专利名称：用于诊断男性生育能力的方法和试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉 及用于诊断男性生育能力的方法和试剂盒。
背景技术：
近15%的夫妻在初次怀孕尝试时会遭遇失败。过去20年的有关数据显示，这些 临床病理中有大约30%单独出现在男性中，另有20%出现在夫妇双方均异常的人群中。 因此，在大约50%的不孕夫妇中男性要负至少一半责任。男性不育是一个影响大部分人的重要医学问题。大概半数的男性不育的原因甚 至在全面检查后通常也显示不出任何确定的具体原因。一般认为，与男性生育能力有关的主要因素中有三个因素对成功的授精是有害 的活动精子的数量或百分比、运动的速度及其方向。最常见的缺陷与精子的运动特 点，尤其是精子向前运动的能力有关，这种运动由精子的尾部(鞭毛)的有效摆动控制和 产生。这种运动或所谓的精子的前向运动力被大多数IVF实验室认为是男性生育能力最 具有预测性的指标。根据男性生育能力的世界卫生组织(WHO)标准，决定男性生育能力的主要因素 是精液量、精子细胞密度、活动性、向前前进和形态。“正常”的WHO指标是每毫升 一千万个活动精子。传统上，前向运动力(向前前进)由有经验的实验室技术员通过样本的(光学) 显微镜分析来确定和量化。样本经过观察并且精子细胞成分的几个方面经过量化，如活 动百分比、密度、形态异常百分比和前向运动力。有大量用来评估样本中精子的运动力 和数量的方法。如前所述，最普遍的方法就是显微镜分析法，此法一般在医院或商业性 实验室中进行。最近，研制出了许多用以简化精子检测的试验用试剂盒。W095/29188公开了一种基于人精子SP-10抗原抗体的试验。ΕΡ_Α_0387873公 开了一种使用固体珠(solidbead)的试剂盒，这种固体珠同人精子细胞顶体特有的抗体相 连。这种珠和样本混合在一起，进行培养、分离、清洗，并且检测与此珠相连的精子数 量，优选在显微镜的辅助下得以测量和检测。W097/40386公开了一种基于+kL，即基 于人附睾精子蛋白质的免疫检测的试剂盒。样本中的精子在Dulbecco磷酸盐缓冲盐水中 通过离心作用被清洗三遍。随后样本在95°C下加热变性，在14000g下产生离心作用，然 后用上清液来进行分析。近年来，用途单一并能完成精液基本分析的非处方产品成为可能。检测精液质 量的比色分析法在本领域也众所周知。例如，国际公布第W0/2001/060968号申请公开 了 Genosis Ltd(英国，泰晤士河畔金斯顿)生产的以商标“Fertell”出售的产品。Fertell 男性生育能力试验促使精子游上一个充满液体的腔，模仿精子设法到达卵的过程。用与 胶体金相结合的抗-CD59单克隆抗体检测精子的存在。与抗体相连的精子被捆在硝化纤 维素条上，同时未反应的缀合物则被冲离含有过量缓冲剂的条带。国际公布第W099/66331号申请公开了一种从样本中的非活动精子和/或活动性 减弱的精子中分离活动精子或检测活动精子的方法和试剂盒。本发明的方法包括把一个精子样本放在一个厚度为25-2500微米的多孔层上，并且允许样本中的任何活动精子通 过多孔层移动到检测带，在该检测带检测活动精子。第2005287571号美国公布文本公开了用于根据与精子相关的EP2D水平评估男 性生育能力的方法，并且还公布了用于评估男性生育能力的试剂盒。发明概述 本领域的诊断用试剂盒和方法的主要缺点之一就是他们无法用简单、快速和精 确的方法区分出样本中的活动和非活动精子。此外，许多已知的诊断用试剂盒所具有的 组件增加了消费者所能使用的试剂盒的成本和/或不能用于家庭使用的程序。现在，本发明的发明人已经成功地发明了一种用于检测是否存在具有所要求的 前向运动力的精子并能进行量化分析的方法和试剂盒。本发明的方法和试剂盒与现存的 或已知的用于诊断男性生育能力的方法和试剂盒相比，有下列优点(1)可以在医疗机构之外，在男性受试者的家里舒舒服服地使用本诊断方法，从 而克服了原先不得不去上述机构获取分析样本的尴尬；(2)本诊断方法的实施或分析(即样本中活动精子的存在与否)不需要医护人员 的参与；(3)诊断实施和结果的分析仅需要几分钟；(4)本方法的成功实施不需要大量的精子；(5)本诊断方法可以在受试者选择的任一时间实施；(6)本诊断可以在夫妻关系的前期实施以允许他们确定是否存在生育问题。