专利名称：一种检测重组人白细胞介素-12蛋白活性的方法
技术领域：
本发明涉及一种检测重组人白细胞介素-12蛋白活性的方法。
背景技术：
人白细胞介素-12 (Human Interleukin 12，hIL-12)是一种异二聚体细胞因子，由 P35和p40两个亚单位通过多对二硫键连接组成。hIL-12又称为NK细胞刺激因子(NKSF)， hIL-12具有强烈的抗肿瘤和抗病毒效益，这种效应是由机体的自然杀伤细胞(Natural killer cells, NK细胞)介导的，hIL-12还在细胞毒性T细胞、辅助性T细胞、B细胞的发 育分化和成熟活化中起重要作用，被誉为免疫系统行使抗病毒、抗肿瘤的核心调控因子，机 体天然免疫系统的关键蛋白质。这一系列的生物学功能使人们认识到hIL-12有可能在临 床应用中发挥重要作用。目前，重组人白细胞介素-12 (Recombinant Human Interleukin 12,rhIL-12)作为一种药物已经进入抗肿瘤、抗病毒性疾病和过敏性哮喘的临床试验阶段。 rhIL-12的活性直接关系到临床上治疗效果评价及用药剂量等关键问题。目前，用于活性测 定的NK细胞、T细胞主要来源于正常人外周血或新生儿脐血，由于个体差异，实验稳定性、 重复性、灵敏度均难以保证。

发明内容
本发明的一个目的是提供一种检测重组人白细胞介素-12蛋白的活性的方法。本发明所提供的检测重组人白细胞介素-12蛋白的活性的方法，包括如下步骤1)用不同浓度的重组人白细胞介素-12蛋白标准品刺激人自然杀伤细胞NKG细胞 CGMCC No. 2901产生、干扰素，检测每种浓度的重组人白细胞介素-12蛋白标准品刺激人 自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No. 2901产生的、干扰素的量，以产生的、干扰素的量为 纵坐标，以重组人白细胞介素-12蛋白标准品的浓度为横坐标，作曲线图，得到S型标准曲 线图，从所述S型标准曲线图中得到所述Y干扰素的量为其最大值的一半时所对应的重组 人白细胞介素-12蛋白标准品的浓度值，将该浓度值记作ED5(Is ；2)用不同浓度的待测重组人白细胞介素-12蛋白刺激人自然杀伤细胞NKG细胞 CGMCC No. 2901产生、干扰素，检测每种浓度的待测重组人白细胞介素-12蛋白刺激人自 然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No. 2901产生的、干扰素的量，以产生的、干扰素的量为纵 坐标，以待测重组人白细胞介素-12蛋白的浓度为横坐标，作曲线图，得到S型曲线图，从所 述S型曲线图中得到所述Y干扰素的量为其最大值的一半时所对应的待测重组人白细胞 介素-12蛋白的浓度值，将该浓度值记作ED5to ；3)根据公式I，计算得到所述待测重组人白细胞介素-12蛋白的活性，<formula>formula see original document page 4</formula> ( 公式 I)其中，Ps为重组人白细胞介素-12蛋白标准品的活性值，Pr为待测重组人白细胞 介素-12蛋白的活性值；
所述步骤1)中所用的人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No. 2901与所述步骤2)中 所用的人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No. 2901的状态相同，所述步骤1)的刺激NKG细胞 产生Y干扰素的方法与所述步骤2)中的刺激NKG细胞产生Y干扰素的方法相同，所述步 骤1)的检测每种浓度的重组人白细胞介素-12蛋白标准品刺激NKG细胞产生的Y干扰素 的量的方法与所述步骤2)中的检测每种浓度的待测重组人白细胞介素-12蛋白刺激NKG 细胞产生的Y干扰素的量的方法相同；所述步骤1)和所述步骤2)没有先后顺序。上述过程中，所述步骤1)中，所述用不同浓度的重组人白细胞介素-12蛋白标准 品刺激人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No. 2901产生、干扰素的方法包括如下步骤将 所述不同浓度的重组人白细胞介素-12蛋白标准品与所述人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No. 2901共培养，得到所述Y干扰素；所述步骤2)中，所述用不同浓度的待测重组人白细胞介素-12蛋白刺激人自然杀 伤细胞NKG细胞CGMCC No. 2901产生、干扰素的方法包括如下步骤将所述不同浓度的待 测重组人白细胞介素-12蛋白与所述人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No. 2901共培养，得 到所述、干扰素。