专利名称：一种食用油脂过氧化值测定组合试剂及检测方法
技术领域：
本发明涉及过氧化值的测定，尤其涉及一种食用油脂过氧化值测定组合试剂及检测方法。
背景技术：
众所周知，食用油脂或含油食品，从生产到消费需要一定时间，有时需要长期贮藏，而在贮存或使用期间，油脂或含油食品易受空气中的氧气、光照等的影响而进行以氧化为主体的反应，不仅在感官上发生变化，如色泽加深、产生令人不快气味(主要是生成的过氧化物易部分分解形成的醛类物质引起的)，而且会使营养劣变，劣变程度严重甚至会产生有毒物质，威胁到消费者的身体健康。目前以油脂氧化产物为检测对象的方法主要有以下这些:碘量法是过氧化物检测的标准方法，其原理是在酸性介质中，过氧化物与碘离子反应生成单质碘，再用硫代硫酸钠标准溶液滴定析出的碘，并根据消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积来计算油脂的过氧化值。此法操作繁琐，灵敏度低，取样量大，检测费用高，仅适用于含0.2mEq/kg以上过氧化物的测定，同时易对环境造成污染。硫代巴比妥酸法是实验室常用的油脂氧化检测的方法，此方法已有检测试纸的专利(专利号JP51151191)。丙二醛是油脂氧化产生的诸多不饱和醛酮产物中主要产物之一，它与硫代巴比妥酸生成的红色化合物，在530nm处有最大吸收，测定有色物的吸光度值，以此来衡量油脂的氧化 程度。该方法的缺点主要为:因加热使检测结果有误差。硫氰酸铁法，它的原理是在酸性条件下二价铁离子可被过氧化物氧化成三价铁离子，当加入硫氰酸根离子时，则与铁离子形成橙红色的络合物，在480-515 nm内有最大吸收值，通过比色即可测出过氧化物的含量。但该方法中，甲醇混合试剂溶解油脂样品，有害于人体且污染环境。一种基于电导率的食用油过氧化值测定方法(专利申请号CN201210324117.6)，其原理是称取一定量的食用油样品，加入一定量异辛烷和浓盐酸，混合均匀，加入饱和碘化钾溶液，振荡后，立即加入一定量蒸馏水稀释一定比例，振荡后静置时间，用电导率仪测定混合水相的电导率值。这类方法对操作人员要求高，同时设备复杂、成本过高，不利于推广使用。综上所述，各种检测方法的灵敏度、精确度、检测简繁程度和成本等方面均存在较大差异，因而建立新的简便易行、灵敏度高，准确性好，检测条件温和，成本低廉，耗时少的绿色检测方法仍是社会的迫切要求和重要的研究目标。

发明内容
本发明为克服上述的不足之处，目的在于提供一种食用油脂过氧化值测定组合试齐U，组合试剂的使用简单易行、灵敏度高，大大降低成本，对人体无公害。本发明的另一目的在于提供一种食用油脂过氧化值测定方法，基于对色法原理，通过组合试剂对待测样品的过氧化值进行检测，操作简便快捷，准确率高，又环保安全。本发明是通过以下技术方案达到上述目的:一种食用油脂过氧化值测定组合试齐 ，包括:极性有机溶剂、还原剂、显色试剂、显色稳定剂；所述极性有机溶剂按质量百分比记，包括乙醇的质量浓度为237 710g/L ；所述还原剂按重量百分比记,包括硫酸亚铁的质量浓度为I 20g/L ；所述显色试剂为磺基水杨酸溶液，质量浓度为300 1000 g/L ；所述显色稳定剂为盐酸吡哆胺溶液，质量浓度为20 800 g/L。一种食用油脂过氧化值测定方法，包括以下步骤:(I)用移液枪移取液态待测样品，所述的待测样品的取样体积为20 40 μ L,同时记录下质量，加入极性有机溶剂和显色稳定剂的混合液，所述待测样品与极性有机溶剂的体积比为1:15 1:25，极性有机溶剂与显色稳定剂的体积比为1:30 1:40，涡流震荡；(2)在步骤(I)的混合液中加入还原剂，每克待测样品滴加的还原剂体积为5 12mL，润流震汤，室温下静直；(3)在步骤(2)的溶液中加入显色剂，每克待测样品滴加的显色剂体积为0.1 2mL，溶液以10000r/min以上的转速离心旋转10分钟；(4)取步骤(3)得到混合溶液的上清部分在500 550nm处测定吸光度值；(5)根据吸光度值 从铁离子标准曲线图上得到对应的铁离子浓度，并换算成单位质量的铁离子浓度作为过氧化值。作为优选，所述待测样品为液态。所述铁离子标准曲线图的制作包括以下步骤:(a)将还原铁粉加入盐酸和过氧化氢溶解后，加热除去过氧化氢，冷却后用水稀释混匀，制得10mg/mL的铁标准储备液；(b)利用步骤(a)制得的溶液以蒸馏水稀释的方法得到铁离子浓度为0、0.2,0.5、1、1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0 mg/mL的一系列梯度溶液，分别加入所述极性溶剂和显色稳
