专利名称：慢性肾病中的预测方法
技术领域：
本发明涉及一种预测病人存活性的方法。特别地，本发明涉及患有慢性肾病的病人的存活性的预测方法。通过参考纳入
在以下的说明中，本发明引用以下申请 -国际专利申请 PCT/AU01/00456 (W0 01/81928)； -国际专利申请 PCT/AU2005/000525 (W0 2005/099746)；和 -国际专利申请 PCT/AU2008/001498 (W0 2009/046495)。上述专利申请的全部内容在此通过引用纳入本说明书中。
背景技术：
巨噬细胞抑制因子-1 (MIC-I)是一种转化生长因子-β (TGF-β)超家族蛋白。MIC-I最初被克隆为巨噬细胞抑制因子-1，随后被识别为胎盘转化生长因子-β (PTGF-β )、胎盘骨形态发生蛋白(PLAB)、非甾体抗炎药激活基因1 (NAG-I)、前列腺衍生因子(PDF)和生长发育因子-15 (GDF-15) (Bootcov ct al, 1997; Hromas β t al，1997; Lawton β t al , 1997； Yokoyama-Kobayashi et al, 1997； Paralkar et al , 1998)。 类似于其它的TGF-β相关细胞因子，MIC-I被合成为无活性前体蛋白，进行二硫键连接的同源二聚过程(disulphide-linked homodimerisation)。随着N末端前肽的蛋白裂解，成熟的MIC-I被分泌为约24. 5kDa的二聚体蛋白(Bauskin et al.，2000)。MIC-I的氨基酸序列在以下文献中有公开W0 99/06445, WO 00/70051, WO 01/81928, WO 2005/113585, Bottner et al. (1999b)； Bootcov et al., 1997； Baek et al, 2001； Hromas et al. (1997), Paralkar et al, 1998； Morrish et al, 1996； and Yokoyama-Kobayashi et al, (1997)。图1展示了普通或“野生型”成熟MIC-I多肽的氨基酸序列。MIC-I 表达在若干组织中(Moore et al.，2000; Bottner et al, 1999a; Fairlie et al, 1999; Bauskin et al, 2006)。例如，人体组织的 Northern 杂交表明在肾脏、胰脏和前列腺中存在少量的MIC-I mRNA,而在胎盘中存在大量的MIC-I mRNA (Moore et al. , 2000; Fairlie et al, 1999)。此外，在正常、看起来健康的人体中，血清MIC-1 水平显示出随年龄的增长而上升。MIC-I超表达与癌症、特别是前列腺癌相关联(Welsh et al, 2003)，而MIC-I的高血清浓度则与(肿瘤)转移性疾病的存在相关联(Welsh et al, 2003; Brown et al, 2006)。血清MIC-I在慢性炎症性疾病中也有上升，并预示着与传统危险因素无关的动脉粥样硬化事件。血清MIC-I水平在慢性肾病中也有上升(CKD; Johen et al, 2007)。CKD (也称为“chronic renal disease”，慢性肾脏疾病)的特征是在数月或数年内，肾功能分五个阶段逐步丧失。CKD的最初特点是肾功能轻度减弱，有一些明显的症状，这些症状最终进展到最后阶段，这称为慢性肾功能衰竭(chronic kidney failure, CKF)、慢性肾脏功能衰竭(chronic renal fai Iure，CRf )或终末期肾病，其以重病为特点，且通常需要某些形式的“肾脏替代疗法”(例如透析或肾移植)。在美国有超过15，500，000成年人患有中度的肾功能严重受损，并有超过480，000人正在接受终末期肾病的积极治疗，且每年新增100,000以上开始治疗的新病人。在2005年接受治疗的病人中，有超过80，000病人死亡。CKD病人往往容易患加速动脉粥样硬化(一种影响动脉血管的慢性炎症性疾病)， 且比普通人群更有可能患上心血管疾病。