上述过程中，所述步骤1)的共培养中，所述共培养的体系由所述重组人白细胞介 素-12蛋白标准品、所述人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No. 2901和培养基组成；所述步骤2)的共培养中，所述共培养的体系由所述待测重组人白细胞介素-12蛋 白、所述人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No. 2901和培养基组成；上述过程中，在所述步骤1)和所述步骤2)前，包括如下细胞活化步骤将人自然 杀伤细胞NKG细胞CGMCC No. 2901接种于细胞培养基I中，在温度为37°C、二氧化碳体积浓 度为5%的条件下培养至对数生长期，取对数生长期的细胞；所述细胞培养基I由a-MEM培养基、胎牛血清、马血清和重组人白细胞介素-2组 成，a -MEM培养基、胎牛血清、马血清和重组人白介素-2的配比为8ml a -MEM培养基1ml 胎牛血清1ml马血清1000IU重组人白介素_2。上述过程中，所述共培养中培养基由1640培养基和胎牛血清组成，1640培养基与 胎牛血清的体积比为9 1 ；所述人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No. 2901在所述共培养体系中的浓度为 2. 5X105 个/ml ；所述共培养的温度为37°C，所述共培养的二氧化碳体积浓度为5%，所述共培养 的时间为12-48小时，具体为18-24小时。上述过程中，所述步骤1)中重组人白细胞介素-12蛋白标准品在所述共培养体系 中的浓度分别为 6. 4ng/ml、3. 2ng/ml、l. 6ng/ml、0. 8ng/ml、0. 4ng/ml、0. 2ng/ml、0. lng/ml、 0.05ng/ml ；所述步骤2)中待测重组人白细胞介素-12蛋白在所述共培养体系中的浓度分别 为 6. 4ng/ml、3. 2ng/ml、L 6ng/ml、0. 8ng/ml、0. 4ng/ml、0. 2ng/ml、0. Ing/mKO. 05ng/mlo上述过程中，所述检测Y干扰素的量的方法为酶联免疫法，其中所用的一抗为、 干扰素单克隆抗体。上述过程中，所述重组人白细胞介素-12蛋白的活性为重组人白细胞介素-12蛋白刺激淋巴细胞细胞产生、干扰素的活性；所述淋巴细胞细胞为自然杀伤细胞、T细胞或 B细胞。人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No. 2901在检测重组人白细胞介素-12蛋白刺激 自然杀伤细胞产生Y干扰素的活性中的应用也属于本发明的保护范围。本发明采用人自然杀伤细胞(NKG细胞)CGMCC No. 2901作为测活细胞株，该细胞 株具有性能稳定均一、易培养、传代次数不受限制的特点，并且在IL-12蛋白的刺激下可产 生、干扰素，存在时间-剂量-效应关系，是测rhIL-12蛋白活性得理想载体细胞。实验 证明，本发明方法结果准确可靠且重复性好(检测了 3份样品，每个样品进行3次实验，均 得到正确结果)，避免了现有技术中来源于正常人外周血或新生儿脐血的NK细胞、T细胞不 稳定、有时检测不出结果的弊端。另外，本发明方法操作简便、快速、稳定且成本低廉、具有 很高的稳定性、重复性、灵敏度及特异性。因此，本发明方法在rhIL-12蛋白活性检测领域 将有广阔的应用前景，为rhIL-12蛋白的临床应用、药性检测等提供了良好的基础。


图1. ELISA方法检测、干扰素含量标准曲线。图2.不同浓度rhIL-12蛋白标准品NKG细胞共孵育24小时后产生、干扰素的量。图3.不同浓度rhIL-12蛋白待测样品与NKG细胞共孵育24小时后产生、干扰
素的量。
具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。NKG细胞的制备1.外周血标本取患有非何杰金氏淋巴瘤的病人的外周血10ml，肝素抗凝，经患
