专利名称：一种诊断细菌性阴道病的方法
技术领域：
本发明涉及一种诊断细菌性阴道病的方法，属于医学临床诊断领域。
背景技术：
细菌性阴道病是妇产科最常见的疾病之一，由于临床表现较轻，常常不为人们所注意，有近半数患者可无症状且治疗后易于复发，但近年来国外学者发现本病是造成不孕症、宫外孕、妊娠失败、早产、盆腔炎和泌尿系感染的主要原因，BV诊断的传统方法是Amsel临床诊断标准，但在临床实践中上述诊断方法实际操作较为烦琐、费时且要借助大量的主观判断，影响了细菌性阴道病的准确诊断，检测十分有限。为此人们曾进行一些改进，公开号CN1401789，曾公开了一种通过检测阴道的加德纳菌来诊断细菌性阴道病诊断的方法；公开号CN1405562A，公开了一种通过测定唾液酸酶来诊断细菌性阴道病的方法。
上述专利所披露的分别局限于阴道的加德纳菌及产生唾液酸酶的阴道厌氧菌，均忽视了产H2O2乳酸杆菌在诊断细菌性阴道病的作用，随着对BV发病机制的不断深入了解，认为阴道中产H2O2乳杆菌的缺失是造成细菌性阴道病的主要原因之一，阴道分泌物中H2O2浓度过低，致使阴道内厌氧菌过度生长，导致细菌性阴道病的发生。由于细菌性阴道病为多种厌氧菌过度繁殖引起的复合感染，并不是单一细菌引起，通过上述专利检测会出现一些假阴性的结果(如过度生长的厌氧菌是不产生唾液酸酶的菌株或者是产酶量少的厌氧菌)。目前在诊断细菌性阴道病中往往忽视了乳杆菌代谢产物-H2O2浓度的变化，影响了细菌性阴道病的准确检测。本发明目的在于避免上述现有的技术的不足之处，提供一种诊断细菌性阴道病的方法，该方法是测定唾液酸酶活性同时测定阴道分泌物中H2O2浓度变化。

发明内容
本发明提供了一种诊断细菌性阴道病的方法，该方法包括测定唾液酸酶活性和测定阴道分泌物中H2O2浓度变化。
本发明的方法包括测定唾液酸酶活性和测定阴道分泌物中H2O2浓度变化，包括本发明的唾液酸酶活性测定方法根据文献报道(R.Wiggins，T.Crowley，P.J.Horner，et al.Use of 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-a-D-N-Acetylneuraminic Acid ina Novel Spot Test To Identify Sialidase Activity in Vaginal Swabs from Womenwith Bacterial Vaginosis Journal of Clinical Microbiology，2000，383096-3097.)，具体方法如下将患者的阴道分泌物样本放入装有具有乙酰神经氨酸类(5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-a-D-N-Acetylneuraminic Acid)底物及颜色反应活性的结合物的玻璃管中，于37℃保温10min，加入显色剂，由颜色判定结果。加入1mol/L的NaOH 1～2滴，呈变色，判定为阳性。反之唾液酸酶缺乏时，遇NaOH后呈不变色，判定为阴性。不变色表示结果为阴性，变色表示结果为阳性。
本发明的测定阴道分泌物中H2O2浓度的方法如下采用高效液相色谱法(HPLC)测量阴道分泌物中H2O2浓度1.仪器岛津LC-3A高效液相色谱仪，UVD-2紫外检测器。
2.化学品(1)标准样品H2O2。
(2)甲醇、乙醇和乙酸均为分析纯(3)水Millipore-Q超纯水3.色谱条件(1)色谱柱YWGC18，250mm×4.5mm，10μm(大连依利特公司)。
(2)流动相为甲醇∶水0-85∶15-100(3)流速0.8ml/min(4)波长254nm阴道分泌物中唾液酸酶活性阳性，同时阴道分泌物中H2O2浓度＜正常值，判定细菌性阴道病。阴道分泌物中唾液酸酶活性阴性，同时阴道分泌物中时H2O2浓度≥正常，判定非细菌性阴道病。阴道分泌物中唾液酸酶活性阴性，同时阴道分泌物中H2O2浓度＜正常，判定亚非细菌性阴道病。
具体实施例方式为了进一步详细描述本发明，如下提供诊断细菌性阴道病的方法的实施例。然而应当理解，本发明的范围不因这些实施例而受到限制。
1、检测步骤(1)用消毒拭子尽可能多的收集病人的阴道分泌物(采样前病人不得在24小时内使用阴道乳状药剂，不能收集宫颈外的阴道分泌物)。将样品平均分为两份，一份用作检测唾液酸酶活性，另一份用作检测H2O2浓度。
(2)将患者的阴道分泌物样本放入装有具有乙酰神经氨酸类(5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-a-D-N-Acetylneuraminic Acid)底物及颜色反应活性结合物的玻璃管中，置于37℃，温浴10分钟。
(3)取出显色瓶，加1～2滴显色剂至瓶有拭子的测试管中，轻摇均匀。
(4)加入显色剂三分钟之内，立即观察颜色反应。
(5)采用高效液相色谱法(HPLC)测量阴道分泌物中H2O2浓度。
2、结果判定当阴道分泌物样本放入装有具有乙酰神经氨酸类的底物及颜色反应活性结合物的玻璃管中，发生颜色改变，同时样本中H2O2浓度低于正常值，判定细菌性阴道病。当阴道分泌物样本放入装有具有乙酰神经氨酸类的底物及颜色反应活性结合物的玻璃管中，不发生颜色改变，同时H2O2浓度≥正常，判定非细菌性阴道病。当阴道分泌物样本放入装有具有乙酰神经氨酸类的底物及颜色反应活性结合物的玻璃管中，不发生颜色改变，H2O2浓度＜正常，判定亚BV，需进一步检查。
权利要求
1.一种根据阴道分泌物中唾液酸酶活性和H2O2浓度变化作为诊断细菌性阴道病的方法。
2.根据权利要求1的方法，其特征在于，阴道分泌物中唾液酸酶活性阳性，同时阴道分泌物中H2O2浓度＜正常值，判定细菌性阴道病。
3.根据权利要求1的方法，其特征在于，阴道分泌物中唾液酸酶活性阴性，同时阴道分泌物中时H2O2浓度≥正常，判定非细菌性阴道病。
4.根据权利要求1的方法，其特征在于，阴道分泌物中唾液酸酶活性阴性，同时阴道分泌物中H2O2浓度＜正常，判定亚细菌性阴道病。
全文摘要
本发明涉及一种诊断细菌性阴道病的方法。通过测定阴道分泌物中唾液酸酶活性和H
文档编号G01N21/78GK1825116SQ200510053328
公开日2006年8月30日 申请日期2005年2月27日 优先权日2005年2月27日
发明者楼永良 申请人:温州医学院