无论是对于终末期肾病患者还是普通人群，上升的炎症标志物水平，如C-反应蛋白(CRP)水平，都被认为是急性心血管事件的危险因素 (Apple et al.，2004)。终末期肾病与厌食、体重减轻和恶病质相关联。对于常常同时存在营养不良和炎症病情的肾功能衰竭患者而言，人们认为这两种病情之间是有关联的。有些终末期肾病患者可以通过透析无限期地生存，但是，很多病人如果不进行肾移植就可能死亡。体重减轻、身体质量指数(BMI)降低和血清炎症标志物上升被认为是死亡率预测因子。但是，营养不良和炎症对疾病结果的贡献和它们之间的关联是不明确的。目前还没有任何可靠的前瞻性方法来确定哪些病人如果不进行肾移植就会死亡，因此难以确定对于哪些病人可以采取肾移植来拯救其生命。本申请的申请人研究了 MIC-I与CKD中营养状况改变之间的关系，发现MIC-I水平可以临床应用于预测CKD中的死亡率。本申请人还认识到MIC-I水平能够有利地提供一种用于选择采取肾移植的终末期肾病患者的手段。

发明内容
第一个方面，本发明提供了一种从全死因死亡率中预测慢性肾病(CKD)测试对象的死亡可能性的方法，该方法包括检测来自所述对象的测试体样本中MIC-I的上升量，其中，所述MIC-I的上升量与所述对象的死亡可能性的上升相关联。第二个方面，本发明提供了一种从全死因死亡率中预测CKD测试对象的死亡可能性的方法，该方法包括以下步骤
(i)检测来自所述对象的测试体样本中的MIC-I的量；以及
(ii)将步骤(i)中测得的MIC-I的量与MIC-I参考量进行比较，所述MIC-I参考量是与所述对象的死亡可能性上升相关联的升高的MIC-I的量；
这使得，当步骤(i)中测得的MIC-I的量大于或约等于所述参考量时，所述对象的死亡可能性上升；而当步骤(i)中测得的MIC-I的量小于所述参考量时，所述对象的死亡可能性下降。第三个方面，本发明提供了一种选择进行肾移植的终末期肾病测试对象的方法， 该方法包括检测来自所述对象的测试体样本中升高的MIC-I量，其中，所述升高的MIC-I量与不进行肾移植时所述对象的死亡可能性的上升相关联。所述第三个方面的方法优选包括以下步骤
(i )检测来自所述对象的测试体样本中的MIC-I的量；以及
(ii)将步骤(i)中测得的MIC-I的量与MIC-I参考量进行比较，所述MIC-I参考量与不进行肾移植时所述对象的死亡可能性上升相关联；
这使得，当步骤(i)中测得的MIC-I的量大于或约等于所述参考量时，所述对象在不进行肾移植时的死亡可能性上升；而当步骤(i)中测得的MIC-I的量小于所述参考量时，所述对象在不进行肾移植时的死亡可能性下降。第四个方面，本发明提供一种评估正接受透析的终末期肾病测试对象对透析的耐受性的方法，该方法包括检测来自所述对象的测试体样本中升高的MIC-I量，其中，所述升高的MIC-I量与(所述对象)对透析的耐受性差相关联。所述第四个方面的方法优选包括以下步骤
(i )检测来自所述对象的测试体样本中的MIC-I的量；以及
(ii)将步骤(i)中测得的MIC-I量与在透析开始前或透析开始后的较早时间点测得的、来自测试对象的比较体样本中存在的MIC-I的量或量值范围进行比较，或者将步骤(i) 中测得的MIC-I量与来自具有对透析的长期耐受性的终末期肾病对照对象的比较体样本中存在的MIC-I的量或量值范围进行比较；
这使得，当步骤(i)中测得的MIC-I的量与所述比较体样本中存在的MIC-I的量或量值范围相比更高时，所述对象可能对透析的耐受性差；而当步骤(i)中测得的MIC-I的量小于或约等于所述比较体样本中存在的MIC-I的量或量值范围时，所述对象可能能够忍受透析；或者
(iii)将步骤(i)中测得的MIC-I的量与MIC-I参考量进行比较，所述MIC-I参考量与对透析的长期耐受性相关联，
这使得，当步骤(i)中测得的MIC-I的量与所述MIC-I参考量相比更高时，所述对象可能对透析的耐受性差；而当步骤(i)中测得的MIC-I的量小于或约等于所述MIC-I参考量时，所述对象可能能够忍受透析。第五个方面，本发明提供一种防止CKD对象、特别是患有终末期肾病的CKD对象死亡、或降低其死亡风险的方法，包括处理所述对象的血液、血浆或血清，以除去或钝化所述血液、血浆或血清中存在的MIC-I。