者同意。2.外周血单个核细胞的分离用10ml无菌PBS溶液稀释抗凝外周血标本后，用淋 巴细胞分离液进行密度梯度离心，2200转/分，30分钟，20度；吸取中界层面的单个核细 胞，使用PBS溶液洗涤3遍，1500转/分，10分钟，20度；使用250 u 1无菌PBS溶液重悬细 胞，计数，细胞浓度为1. 1 X 107250 ul,4度放置，备用。3. NK细胞的分离纯化向上述细胞溶液中加入20 u 1非特异的鼠IgG，4度，30分 钟，以封闭非特异性结合。向细胞溶液中加入100 ill CD56 MicroBeads，振荡混勻，4度，30 分钟，每10分钟混勻一次。使用MACS分选器分选细胞，收集⑶56阳性的NK细胞。使用 PBS溶液洗涤2遍，1500转/分，10分钟，20度；使用完全a -MEM液体培养基重悬细胞，调 整浓度为1. OX 105/ml，37度，5% C02培养；上述细胞经流式细胞仪检测，⑶56阳性细胞占 95%以上。4.克隆化生长细胞扩大培养将上述纯化的NK细胞经有限稀释至每毫升含5个 细胞，加至96孔板中，100 u 1/孔，相当于每孔含0. 5个细胞，培养液为完全a -MEM液体培 养基，37度，5% C02培养；及时补加IL-2溶液，使其浓度维持在100U/ml左右。观察克隆形成情况，培养10天后部分孔出现细胞克隆，选择单个克隆孔，待细胞长至足够数量时，挑取 呈克隆化生长的细胞，转入24孔板中进行扩大培养，细胞增殖后转入培养瓶中培养，获得 性状稳定的细胞群体，其中1株细胞连续传代培养184天，冻存细胞复苏后传代培养69天， 细胞生长情况、细胞状态等均良好，将此株细胞命名为NKG细胞。该NKG细胞(人自然杀伤细胞)已于2009年2月9日保藏于中国微生物菌种保 藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生 物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No. 2901。重组人白细胞介素-12 (rhIL-12)国际标准品购自NIBSC(The National Institutefor Biological Standards and Control)。重组人白细胞介素 _2 购自长春生 物制品研究所。胎牛血清购自上海依科赛生物制品有限公司，马血清购自上海依科赛生物 制品有限公司。1640培养基、a-MEM(液体)培养基购自Invitrogen公司。人、干扰素 ELISA检测试剂盒购自Bender公司，试剂盒中包括人、干扰素标准品、鼠抗人、干扰素单 克隆抗体、鼠抗人、干扰素单克隆抗体包被的板及其他检测中需要的试剂。1640完全培养基由1640培养基和胎牛血清组成，1640培养基与胎牛血清的体积 比为9 1。1640培养基的配制取1640干粉培养基1袋(10. 4克)，加入到装有950ml三 蒸水的烧杯内，磁力搅拌器搅拌使其完全溶解，加入2. 0克NaHC03，继续搅拌至溶解，用1M 的HC1调节PH值7. 2，使用三蒸水定容至lOOOmL，0. 22um无菌滤膜过滤除菌，得到1640培 养基，4°C保存。使用前加入10%体积的胎牛血清，即为1640完全培养基。微量移液器购自法国Gilson公司，78-1型磁力加热搅拌器购自江苏安普电 子工程有限公司。超净工作台购自上海智城分析仪器制造有限公司，C02培养箱购自 Thermo forme公司，酶标仪购自BI0-RAD公司。实施例1、检测重组人白细胞介素-12蛋白的活性一、细胞活化及准备将NKG细胞(人自然杀伤细胞)CGMCC No. 2901接种于细胞培养基I中，在37°C、 5% C02的条件下培养至对数生长期；期间可视细胞生长情况进行传代。所述细胞培养基I由a -MEM培养基、胎牛血清、马血清和重组人白细胞介素_2组 成，a -MEM培养基、胎牛血清、马血清和重组人白介素-2的配比为8ml a -MEM培养基1ml 胎牛血清1ml马血清1000IU重组人白细胞介素_2。取处于对数生长期的NKG细胞于50ml无菌离心管中，800rpm，lOmin，离心，弃上 清，PBS溶液洗涤两遍后，悬于1640完全培养基(含10%胎牛血清的1640培养基)中，调 整细胞浓度为5X 105个/ml，按100 u 1/孔加入96孔板各孔中，共36孔。二、标准品和待检样品的准备本实施例所用的待测样品为重组人白细胞介素12冻干剂(中国科学技术大学免 疫学研究所生产，活性为6. lX106(IU/mg))。1、标准品的准备将rhIL-12国际标准品溶于1. 