(7)用来实施本发明方法所使用的试剂盒价格不高；(8)本试剂盒既可以用来确定男性的生育能力又可以用来确定有前向运动力的精 子与没有运动力的精子的百分比；(9)本试剂盒可以用来确定精子、精液中其它细胞(如白血球和未成熟的精子细 胞)和精液的PH值，从而提供精子数据、活动能力和生育能力；(10)本试剂盒可以用来确定精液中细胞的浓度；(11)本试剂盒也可以选择性地包括清洗精子的装置，以在准备用于宫内授精 (IUI)的精子之前清洗精子，从而使精子有更好的存活和受精机会；而且(12)本发明的方法和试剂盒不仅可以用来分析人类的精子，而且可以用来在远 离实验室的地方分析动物精子。因此，本发明的首要方面就是提供了一种诊断男性生育能力的方法，所述方法 包括(a)把精子的样本(如在诊断马上开始前或诊断前任一时段从受试者中获得的精 子)放置在剂的附近(如不直接接触)，在与含有精子的样本接触时，所述剂能够改变其 至少一种可测的性质；(b)给予所述样本中的精子充足的时间，以使其朝向所述剂运动并与其接触； 以及(c)确定所述样本中存在或不存在具有前向运动力的精子，其中，所述剂的至少一种可测的性质的改变表明存在具有前向运动力的精子。本方法在一些实施方案中还包括确定具有前向运动力的精子的数量，从而诊断男性生育能力。在本发明 的一些实施方案中，精子的样本被放置在物理的屏障上，该物理的屏 障把样本和剂分离开来，并允许精子移动通过所述物理的屏障。样本一般是精液，即取 自男性受试者的或通过医学手段获得的含有精子的精液，或如果要评估非人类雄性的生 育能力，可以由本领域的技术人员通过已知的方法获得。样本也可以是含有受试者精液或精子的任意样本。这样的样本可以由男性受试 者通过主动射精直接放置(储存)在屏障上，或在由受试者或医务人员收集后间接放在屏 障上。精子样本可以是直接从男性受试者获得的样本、从女性阴道或人工阴道中获得 的样本，所述样本要容量充足以足够用于有效诊断。在一些实施方案中，容量少于0.3毫 升，而在其它实施方案中，容量则大于0.3毫升。在进一步的实施方案中，本发明的试剂盒和方法中使用的精子样本是新鲜的精 子样本。在其它的一些实施方案中，精子样本是经储存的精液样本。可以用任意的储存 方法来储存精液样本，例如，在诊断前冷冻精液样本。解冻的精子样本可以使用本领域 内任意已知的用于过滤精子的方法进行过滤，以去除冷冻精子时所用的基底。本发明的试剂盒中选取的物理的屏障具有至少下述任一特征⑴粘度足以提供一个完整可靠的屏障；( )流动性足以促进精子通过其的活动性；(iii)能够防止精子与精子或与试剂盒的任一成分粘连；并且(iv)对精子没有有害的影响。物理的屏障一边与样本接触，而另一边与试剂接触，这使得样本的位置很接近 或就在用来进行定量和/或定性分析的试剂的附近。在一些实施方案中，如果试剂盒包 括至少两个屏障，那么至少有一个屏障是与样本相接触的，并且/或者至少另一个是和 试剂相接触的。还可以存在一个或多个附加的屏障。任何屏障物质都应该有足够的容 量或厚度，以防止除了精子外其它任何样本成分回流或扩散通过该屏障。实际上，活动 精子穿越屏障的能力与它积极向前运动的能力有关而与它消极扩散入屏障物质的能力无 关。如发明人所示，由于不含有具有向前运动力的精子的精液中的成分无法穿过屏 障，因此这样的精液对试剂的至少一种可测的性质的任何改变都没有影响。此外，物理的屏障既不会与样本中的精子也不会与含有精子的样本中的其它成 分相互作用，并且它也不会使所述剂的至少一种可测的性质产生任何变化。在一些实施方案中，屏障是液体屏障。使用液体屏障的话，所述屏障可包含悬 浮体，而悬浮体包括大量各种聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，这种悬浮体可以在油、水或其混 合物中相混合。一般来说，PVP的浓度在每毫升0.05-0.5毫克之间，在一些实施方案中， 浓度在每毫升0.1-0.3毫克之间。