图1中(A)为普通或“野生型”人成熟MIC-I多肽的氨基酸序列；(B)为D6成熟人 MIC-I变体的氨基酸序列；
图2是接受透析1. 2^13年的瑞典队列(n=98)中病人的Kaplan-Meier图，该图显示，血清MIC-I水平高于中间值7. 4 ng/ml(即7400 pg/ml ；图中，圆圈代表MIC-1水平低于7400 pg/ml，方框代表MIC-I水平高于7400 pg/ml)的病人与血清MIC-1水平低于这一水平的病人相比，前者的死亡率高得多(p=0. 0105)；以及
图3 (A)是进行了不超过三年透析的美国队列(n=140)中的病人在检查时的 Kaplan-Meier图，根据它们的中间值6. 3 ng/ml (即6300 pg/ml ；圆圈代表MIC-1水平低于6300 pg/ml，方框代表MIC-I水平高于6300 pg/ml)进行区分，大大区分了病人的死亡率 (p=0. 01 );图3 (B)中相同组病人根据血清MIC-I水平的最高的10%——14. 2ng/ml (即 14200pg/ml ；圆圈代表MIC-I水平低于14200pg/ml，方框代表MIC-I水平高于14200pg/ml) 来进行区分，图中显示，血清MIC-I水平最高的10% (>14200 pg/ml)的病人的死亡风险大大上升(P=O. 0038)；图3 (C)显示，不考虑透析时间的话，血清MIC-I水平最高的10%的病人(>14. 2 ng/ml,即 14200 pg/ml)的死亡率为 50% (p=0. 0040)。
具体实施例方式本申请人还发现，MIC-I是慢性肾病(CKD)中的死亡率预测因子。因此，第一个方面，本发明提供了一种从全死因死亡率中预测慢性肾病(CKD)测试对象的死亡可能性的方法，该方法包括检测来自所述对象的测试体样本中MIC-I的上升量，其中，所述MIC-I的上升量与所述对象的死亡可能性的上升相关联。在这里，术语“MIC-1”囊括了单体，多肽的同源二聚体和/或异源二聚体，以及变体，及其亚基和片段(例如MIC-I的降解产物或代谢产物)。该术语所囊括的MIC-I变体包括含有多肽的成熟人MIC-I蛋白，其中由于氨基酸取代、删除和/或增加，所述多肽的氨基酸序列与图IA所示的序列相比有广3个氨基酸不同，且该多肽优选为显示出与含有图IA所示的氨基酸序列的多肽基本相当的生物活性(可用“Hromas et al, 1997”所述分析方法进行测定和/或用“Kempf et al, 2007”所述方法进行测试);一个特别的例子是专利文献WO 01/81928 (该申请的全文在此予以援引)中述及的D6成熟人MIC-I变体，该变体包括图IB 所示的氨基酸序列。由上述术语“MIC-1”所囊括的MIC-I子单元和片段包括含有图IA或图 IB所示氨基酸序列的多肽的子单元和片段，且这些子单元和片段显示出与那些多肽基本相当的免疫活性和/或生物活性。优选地，在所述本发明第一方面的方法中检测的所述MIC-I为成熟人MIC-I蛋白、 D6成熟人MIC-I变体蛋白和/或它们的异源二聚体。在这里，术语“慢性肾病”及其缩略语“CKD”是指具有以下特征的情形在数月或数年内，肾功能逐步且永久性地丧失。患有CKD的对象经常具有其它病情，比如心血管病 (包括动脉硬化和缺血性心脏病)、高血压、营养不良、炎性疾病和糖尿病或者以上各项的结合。CKD被确认为经过表1所述的五个进展阶段。这些阶段可以部分地以测定“肾小球滤过率”(glomerular filtration rate，GFR)为特征，所述GFR可描述为通过肾脏的过滤流体的流速。表1慢性肾病的几个阶段
权利要求