0ml注射用水中，然后使用1640完全培养基稀释成 以下 8 个稀释度(ng/ml) :12. 8、6. 4、3. 2、1. 6、0. 8、0. 4、0. 2、0. 1，备用；2、待检样品的准备将待检样品溶于1. 0ml注射用水中，然后使用1640完全培养基稀释成以下8个稀释度(ng/ml) 12. 8、6. 4、3. 2、1. 6、0. 8、0. 4、0. 2、0. 1，备用。三、共培养(、干扰素的诱生)标准品实验组和待检品实验组均在同一 96孔板上进行试验。1、标准品实验组向步骤一中加有细胞的96孔板对应孔中分别加入100 ill不同 稀释度的IL-12标准品，每个稀释度做双复孔，同时设立培养基对照2孔。37°C，5% C02培 养24小时；共培养体系由IL-12标准品、NKG细胞和1640完全培养基组成，IL-12标准品在共 培养体系中的浓度分别为 6. 4ng/ml、3. 2ng/ml、l. 6ng/ml、0. 8ng/ml、0. 4ng/ml、0. 2ng/ml、 0. lng/ml、0. 05ng/ml，人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No. 2901在共培养体系中的浓度为 2. 5X105 个/ml。2、待检品实验组向步骤一中加有细胞的96孔板对应孔中分别加入100 ill不同 稀释度的IL-12待检品，每个稀释度做双复孔，同时设立培养基对照2孔。37°C，5% C02培 养24小时；共培养体系由IL-12待检品、NKG细胞和1640完全培养基组成，IL-12待检品在共 培养体系中的浓度分别为 6. 4ng/ml、3. 2ng/ml、l. 6ng/ml、0. 8ng/ml、0. 4ng/ml、0. 2ng/ml、 0. lng/ml、0. 05ng/ml，人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No. 2901在共培养体系中的浓度为 2. 5X105 个/ml。实验证明，标准品与细胞混合后，培养时间从18小时-24小时，结果均一致，待测 品也如此。四、Y干扰素含量检测取培养后的NKG细胞上清50 u 1，酶联免疫法(ELISA方法)测定、干扰素含量。1、稀释人、干扰素标准品用样品稀释液将、干扰素标准品先1 10，再 1 100 稀释为 200pg/ml，倍比稀释为(pg/ml)200、100、50、25、12. 5、6. 25、3. 125、0，共 8 个梯度。2、用洗涤液洗涤鼠抗人Y干扰素单克隆抗体包被的板条2次，拍干。3、分别取待检样品组细胞上清50 u 1、标准品组细胞上清50 u 1加入酶标板中(待 检样品和标准品均做复孔)，再加入50 yl样品稀释液和50 yl生物素标记的鼠抗人、干 扰素单克隆抗体工作液，混勻，室温(22°C 士4°C )放置2小时。用洗涤液洗板3次，拍干； 每孔加入亲和素标记的辣根过氧化物酶工作液lOOyl，室温(22°C 士 4°C )放置1小时。用 洗涤液洗板3次，拍干后，每孔加TMB底物工作液100 iU，室温(22°C 士4°C )静置10-20分 钟，每孔再加终止液100 Pi。450nm波长下测定A值。五、作S型曲线图1、标准品作图采用Origin软件，用标准品的浓度和对应的A值作图，结果如图1所示。以产生的、干扰素的量为纵坐标，以人白细胞介素-12蛋白标准品的浓度为横坐 标，作图，结果如图2所示。2、待检品作图根据图1，输入待检样品A值直接求出待检样品、干扰素含量。以产生的、干扰 素的量为纵坐标，以人白细胞介素-12蛋白待检品的浓度为横坐标，作图，结果如图3所示。
六、待测样品活性计算以Y干扰素含量对样品稀释度作图，计算各个实验样品的ED50(即、干扰素含
量为最大浓度的一半时的样品浓度)，并按下式计算结果<formula>formula see original document page 9</formula>
Ps 标准品效价，iu/mg ；ed50s 标准品 ed50 ；ED5Qr 待测样品 ED50。待测样品效价=1.0x107 (iu/mg) x0. 58645 (ng/ml)/0. 94505 (ng/ml)= 6. 2x106(iu/mg)结果检测得到的效价正确。试验设3次重复，第一次实验的结果为6. 2x106(iu/ mg)，第二次实验的结果为5.95\106(贝/1^)，第三次实验的结果为6.3\106(贝/1^)。表 明，本发明方法结果可靠。
