专利名称：果糖缬氨酸的制备方法
技术领域：
本发明涉及果糖缬氨酸氧化酶底物，即由葡萄糖和氨基酸反应形成的Amadori产物-果糖缬氨酸的制备方法。
背景技术：
血液中的糖化血红蛋白反应了一段时期内生物体内的血糖水平，近年来被用作糖尿病诊断和治疗的重要指标。目前市场上主要采用酶法用于检测人体内糖化血红蛋白的含量，利用该法测定糖化血红蛋白需用到一类特殊的酶类——果糖缬氨酸氧化酶，该酶作用于糖化多肽或糖化氨基酸，其作用产物经过一系列氧化还原反应，最后通过终产物的显色来确定糖化血红蛋白的含量。因此果糖缬氨酸氧化酶为糖化血红蛋白测定中的关键酶。目前研究表明，人血液中糖化血红蛋白糖基化的位点为缬氨酸-NH2残基，因此制备人血液糖化血红蛋白的模拟底物，即果糖缬氨酸[N_( 1-脱氧-D-果糖-1-yl)-缬氨酸]，对筛选高活性、高稳定性及高特异性的果糖缬氨酸氧化酶及研究其酶学性质格外重要。该
底物的实质即是氨基酸与还原糖通过美拉德(Maillard)反应生成的中间产物-Amadori
化合物。其反应原理是还原糖的羰基与氨基酸的氨基之间进行加成，加成物迅速失去I分子水转变为希夫(Schiff)碱,再经环化形成相应的N-取代的醒,最后通过Amadori重排形成较稳定的1-氨基-1-脱氧-2-酮糖。具体的反应过程如下:
权利要求
1.一种果糖缬氨酸的制备方法，其特征在于:包括以下制备步骤: (1)以1 10重量份的L-缬氨酸、1(Γ50重量份的D-葡萄糖为原料，80 800重量份浓度为0.0f3mol/L、pH3飞的吡啶乙酸盐溶液或吡啶甲酸盐溶液为溶剂，控制反应温度为1(T5(TC搅拌反应I飞天； (2)反应完毕后，过滤，所得的反应溶液控制真空度为-0.01'0.09MPa、温度为3(T50°C进行减压蒸干，得到干物质； (3)将步骤(2)所得的干物质以1:0.5~10的比例溶解于甲醇或乙醚中，在(T10°C低温放置，析出淡黄色物质，过滤，经冷冻干燥后得白色固体物质，即为果糖缬氨酸。
2.根据权利要求1所述的果糖缬氨酸的制备方法，其特征在于:所述的吡啶乙酸盐为4-吡啶乙酸盐、2-吡啶乙酸盐或3-吡啶乙酸盐。
3.根据权利要求2所述的果糖缬氨酸的制备方法，其特征在于:所述的吡啶乙酸盐为4-吡啶乙酸盐酸盐。
4.根据权利要求1所述的果糖缬氨酸的制备方法，其特征在于:所述的吡啶甲酸盐为4-吡啶甲酸盐、2-吡啶甲酸盐或3-吡啶甲酸盐。
5.根据权利要求4所述的果糖缬氨酸的制备方法，其特征在于:所述的吡啶甲酸盐为2-吡啶甲酸盐酸盐。
6.根据权利要求1所述的果糖缬氨酸的制备方法，其特征在于:所述的干物质以1: 0.5 10的比例溶解于甲醇或乙醚中，其比例为重量/体积比。
全文摘要
本发明公开一种果糖缬氨酸的制备方法，步骤包括以1~10份的L-缬氨酸、10~50份的D-葡萄糖为原料，80~800份0.01~3mol/LpH3~6吡啶乙酸盐溶液或吡啶甲酸盐溶液为溶剂，温度10~50℃搅拌反应1~5天；反应完毕后，过滤，所得的溶液减压蒸干得到干物质；将所得的干物质溶解于甲醇或乙醚中，在0~10℃低温放置，析出淡黄色物质，过滤，经冷冻干燥后得白色固体物质，即为果糖缬氨酸。本发明具有制备步骤简单、得率高，且得到的底物纯度高的优点。
文档编号G01N21/31GK103113427SQ20131004781
公开日2013年5月22日 申请日期2013年2月6日 优先权日2013年2月6日
发明者邹炳德, 邹继华, 陆慧贤, 周海滨 申请人:宁波美康生物科技股份有限公司