1.一种从全死因死亡率中预测慢性肾病测试对象的死亡可能性的方法，该方法包括检测来自所述对象的测试体样本中MIC-I的上升量，其中，所述MIC-I的上升量与所述对象的死亡可能性的上升相关联。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过以下步骤、利用一系列的测量来检测所述测试体样本中MIC-I的上升量(i )测定所述测试体样本中存在的MIC-I的量；以及(ii)将所述MIC-I的量与在较早时间点取自相同对象的比较体样本中存在的MIC-I的量或量值范围进行比较；其中，步骤(i)中存在的MIC-I的量与所述比较体样本中存在的MIC-I的量或量值范围相比上升了。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，测试体样本中MIC-I的上升量通过与正常对象进行比较而检测出来(i)测定所述测试体样本中存在的MIC-I的量；且(ii)将所述MIC-I的量与取自正常对象的比较体样本中存在的MIC-I的量或量值范围进行比较；其中，步骤(i)中存在的MIC-I的量与所述比较体样本中存在的MIC-I的量或量值范围相比升高了。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，测试体样本中MIC-I的上升量通过与终末期肾病对象进行比较而检测出来(i)测定所述测试体样本中存在的MIC-I的量；以及(ii)将所述MIC-I的量与取自已被诊断为患有终末期肾病的至少一个其他对象的比较体样本中存在的MIC-I的量或量值范围进行比较；这使得，当步骤(i)中存在的MIC-I的量与所述比较体样本中存在的MIC-I的量或量值范围相比升高了时，测试对象与所述至少一个其它对象相比，死亡可能性上升了。
5.一种从全死因死亡率中预测终末期肾病测试对象的死亡可能性的方法，该方法包括以下步骤(i)检测来自所述对象的测试体样本中的MIC-I的量；以及(ii)将步骤(i)中测得的MIC-I的量与MIC-I参考量进行比较，所述MIC-I参考量是与所述对象的死亡可能性上升相关联的MIC-I的上升量；这使得，当步骤(i)中测得的MIC-I的量大于或约等于所述参考量时，所述对象的死亡可能性上升；而当步骤(i)中测得的MIC-I的量小于所述参考量时，所述对象的死亡可能性下降。
6.一种选择用于肾移植的终末期肾病测试对象的方法，该方法包括检测来自所述对象的测试体样本中MIC-I的上升量，其中，所述MIC-I的上升量与不进行肾移植时所述对象的死亡可能性的上升相关联。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤(i )检测来自所述对象的测试体样本中的MIC-I的量；以及(ii)将步骤(i)中测得的MIC-I的量与MIC-I参考量进行比较，所述MIC-I参考量与不进行肾移植时所述对象的死亡可能性上升相关联；这使得，当步骤(i )中测得的MIC-I的量大于或约等于所述参考量时，所述对象在不进行肾移植时的死亡可能性上升；而当步骤(i)中测得的MIC-I的量小于所述参考量时，所述对象在不进行肾移植时的死亡可能性下降。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，测试体样本中的MIC-I上升量通过一系列测量予以检测(i)测定所述测试体样本中存在的MIC-I的量；和(ii)将所述MIC-I的量与较早时间点时从相同对象处取得的比较体样本中存在的 MIC-I的量或量值范围进行比较；其中，步骤(i)中存在的MIC-I的量与所述比较体样本中存在的MIC-I的量或量值范围相比升高了。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，测试体样本中MIC-I的上升量通过与正常对象进行比较而检测出来(i)测定所述测试体样本中存在的MIC-I的量；且(ii)将所述MIC-I的量与取自正常对象的比较体样本中存在的MIC-I的量或量值范围进行比较；其中，步骤(i)中存在的MIC-I的量与所述比较体样本中存在的MIC-I的量或量值范围相比升高了。
10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，测试体样本中MIC-I的上升量通过与终末期肾病对象进行比较而检测出来(i)测定所述测试体样本中存在的MIC-I的量；以及(ii)将所述MIC-I的量与取自已被诊断为患有终末期肾病的至少一个其他对象的比较体样本中存在的MIC-I的量或量值范围进行比较；这使得，当步骤(i)中存在的MIC-I的量与所述比较体样本中存在的MIC-I的量或量值范围相比升高了时，测试对象与所述至少一个其它对象相比，死亡可能性上升了。