权利要求
一种检测重组人白细胞介素-12蛋白的活性的方法，包括如下步骤1)用不同浓度的重组人白细胞介素-12蛋白标准品刺激人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No.2901产生γ干扰素，检测每种浓度的重组人白细胞介素-12蛋白标准品刺激人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No.2901产生的γ干扰素的量，以产生的γ干扰素的量为纵坐标，以重组人白细胞介素-12蛋白标准品的浓度为横坐标，作曲线图，得到S型标准曲线图，从所述S型标准曲线图中得到所述γ干扰素的量为其最大值的一半时所对应的重组人白细胞介素-12蛋白标准品的浓度值，将该浓度值记作ED50s；2)用不同浓度的待测重组人白细胞介素-12蛋白刺激人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No.2901产生γ干扰素，检测每种浓度的待测重组人白细胞介素-12蛋白刺激人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No.2901产生的γ干扰素的量，以产生的γ干扰素的量为纵坐标，以待测重组人白细胞介素-12蛋白的浓度为横坐标，作曲线图，得到S型曲线图，从所述S型曲线图中得到所述γ干扰素的量为其最大值的一半时所对应的待测重组人白细胞介素-12蛋白的浓度值，将该浓度值记作ED50r；3)根据公式I，计算得到所述待测重组人白细胞介素-12蛋白的活性， <mrow><mi>Pr</mi><mo>=</mo><mi>Ps</mi><mo>&times;</mo><mfrac> <msub><mi>ED</mi><mrow> <mn>50</mn> <mi>s</mi></mrow> </msub> <msub><mi>ED</mi><mrow> <mn>50</mn> <mi>r</mi></mrow> </msub></mfrac> </mrow>(公式I)其中，Ps为重组人白细胞介素-12蛋白标准品的活性值，Pr为待测重组人白细胞介素-12蛋白的活性值；所述步骤1)中所用的人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No.2901与所述步骤2)中所用的人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No.2901的状态相同，所述步骤1)的刺激NKG细胞产生γ干扰素的方法与所述步骤2)中的刺激NKG细胞产生γ干扰素的方法相同，所述步骤1)的检测每种浓度的重组人白细胞介素-12蛋白标准品刺激NKG细胞产生的γ干扰素的量的方法与所述步骤2)中的检测每种浓度的待测重组人白细胞介素-12蛋白刺激NKG细胞产生的γ干扰素的量的方法相同；所述步骤1)和所述步骤2)没有先后顺序。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤1)中，所述用不同浓度的重组人白细胞介素-12蛋白标准品刺激人自然杀伤 细胞NKG细胞CGMCC No. 2901产生、干扰素的方法包括如下步骤将所述不同浓度的重组 人白细胞介素-12蛋白标准品分别与所述人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCCNo. 2901共培养， 得到所述Y干扰素；所述步骤2)中，所述用不同浓度的待测重组人白细胞介素-12蛋白刺激人自然杀伤细 胞NKG细胞CGMCC No. 2901产生、干扰素的方法包括如下步骤将所述不同浓度的待测重 组人白细胞介素-12蛋白分别与所述人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCCNo. 2901共培养，得到 所述Y干扰素。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述步骤1)的共培养中，所述共培 养的体系由所述重组人白细胞介素-12蛋白标准品、所述人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No. 2901和培养基组成；所述步骤2)的共培养中，所述共培养的体系由所述待测重组人白细胞介素-12蛋白、 所述人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No. 2901和培养基组成。