该悬浮体也可能含有分散剂或其它成分，如羧甲基纤维 素钠、透明质酸盐、丁二酸二辛酯磺酸钙(dioctyl calcium sulfosuccinate)或其它物质，这 些物质可以组合在所述悬浮体中，并且能加强所描述的发明的试剂盒中使用的屏障的期 望属性。液体屏障也可以包括油，如矿物油、甘油、丙二醇或粘液。在一些实施方案中，屏障包括矿物油，或者就是矿物油，或是一些适于用来进行组织培养的物质。在其它实施方案中，屏障是固体、半固体或凝胶屏障(gellousbarrier)。屏障可以是单一成分屏障或是多成分屏障，由至少两种不同的屏障物质组成， 如两种相互之间不能溶合的不同油；两种不同的固体(混合或层叠在一起)；油屏障以 及固体屏障等等。各种屏障物质可以根据其相互间的关系来构成，例如，根据它们的粘 性、孔隙率等等。在一些实施方案中，屏障由两种不同的物质构成第一种是矿物质油层，而第 二种是固体基质，如含有可以让精子经由其运动的孔的固体网状物。这种固体网状物可 以放置在屏障层与剂之间或是屏障层的上部，从而把屏障物质和含有精子的样本分离开来。一般来说，使用固体基质的话，此基质应有大小在50-200微米之间大小的孔。在一些实施方案中，这种固体网状物是基于丝的网状物(silk-based net)。一个 这种商业上普遍使用的网状物就是Nitrex。在其它实施方案中，可把液体PVP屏障(含有不同比率的水/油/PVP)和矿物 油层或固体基质混合。如下进一步所述，本发明的方法或试剂盒并不需要使用或是出现任何一种额外 的化学或是物理装置来阻止无前向运动力或前向运动力减缓的精子通过屏障朝着剂的方 向的运动。如下所示，本研究发现，屏障物质和/或所使用的构造足以使基本上只有具 有前向运动力的精子才会移动。在本发明范围内，“剂”是一种化学物质，其在与精子接触时，会改变任何一 种可测的性质，如物理性质。此物理性质可以从下述可测的性质中选择颜色、浓度、 物理状态(如固态到液态)、任何一种电性质或任何一种可测的光谱性质。在一些实施方 案中，物理性质的变化用肉眼就可以识别。在其它一些实施方案中，物理性质的变化要 通过分光镜进行确定和/或测定。一般来说，此剂在与本方法或试剂盒中使用的其它成分(即反应物)，如屏障物 质，接触时不会改变所述至少任一种可测的性质中的任何一种。在一些实施方案中，物理性质是颜色，并且一旦与精子接触，所产生的变化用 肉眼就可以确定和/或测定。在其它实施方案中，此剂是一种指示剂，它在与精子接触时会改变颜色和/或 浓淡(色调)，在颜色和/或浓淡上的所述变化可被定性和/或定量地测量到，从而既可 以诊断男性的生育能力又可以确定具有前向运动力的精子的百分比。此剂可以是例如以 Bradford、Biuret和Lowry为名称的商用的一种或两种试剂。可以商业地使用这些分析试 剂，或者可以根据本领域已知的试验过程来准备这些分析试剂。在一些实施方案中，指示剂就是Bradford。"Bradford"是一种光谱分析试验，它用于根据所测蛋白质的氨基酸组成成分 来测量样本中蛋白质的浓度。此试验以颜料考马斯法(dye Coomassie)中的吸光度偏移 (absorbance shift)为基础。此:Bradford试剂产品由甲醇和磷酸中的亮蓝G组成。到目前 为止，Bradford试验还没有有关用于精子检测和/或定量分析的报告。根据样本中精子的存在与否和 活动精子的数量(一般百分比活动性是可测的)，Bradford在一接触精子就产生的颜色变化是一种从grey-violate色(或从任何一种原始颜 色)向任何深浅的蓝色(或基于原始颜色的任何深浅的其它颜色)的变化。如下所示， 颜色的变化是活动精子数量的标示，与方法中使用的样本数量无关。可把颜色变化的强度与预先标定的颜色基准相对比，此颜色基准是诊断用试剂 盒的一部分。因此，本发明的方法也包括把与精子接触的剂的颜色与用于进行定性和/ 或定量测 定的预先标定的颜色基准相对比的步骤。例如，通过把结果颜色与预先标定的 颜色基准进行对比，此男性受试者可以确定是否实验样本中精子含量多余规定容量中正 常精子数，如，多于每毫升二千万个(称为阳性反应)或者少于每毫升二千万个(称为阴 性反应)。在其它实施方案中，指示剂是一种Biuret试剂。