11.一种评估正接受透析的终末期肾病测试对象对透析的耐受性的方法，该方法包括检测来自所述对象的测试体样本中MIC-I的上升量，其中，所述MIC-I的上升量与对透析的耐受性差相关联。
12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤(i )测定来自所述对象的测试体样本中的MIC-I的量；以及(ii)将步骤(i)中测得的MIC-I量与在透析开始前或透析开始后的较早时间点取自测试对象的比较体样本中存在的MIC-I的量或量值范围进行比较，或者将步骤(i)中测得的MIC-I量与来自具有对透析的长期耐受性的终末期肾病对照对象的比较体样本中存在的MIC-I的量或量值范围进行比较；这使得，当步骤(i)中测得的MIC-I的量与所述比较体样本中存在的MIC-I的量或量值范围相比更高时，所述对象可能对透析的耐受性差；而当步骤(i)中测得的MIC-I的量小于或约等于所述比较体样本中存在的MIC-I的量或量值范围时，所述对象可能能够忍受透析；或者(iii)将步骤(i)中测得的MIC-I的量与MIC-I参考量进行比较，所述MIC-I参考量与对透析的长期耐受性相关联，这使得，当步骤(i)中测得的MIC-I的量与所述MIC-I参考量相比更高时，所述对象可能对透析的耐受性差；而当步骤(i)中测得的MIC-I的量小于或约等于所述MIC-I参考量时，所述对象可能能够忍受透析。
13.根据权利要求1至12任何一项所述的方法，其特征在于所述方法还包括检测选自以下各项的至少一种死亡率预测因子体重指数下降，体重指数的脂肪成分下降，主观全面营养评估分值下降，体重减轻增加，血清C-反应性蛋白水平上升，纤维蛋白原水平上升， 8-羟基脱氧鸟苷水平上升；其中，所述死亡率预测因子处于或超过预定的切断点。
14.根据前面任一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述测试体样本选自血液、 血浆、血清和尿液。
15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于所述MIC-I的上升量是或相当于约 6000pg/ml以上的血清MIC-I水平。
16.根据权利要求14所述的方法，其特征在于所述MIC-I的上升量是或相当于约 7000pg/ml以上的血清MIC-I水平。
17.根据权利要求14所述的方法，其特征在于所述MIC-I的上升量是或相当于约 14000pg/ml以上的血清MIC-I水平。
18.一种防止慢性肾病对象死亡、或降低其死亡风险的方法，包括处理所述对象的血液、血浆或血清，以除去或钝化所述血液、血浆或血清中存在的MIC-1。
19.根据权利要求18所述的方法，其特征在于所述对象患有终末期肾病。
20.根据权利要求18或19所述的方法，其特征在于所述对象接受过1个月至30年的肾替代治疗。
21.根据权利要求18或19所述的方法，其特征在于所述对象接受了约3年的肾替代治疗。
22.根据前面任一项权利要求所述的方法，其特征在于所述MIC-I为成熟人MIC-I蛋白、D6成熟人MIC-I变体蛋白和/或其异源二聚体。
全文摘要
本发明涉及病人存活性的预测方法，特别是患有慢性肾病(CKD)的病人以及选择进行肾脏移植的终末期肾病患者的存活性的预测方法。所述方法包括检测来自病人的测试体样本中的巨噬细胞抑制因子-1(MIC-1)的上升量。本发明还公开了一种防止或减少CKD病人的死亡风险的方法，该方法包括除去或钝化存在于病人的血液、血浆或血清中的MIC-1。
文档编号G01N33/68GK102203619SQ200980143661
公开日2011年9月28日 申请日期2009年10月29日 优先权日2008年10月31日
发明者塞缪尔·N·布赖特, 大卫·A·布朗 申请人:圣文森特医院悉尼有限公司