定剂后震荡30秒；(c)在步骤(b)得到的各溶液中加入还原剂后震荡30秒反应3分钟，再加入显色剂；(d)将步骤(C)得到的各溶液以10000r/min以上的转速离心10分钟，以铁离子浓度为O的反应管为参照在500 550nm处测定吸光度值；(e)分别以吸光度值、铁离子浓度为横、纵坐标绘制曲线，并用最小二乘法得到拟合的直线方程。本发明的有益效果在于:本发明采用比色分析的方法，油脂样本与组合试剂在常温下发生反应并显色，操作迅速简便，减少了加热对检测结果的干扰，检测结果直观性好；所用检测试剂种类较少，便于装配携带；可同时对多个油脂样本进行显色和检测，显色均匀，方便快捷，易于现场检测；所用检测试剂均低毒甚至无毒，安全环保。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此:
实施例1:本实施例的组合试剂为极性有机溶剂、还原剂、显色试剂、显色稳定剂；所述极性有机溶剂按体积百分比记，包括70%的乙醇；所述还原剂按重量百分比记，包括硫酸亚铁的质量浓度为3.6g/L ;所述显色试剂为磺基水杨酸溶液，质量浓度为528 g/L ;所述显色稳定剂为盐酸吡哆胺溶液，质量浓度为225 g/L。首先，需要制作铁离子标准曲线图。所述铁离子标准曲线图的制作包括以下步骤:(a)将还原铁粉加入盐酸和过氧化氢溶解后，加热除去过氧化氢，冷却后用水稀释混匀，制得10mg/mL的铁标准储备液；(b)利用步骤(a)制得的溶液以蒸馏水稀释的方法得到铁离子浓度为0、0.2,0.5、1、1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0 mg/mL的一系列梯度溶液，分别加入350 μ L的极性溶剂和10 μ L的显色稳定剂，震荡30秒；(C)在步骤(b)得到的各溶液中加入还原剂150 μ L后震荡30秒反应3分钟，再加入显色试剂IOyL;(d)将步骤(C)得到的各溶液以10000r/min以上的转速离心10分钟，以铁离子浓度为O的反应管为参照在510nm处测定吸光度值；(e)分别以吸光度值、铁离子浓度为横、纵坐标绘制曲线，并用最小二乘法得到拟合的直线方程。本实施例的采样油脂为小磨香油，一种食用油脂过氧化值测定方法，具体包括以下步骤:(I)用移 液枪移取小磨香油20 μ L，记录下质量，加入极性有机溶剂350 μ L和显色稳定剂10 μ L的混合液，涡流震荡30秒；(2)在步骤(I)的混合液中加入还原剂150 μ L，涡流震荡30秒，室温下静置3分钟；(3)在步骤(2)的溶液中加入显色试剂10 μ L后，以10000r/min以上的转速离心旋转10分钟；(4)取步骤(3)得到混合溶液的上清部分在510nm处测定吸光度值；(5)根据吸光度值从铁离子标准曲线图上得到对应的铁离子浓度，并换算成单位质量的铁离子浓度作为过氧化值。最后测定得到小磨香油的POV值为4.820mmol/Kg。用乙醇逐级稀释油样，得到所述方法的灵敏度为0.087mmol/L。实施例2:本实施例中，所述极性有机溶剂按体积百分比记，包括30%的乙醇；所述还原剂按重量百分比记，包括硫酸亚铁的质量浓度为20g/L ;所述显色试剂为磺基水杨酸溶液，质量浓度为528 g/L ;所述显色稳定剂为盐酸吡哆胺溶液，质量浓度为225 g/L。本实施例的采样油脂为玉米油，用移液枪移取玉米油20 μ L，其他实施方式与实施例I相同。最后测定得到玉米油的POV值为1.051mmol/Kg。用乙醇逐级稀释油样，得到所述方法的灵敏度为0.094mmol/L。实施例3:本实施例中，所述极性有机溶剂按体积百分比记，包括90%的乙醇；所述还原剂按重量百分比记，包括硫酸亚铁的质量浓度为lg/L ;所述显色试剂为磺基水杨酸溶液，质量浓度为528g/L ;所述显色稳定剂为盐酸吡哆胺溶液，质量浓度为225g/L。