4.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于所述方法中，在所述步骤1)和所 述步骤2)前，包括如下细胞活化步骤将人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCCNo. 2901接种于细 胞培养基I中，在温度为37°C、二氧化碳体积浓度为5%的条件下培养至对数生长期，取对 数生长期的细胞；所述细胞培养基I由a "MEM培养基、胎牛血清、马血清和重组人白细胞介素_2组成， a-MEM培养基、胎牛血清、马血清和重组人白细胞介素-2的配比为8ml a-MEM培养基 lml胎牛血清1ml马血清1000IU重组人白细胞介素_2。
5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于所述共培养中培养基由1640培 养基和胎牛血清组成，1640培养基与胎牛血清的体积比为9 1 ；所述人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No. 2901在所述共培养体系中的浓度为2. 5X105 个/ml ；所述共培养的温度为37°C，所述共培养的二氧化碳体积浓度为5%，所述共培养的时 间为12-48小时，具体为18-24小时，再具体为24小时。
6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于所述步骤1)中重组人白细胞 介素-12蛋白标准品在所述共培养体系中的浓度分别为6. 4ng/ml、3. 2ng/ml、l. 6ng/ml、 0. 8ng/ml、0. 4ng/ml、0. 2ng/ml、0. lng/ml、0. 05ng/ml ；所述步骤2)中待测重组人白细胞介素-12蛋白在所述共培养体系中的浓度分别为 6. 4ng/ml、3. 2ng/ml、L 6ng/ml、0. 8ng/ml、0. 4ng/ml、0. 2ng/ml、0. Ing/mKO. 05ng/mlo
7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于所述检测Y干扰素的量的方法 为酶联免疫法，其中所用的一抗为Y干扰素单克隆抗体。
8.根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于所述重组人白细胞介素-12蛋 白的活性为重组人白细胞介素-12蛋白刺激淋巴细胞细胞产生Y干扰素的活性；所述淋巴 细胞细胞为自然杀伤细胞、T细胞或B细胞。
9.人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCCNo. 2901在检测重组人白细胞介素-12蛋白刺激自 然杀伤细胞产生Y干扰素的活性中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种检测重组人白细胞介素-12蛋白活性的方法。该方法包括如下步骤1)用不同浓度的重组人白细胞介素-12蛋白标准品刺激人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No.2901产生γ干扰素，检测每种浓度的重组人白细胞介素-12蛋白标准品刺激人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No.2901产生的γ干扰素的量，得到标准曲线；2)用于1)相同的方法用待测重组人白细胞介素-12蛋白进行试验，得到所述γ干扰素的量为其最大值的一半时所对应的待测重组人白细胞介素-12蛋白的浓度值；3)计算得到所述待测重组人白细胞介素-12蛋白的活性。本发明方法操作简便、快速、稳定且成本低廉、具有很高的稳定性、重复性、灵敏度及特异性。因此，本发明方法在rhIL-12蛋白活性检测领域将有广阔的应用前景，为rhIL-12蛋白的临床应用、药性检测等提供了良好的基础。
文档编号G01N33/577GK101799474SQ201010134960
公开日2010年8月11日 申请日期2010年3月26日 优先权日2010年3月26日
发明者孙汭, 田志刚, 程民, 郑晓东, 魏海明 申请人:中国科学技术大学