“Biuret试剂”是由氢氧化钾 (KOH)和硫酸铜(CuSO4)及酒石酸钾钠(KNaC4H4O6 · 4H20)组成的。这种蓝色试剂在 精子出现时会变成紫色/粉色。在进一步的实施方案中，指示剂是一种用于Lowry蛋白分析的试剂。在一些进一步的实施方案中，样本中的精子浓度通过使用测定精子的组织特异 性的蛋白质抗原的第一抗体来确定，其条件是允许所述抗体与所述样本中出现的任意抗 原相粘合，并且确定所述粘合在有或无一种第二抗体时的频率，其中，所述粘合的发生 频率指示出所述样本中整个精子的浓度。此处所用抗体是在本领域中已知的任意一种检 测精子的抗体，如精子中心粒抗体、抗精液肝素结合蛋白的抗体(antibody against seminal fluid heparin-binding protein)、抗动力蛋白(细胞质的或基因丝的)抗体和结合到精子的顶 体部位的抗体。在一些情况下，在使用抗体检测时，精子样本一经收集就迅速冷冻以防止所述 样本中的抗原被降解。精子通过屏障朝着剂的方向的主动运动是通过重力作用实现的，例如，通过把 样本放在剂的上方的位置，从而使得精子朝着重力的方向运动。在其它实施方案中，精 子的移动是一种被迫的移动，通过这种方法，使精子被迫穿过屏障。这样的被迫移动允 许构造水平的试剂盒，其中，样本大体上被放在指示剂的旁边，例如，放在指示剂的右 边或左边，而不是象在垂直构造中那样放在剂上方。在一些实施方案中，剂被放置在至少一种能够协助精子朝着剂的方向移动的化 学引诱物的附近。另一方面，本发明所用的方法进一步考虑到根据本领域已知的任何一种步骤 (例子详见http://sharedicmmev.com/kd/sperm washing.html)把此处所示的生育能力诊断
与生育能力诊断之前的精子清洗步骤或与之相平行的精子清洗步骤相结合以为实施IUI试 验准备好精子，从而考虑到了精子存活和受精的更好时机。此方法的优点在于单一原始 的一定量的精液被分成了两种样本，一种用于生育潜能分析，另一种用于IUI试验。本领域总所周知的是，精子清洗把精子细胞从精液中分离出来，去掉了样本中 死亡或移动缓慢的精子，也去除了会损害受精的额外化学成分。因此，一旦精子经过清 洗，就可以用于IUI试验以实现怀孕。精子清洗过程包括使用精子清洗液去除可能在子宫中产生不良反应的化学物 质。此处所使用的精子清洗液可以是本领域已知的任意一种精子清洗液。例如，清洗液可含有密度梯度化合物，如右旋糖酐、碘克沙醇、蔗糖、聚合物、密度梯度分离液 (nycodenz)或聚乙烯吡咯烷酮、覆盖着二氧化硅的平衡盐溶液和大分子。 本发明的另一个方面在于提供了一种确定样本怀孕潜能或在两个或多个精子样 本中识别具有怀孕潜能的精子样本的方法，所述方法包括(i)从男性受试者(如捐献者)处得到至少一种精子样本，其中，可随着时间的 推移获得额外的样本(如从同一个受试者处)；( )从所述至少一种精子样本中各获得一等分试样；(iii)根据本发明的方法测试所述等分试样以确定怀孕潜能；和(iv)确定样本是否具有怀孕潜能或确定具有怀孕潜能的至少一种精子样本。在一些实施方案中，所述方法进一步包括此处所述的精子清洗步骤。在一些进 一步的实施方案中，具有怀孕潜能的精子样本，即那些具有必要的活动精子量的精子样 本，可以用于受精，如利用人工生殖术(ART)。本诊断方法被用来甄选精子样本以检测精子样本的怀孕潜能。在一些实施方案 中，该甄选以确定活动精子的数量为基础。本发明的这种方法可以用来识别大量精子样 本中有怀孕潜能的样本或确定个体精子质量(如活动精子率等)随着时间推移的变化(如 波动)。因此，本发明还涉及到一种识别潜在不育男性或鉴定男性在影响其生育能力的 事件，如放射治疗、输精管切除术、器官再造的伤害、年龄、一般医疗状况和其它医护 人员可以确定的事件后的生育能力的方法。本发明的方法，尤其是它的定量分析方面可 以用于估算样本中活动精子的数量。例如，每毫升少于大约两千万个精子的定量分析结 果显示出样本怀孕潜能低；每毫升多余大约两千万个精子但少于大约四千万个精子的定 量分析结果显示出样本怀孕潜能不明确；而多余每毫升大约四千万个精子的定量分析结 果显示出样本怀孕潜能高。