本实施例的采样油脂为菜籽油，用移液枪移取菜籽油20 μ L，其他实施方式与实施例I相同。最后测定得到菜籽油的POV值为1.119mmol/Kg。用乙醇逐级稀释油样，得到所述方法的灵敏度为0.121mmol/L。实施例4:本实施例中，所述极性有机溶剂按体积百分比记，包括70%的乙醇；所述还原剂按重量百分比记，包括硫酸亚铁的质量浓度为lg/L ;所述显色试剂为磺基水杨酸溶液，质量浓度为1000g/L ;所述显色稳定剂为盐酸吡哆胺溶液，质量浓度为225g/L。本实施例的采样油脂为大豆油，用移液枪移取大豆油20 μ L，其他实施方式与实施例I相同。最后测定得到大豆油的POV值为0.960mmol/Kg。用乙醇逐级稀释油样，得到所述方法的灵敏度为0.134mmol/L。实施例5:本实施例中，所述极性有机溶剂按体积百分比记，包括70%的乙醇；所述还原剂按重量百分比记，包括硫酸亚铁的质量浓度为20g/L ;所述显色试剂为磺基水杨酸溶液，质量浓度为300g/L ;所述显色稳定剂为盐酸吡哆胺溶液，质量浓度为225g/L。本实施例的采样油脂为花生油，用移液枪移取花生油20 μ L，其他实施方式与实施例I相同。
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最后测定得到花生油的POV值为1.910mmol/Kg。用乙醇逐级稀释油样，得到所述方法的灵敏度为0.1OOmmoI/Lο实施例6:本实施例中，所述极性有机溶剂按体积百分比记，包括70%的乙醇；所述还原剂按重量百分比记，包括硫酸亚铁的质量浓度为3.6g/L ;所述显色试剂为磺基水杨酸溶液，质量浓度为1000g/L ;所述显色稳定剂为盐酸吡哆胺溶液，质量浓度为200g/L。本实施例的采样油脂为谷物调和油，用移液枪移取谷物调和油20μ L，其他实施方式与实施例1相同。最后测定得到谷物调和油的POV值为0.920mmol/Kg。用乙醇逐级稀释油样，得到所述方法的灵敏度为0.115mmol/L。实施例7:本实施例中，所述极性有机溶剂按体积百分比记，包括70%的乙醇；所述还原剂按重量百分比记，包括硫酸亚铁的质量浓度为3.6g/L ;所述显色试剂为磺基水杨酸溶液，质量浓度为300g/L ;所述显色稳定剂为盐酸吡哆胺溶液，质量浓度为800g/L。本实施例的采样油脂为橄榄油，用移液枪移取橄榄油20 μ L，其他实施方式与实施例I相同。最后测定得到橄榄油的POV值为5.47mmol/Kg。用乙醇逐级稀释油样，得到所述方法的灵敏度为0.114mmol/L。实施例8:本实施例中，所述极性有机溶剂按体积百分比记，包括70%的乙醇；所述还原剂按重量百分比记，包括硫酸亚铁的质量浓度为lg/L ;所述显色试剂为磺基水杨酸溶液，质量浓度为528g/L ;所述显色稳定剂为盐酸吡哆胺溶液，质量浓度为800g/L。本实施例的采样油脂为豆豉鲮鱼罐头中残留油，用移液枪移取豆豉鲮鱼罐头中残留油20 μ L，其他实施方式与实施例1相同。最后测定得到豆豉鲮鱼罐头中残留油的POV值为2.960mmol/Kg。
用乙醇逐级稀释油样，得到所述方法的灵敏度为0.099mmol/Lo实施例9:本实施例中，所述极性有机溶剂按体积百分比记，包括70%的乙醇；所述还原剂按重量百分比记，包括硫酸亚铁的质量浓度为3.6g/L ;所述显色试剂为磺基水杨酸溶液，质量浓度为528g/L ;所述显色稳定剂为盐酸吡哆胺溶液，质量浓度为225g/L。本实施例的采样油脂为花生油、菜籽油、橄榄油、小磨香油、谷物调和油、大豆油、玉米油按等比例混合的混合油，用移液枪移取混合油20 μ L，其他实施方式与实施例1相同。最后测定得到混合油的POV值为7.730mmol/Kg。用乙醇逐级稀释油样，得到所述方法的灵敏度为0.087mmol/L。实施例10:本实施例中，所述极性有机溶剂按体积百分比记，包括70%的乙醇；所述还原剂按重量百分比记，包括硫酸亚铁的质量浓度为3.6g/L ;所述显色试剂为磺基水杨酸溶液，质量浓度为528g/L ;所述显色稳定剂为盐酸吡哆胺溶液，质量浓度为225g/L。本实施例的采样油脂为鱼油，用移液枪移取鱼油20 μ L，其他实施方式与实施例1相同。最后测定得到鱼油的POV值为8.920mmol/Kg。用乙醇逐级稀释油样，得到所述方法的灵敏度为0.087mmol/L。实施例11:本实施例中，所述极性有机溶剂按体积百分比记，包括70%的乙醇；所述还原剂按重量百分比记，包括硫酸亚铁的质量浓度为3.6g/L ;所述显色试剂为磺基水杨酸溶液，质量浓度为528g/L ;所述显色稳定剂为盐酸吡哆胺溶液，质量浓度为225g/L。
