专利名称：一种偶氮甲酰胺(ada)的hplc检测方法
技术领域：
本发明属于食品添加剂的检测领域，是利用高效液相色谱快速、准确地检测面粉改良剂偶氮甲酰胺的方法。
背景技术：
偶氮甲酰胺(ADA)作为一种新型面团改良剂，可改善面团的物理操作性质及面制品组织结构，在国外已广泛应用。在面粉熟化处理方面，能够氧化小麦粉中的半胱氨酸，从而使面粉筋度增加，提高面团气体保留量，增加烘焙制品的弹性和韧性，改善面团的可操作性和调理性。由于偶氮甲酰胺属于碱性物质，如果在食品中超量使用，可能会对人体的肠胃和肝脏造成损害。ADA在高温下分解产生气体发泡，同时会生成有毒物质盐酸氨基脲(SEM)。GB2760-2007中规定了 ADA在小麦粉中的最大使用量为45mg/kg。
虽然我国已规定偶氮甲酰胺在面粉中的最大使用量，但目前还未见有关于面粉中ADA检测方法的报道，也无相关的检测标准。

发明内容
本发明目的在于提供一种操作简便、分析迅速的ADA的高效液相色谱(HPLC)检测方法。本发明的技术方案如下(I)面粉样品预处理将样品用有机溶剂进行ADA的浸泡萃取，离心，取上清液氮吹浓缩至近干，并用20mM乙酸铵水溶液定容,用O. 45 μ m膜过滤,从而完成样品的前处理；(2) HPIC 条件选用C18或ODS反相色谱柱，采用光电二极管阵列检测器检测检测收波长为246nm;流动相体积比V (CH3OH) V (20mM乙酸铵水溶液)=15 85等度洗脱；流速v =
O.8mT,/mi η ；(3) ADA高效液相色谱检测标准曲线的绘制准确称取ADAO. 05g，用N，N- 二甲基甲酰胺(DMF)定溶于50mL棕色容量瓶中，配制成1000mg/LADA储备液，用水分别稀释成浓度分别为2、5、10、20、30、40mg/L的标准系列溶液，按照方案⑵的条件进行测定，以ADA浓度为横坐标，特征峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线，用于分析样品中ADA的含量；(4)样品的测定根据方案(I)中样品预处理后，按方案(2)中检测条件进行检测，并利用方案(3)中得到的标准曲线计算样品中ADA含量。本发明的优点与有益效果是采用本发明的HPLC法检测面粉中ADA，并使用光电二极管阵列检测器，可以根据扫描光谱对目标物进行进一步定性，方便快捷，灵敏度高，检测限低，有利于ADA的快速检测，可用于大规模样品检测，适于标准化。


图I 为 ADA 标准品的 HPLC 图谱；Hypersil 0DS2 色谱柱(5 μ mX4. 6mmX 150mm)，光电二极管阵列紫外检测器，吸收波长为246nm，流动相体积比CH3OH 20mM乙酸铵水溶液为15 : 85等度洗脱，流速O. 8mL/min)图2为ADA的标准曲线，横坐标为ADA浓度，纵坐标为ADA色谱峰峰面积。
具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明并不仅仅局限于下述实施例。实施例I准确称取ADA 0.0500g，用DMF定溶于50mL棕色容量瓶中，配制成1000mg/L的ADA储备液，置于4°C冰箱中保存。取一定量的1000mg/mL的ADA标准储备液，用去离子水稀释成浓度分别为2、5、10、20、30、40mg/L的标准系列溶液，利用HPLC进行测定，检测波长为246nm，以峰面积(Y)对浓度X(mg/L)进行线性回归，绘制标准曲线(图2)，得标准曲线函数关系为Y = 113967Χ-24180，相关系数为R2 = 0. 9996，线性良好，可用于定量样品中ADA的含量。实施例2选取配料表中表明添加ADA的面粉样品，准确称取面粉lg(精确到0. OOOlg)于50mL离心管中，加入IOmL丙酮，润旋均勻，震荡旋转20min,离心,取上清液氮吹至近干,用2mL20mM乙酸铵水溶液定容。浓缩液过0. 45 μ m —次性微孔滤膜，滤液注入HPLC分析。对面粉做三个平行样品，结果见表I。对平行样I重复测定6次，分析结果见表2。通过分析知，平行样品的相对标准偏差(RSD)为2. 44，重复测定实验的相对标准偏差为
2.17%，重复性较好。表I面粉样品中ADA的含量
权利要求
1.一种偶氮甲酰胺的高效液相色谱检测方法，其特征在于包括如下步骤 (1)将样品用有机溶剂进行偶氮甲酰胺(ADA)的浸泡萃取，离心，取上清液氮吹浓缩至近干，并用20mM乙酸铵水溶液定容,用O. 45 μ m膜过滤，从而完成样品的前处理； (2)用高效液相色谱(HPLC)测定样品中ADA:选用反相色谱柱，甲醇和20mM乙酸铵水溶液作为流动相，采用光电二极管阵列检测器，设置检测波长为246nm，扫描范围为190_400nm ； (3)将步骤(I)所得的经过处理的样品按步骤(2)设定的参数进行HPLC检测。
2.根据权利要求I所述的ADA的HPLC检测方法，其特征在于所述步骤(I)中萃取用的有机溶剂为丙酮。
3.根据权利要求I所述的ADA的HPLC检测方法检测方法，其特征在于所述步骤(2)中所用反相色谱柱可为C18或ODS色谱柱。
4.根据权利要求I所述的ADA的HPLC检测方法，其特征在于所述步骤(2)中流动相的体积比为V(甲醇)V(20mM乙酸铵水溶液)=15 85。
全文摘要
本发明属于面粉改良剂偶氮甲酰胺(ADA)的检测领域。包括如下步骤用丙酮对面粉中的ADA进行浸泡萃取，离心，取上清液氮吹浓缩至近干，并用20mM乙酸铵水溶液定容，用0.45μm膜过滤；然后高效液相色谱仪检测样品中的ADA，选用C18或ODS反相色谱柱，光电二极管阵列检测器，检测波长为246nm，采用甲醇和20mM乙酸铵水溶液作为流动相对样品进行检测。本方法提供了一种检测速度快，灵敏度高，检测成本低的ADA测定方法。
文档编号G01N30/89GK102841172SQ20121036364
公开日2012年12月26日 申请日期2012年9月27日 优先权日2012年9月27日
发明者李培, 袁丽红, 丁洪流, 陈英, 张锦, 谢云飞, 姚卫蓉 申请人:苏州市产品质量监督检验所, 江南大学