而在其它方面，本发明提供了精子诊断用试剂盒，在一些实施方案中，这些试 剂盒含有大量简单的试剂和装在盒子里的装置。确定男性生育能力的方法或此处所示的 其它方法所使用的试剂盒包括⑴用来盛放含有精子的样本的至少一个容器；(ii)接收器，该接收器在其第一端具有第一隔层(compartment)，此第一隔层含 有至少一种剂，在与含有精子的样本接触时，所述至少一种剂能够改变其至少一种可测 的性质，并且该接收器在其第二端具有用于盛放样本的第二隔层，一屏障把所述第一隔 层与所述第二隔层分离开来，以允许样本中的精子穿过而在所述样本和所述剂之间不直 接接触；和(iii)使用指南。此处所用术语“隔层”可以指用物理方法与其它腔室分离出来的任何腔室，或 指接收器的不能用任意一种物理方法与其它容积分离出来的任意容积。本试剂盒还包括用于盛放精子样本和把它分成两个或更多个部分的至少一个测 量单元。本试剂盒进一步包含用于盛放精子清洗液的至少一个额外的接收器以使精子得 以清洗。本试剂盒更包括一种促进精子收集的精子隔离装置(sperm isolation means)(如成漏斗状)。本试剂盒也包括如上所述的至少一个预先标定的颜色基准以确定样本中精子的 浓度。本发明的试剂盒可以在没有医务人员的干预下，由进行测试的男性自行操作。本发明的方法和试剂盒对于确定动物的生育能力，尤其是有与人类相同的精子 浓度和大小的动物，如狗、牛、马、兔子等的生育能力也十分有用。附图简述
为了理解本发明以及其在实际中的运用，将以非限制性实施例的方式结合所附 视图来描述实施方案，其中

图1是依照本发明的一个实施方案构建的一个一般的试剂盒的示意图。图2A和2B是本发明的试剂盒的两个实施方案的示意图。图3是本发明的试剂盒的一个进一步实施方案的示意图。图4是本发明的试剂盒的另一个实施方案的示意图。示例性实施方案的详述此处显示的方法和试剂盒易于实施和操作并且可以在不到15分钟的时间内完 成。如上所述，这些方法和试剂盒提供了许多有用信息，例如，监控由于诸如饮食、睡 眠、运动、暴露在烟雾或其它致癌物质中以及酒精或毒品的摄取等变化因素对之后产生 的精子样本的生育能力的影响。而且，这些方法和试剂盒也能显示出某一特定男性的男性生育能力或避孕治疗 是否有效或者随后从同一男性中提取的精子是否具有怀孕的能力。此外，这些方法和试 剂盒对决定特定精子样本是否适合于在ART中使用也十分有用。图1显示了本发明的试剂盒的一个示例性的实施方案。放置有一个容器10，该 容器10用来盛放例如指示剂12的剂、屏障14以及位于屏障14的顶部的来自男性受试者 的精液样本16 (可能含有活动和非活动精子)。如图4所示结构，容器10可以具有不同 形状的底部。虽然图中显示的容器10大体上是个矩形，但其可被设置成具有任何所选择 的形状，例如，设置成漏斗型容器以便于男性捐献者收集和获得精子样本。容器10可选 用任意生物相容性材料来制造，如玻璃或塑料。容器可以制成任意大小。一旦把精子样 本16加入容器10中屏障层14的顶部，活动精子就开始通过屏障14朝着位于容器10底 部的指示剂12移动。一段足够的时间后(大约15分钟)，如果精子样本中含有活动精 子，则指示剂12会产生颜色变化。没有使用任何间隔物进行分离，容积12、14和16在 此各被称为一个隔层。容器可以选择性地包括一个附加的接收器A来盛放精子清洗液B以在例如宫内 人工授精(IUI)过程之前清除死亡样本或移动缓慢的精子以及可能损害受精过程的其他化 学制剂。由此，精子样本得以等分，一等分试样用来进行生育能力诊断，而另一等分试 样则用此处所述精子清洗液进行清洗。在第二等分试样精子样本在经过清洗后，会被送 到一个附加的接收器C中进行储存以用于宫内人工授精(IUI)。在本发明的一些实施方案 中，为了连接用于放置精子样本的注射器或一次性吸管，接收器A的外表面呈螺纹状。在本发明的实施过程中，较大或较小的接收器均可使用，不会超出本发明的范 围。为了最大限度利用特定诊断目的精子诊断/清洗和宫内人工授精(IUI)过程，可以采用用于不同数量的精子样本、精子清洗液和屏障物质的这些其他尺寸的接收器。或者，如图2A所示，把精子样本16加入具有包含在容器10的底部的指示剂12 的容器20中，在指示剂12上方放有屏障层14，并且该屏障层14用例如丝层(Silklayer)IS 包边，以防止所加入的精子样本与屏障物质相混合。如图2B所示，也可以在指示剂12 和屏障层14中间放入另一个丝层18A。

