溶剂为氘代氯仿、氘代甲醇或氘代二甲基亚砜；山茱萸环烯醚萜苷特征提取物和相应溶剂的质量体积比为55:1 65:1。
5.根据权利要求广4任意一项所``述的方法，其特征在于，步骤2)中，山茱萸环烯醚萜苷特征提取物中的活性成分特征峰为C-1l吸收峰，其化学位移为δ c164.(Γ220.0。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中，所述定量分析手段为高效液相法。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中，所述标准参照品的绝对含量是指:用定量分析手段测定的标准参照品的质量百分含量。
8.根据权利要求Γ7任意一项所述的方法，其特征在于，山茱萸环烯醚萜苷特征提取物中的活性成分的标准参照品为马钱苷。
9.根据权利要求Γ8任意一项所述的方法，其特征在于，步骤4)中，计算各活性成分的含量的偶联公式为:
10.根据权利要求1、任意一项所述的方法，其特征在于，所述山茱萸衍生品包括:山茱萸饮片、山茱 萸提取物或山茱萸天然药物。
全文摘要
本发明涉及一种鉴别山茱萸药材或衍生品的方法，包括1)对山茱萸药材或衍生品进行提取，得到含有活性成分组的山茱萸环烯醚萜苷特征提取物；2)对山茱萸环烯醚萜苷特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，根据指纹图谱得到所述山茱萸环烯醚萜苷特征提取物中若干个活性成分特征峰峰强度；并用相同方式测定出各活性成分相应标准参照品的特征峰峰强度；3)通过定量分析手段测定得到标准参照品的绝对含量；4)利用特征峰峰强度的比值和绝对含量，计算出山茱萸药材或衍生品中各活性成分的含量及活性成分组的含量。本发明可以反映山茱萸中含有哪些山茱萸环烯醚萜苷类化合物以及它们之间的比例，达到对山茱萸药材品种和质量质量鉴定的目的。
文档编号G01N30/02GK103105408SQ20131003605
公开日2013年5月15日 申请日期2013年1月30日 优先权日2013年1月30日
发明者张海艳, 赵天增, 董建军, 李倩, 魏悦, 范毅, 常霞, 郭唯, 王伟, 李自红 申请人:河南省科高植物天然产物开发工程技术有限公司