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本实施例的采样油脂为猪油，用移液枪移取猪油20 μ L，其他实施方式与实施例1相同。最后测定得到猪油的POV值为3.810mmol/Kg。用乙醇逐级稀释油样，得到所述方法的灵敏度为0.087mmol/L。以上的所述乃是本发明的具体实施例及所运用的技术原理，若依本发明的构想所作的改变，其所产生的功能作用仍未超出说明书所涵盖的精神时，仍应属本发明的保护范围。
权利要求
1.一种食用油脂过氧化值测定组合试剂，其特征在于包括:极性有机溶剂、还原剂、显色试剂、显色稳定剂； 所述极性有机溶剂按质量百分比记，包括乙醇的质量浓度为237 710g/L ； 所述还原剂按重量百分比记，包括硫酸亚铁的质量浓度为I 20g/L ； 所述显色试剂为磺基水杨酸溶液，质量浓度为300 1000 g/L ； 所述显色稳定剂为盐酸吡哆胺溶液，质量浓度为20 800 g/L。
2.一种食用油脂过氧化值测定方法，其特征在于包括以下步骤: (1)用移液枪移取液态待测样品，所述的待测样品的取样体积为20 40μL，同时记录下质量，加入极性有机溶剂和显色稳定剂的混合液，所述待测样品与极性有机溶剂的体积比为1:15 1:25，极性有机溶剂与显色稳定剂的体积比为1:30 1:40，涡流震荡； (2)在步骤(I)的混合液中加入还原剂，每克待测样品滴加的还原剂体积为5 12mL， 涡流震荡，室温下静置； (3)在步骤(2)的溶液中加入显色剂，每克待测样品滴加的显色剂体积为0.1 2mL，溶液以10000r/min以上的转速离心旋转10分钟； (4)取步骤(3)得到混合溶液的上清部分在500 550nm处测定吸光度值； (5)根据吸光度 值从铁离子标准曲线图上得到对应的铁离子浓度，并换算成单位质量的铁离子浓度作为过氧化值。
3.根据权利要求2所述的一种食用油脂过氧化值测定方法，其特征在于，所述待测样品为液态。
4.根据权利要求2所述的一种食用油脂过氧化值测定方法，其特征在于，所述铁离子标准曲线图的制作包括以下步骤: (a)将还原铁粉加入盐酸和过氧化氢溶解后，加热除去过氧化氢，冷却后用水稀释混匀，制得10mg/mL的铁标准储备液； (b)利用步骤(a)制得的溶液以蒸馏水稀释的方法得到铁离子浓度为0、0.2,0.5、1、1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0 mg/mL的一系列梯度溶液，分别加入所述极性溶剂和显色稳定剂后震荡30秒； (c)在步骤(b)得到的各溶液中加入还原剂后震荡30秒反应3分钟，再加入显色剂； (d)将步骤(c)得到的各溶液以lOOOOr/min以上的转速离心10分钟，以铁离子浓度为O的反应管为参照在500 550nm处测定吸光度值； (e)分别以吸光度值、铁离子浓度为横、纵坐标绘制曲线，并用最小二乘法得到拟合的直线方程。
全文摘要
本发明涉及过氧化值的测定，尤其涉及一种食用油脂过氧化值测定组合试剂及检测方法，包括极性有机溶剂、还原剂、显色试剂、显色稳定剂；所述极性有机溶剂按质量百分比记，包括乙醇的质量浓度为237～710g/L；所述还原剂按重量百分比记，包括硫酸亚铁的质量浓度为1～20g/L；所述显色试剂为磺基水杨酸溶液，质量浓度为300～1000g/L；所述显色稳定剂为盐酸吡哆胺溶液，质量浓度为20～800g/L。本发明采用比色分析的方法，操作迅速简便，减少了加热对检测结果的干扰；所用检测试剂种类较少，便于装配携带；可同时对多个油脂样本进行显色和检测，显色均匀；所用检测试剂均低毒甚至无毒，安全环保。
文档编号G01N21/78GK103245660SQ20131016621
公开日2013年8月14日 申请日期2013年5月7日 优先权日2013年5月7日
发明者章宇, 陈景楠, 蔡丹倩 申请人:浙江大学