如图3所示，在本发明的试剂盒的另一个示范实施方案中，容器30中 盛放了位 于容器底部的指示剂12、位于指示剂12与可能和指示剂12相同或不同的第二种指示剂 12A之间的屏障层14，以及位于指示剂12A和精子样本16之间的第二屏障层14A。与 之前一样，屏障层14和14A均可用固体基质，如丝层，包住其一边或两边。如前所示，容器可以是大体上竖直的或水平的，可以有不同的隔层，隔层的摆 放顺序与以上任一实施方案相似。
权利要求
1.一种用于诊断男性生育能力的方法，所述方法包括(a)把精子的样本放在剂的附近，在与含有精子的样本接触时，所述剂能够改变其至 少一种可测的性质；(b)给予所述样本中的精子充足的时间，以使其朝向所述剂移动并与所述剂接触；以及(c)确定所述样本中存在或不存在具有前向运动力的精子，其中，所述剂的至少一种物理性质的改变表明存在具有前向运动力的精子。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，能够改变其至少一种可测的性质的所述剂是指 示剂。
3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述指示剂是Bradford。
4.根据权利要求2所述的方法，其中，所述指示剂是双缩脲试剂。
5.根据权利要求2所述的方法，其中，所述指示剂是通过Lowry蛋白分析获得的。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述精子的样本被放置在物理的屏障上，所述 物理的屏障把样品和剂相分离并允许精子移动通过所述物理的屏障。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述屏障是液体屏障。
8.根据权利要求6所述的方法，其中，所述屏障是固体、半固体或凝胶。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述固体是具有大小为50-200微米范围的孔 的固体基质。
10.根据权利要求8或9所述的方法，其中，所述基质是基于丝的网状物。
11.根据权利要求6至10中任一项所述的方法，其中，所述屏障是单一成分屏障。
12.根据权利要求6至10中任一项所述的方法，其中，所述屏障是多成分屏障。
13.根据权利要求6至7、11或12中任一项所述的方法，其中，所述屏障是悬浮体的 形式，所述悬浮体含有至少一种聚乙烯吡咯烷酮、油、水以及其混合物。
14.根据权利要求13中所述的方法，其中，所述油是矿物油。
15.根据权利要求6至14中任一项所述的方法，其中，所述屏障还包含丙三醇、丙二 醇和粘液中的至少一种。
16.根据前述权利要求中任一项所述的方法， 述改变能用肉眼识别和/或测量。
17.根据前述权利要求中任一项所述的方法， 精子浓度的步骤。
18.根据前述权利要求中任一项所述的方法， 的附近。
19.一种确定精子样本中怀孕潜能的方法，所述方法包括(a)从男性受试者处获得至少一个精子样本；(b)从所述至少一个精子样本中的每一个中获得一等分试样；(C)根据权利要求1至18中任一项所述的方法检测各等分试样，以确定怀孕潜能；和(d)确定所述至少一个精子样本具有怀孕潜能。
20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法还包括精子清洗的步骤，从 而，在所述诊断之前，或所述诊断的同时，大量精子得以清洗。2其中，所述剂的至少一种物理性质的所 其中，所述方法还包含确定所述样本中 其中，所述剂位于至少一种化学引诱物
21.一种在确定男性生育能力的方法中使用的试剂盒，所述试剂盒包括(a)至少一个容器，其用于盛放含有精子的样本；(b)接收器，其在第一端具有第一隔层，所述第一隔层含有至少一种剂，在与含有精 子的样本接触时，所述至少一种剂能够改变其至少一种可测的性质，并且所述接收器在 所述接收器的第二端具有用于盛放样本的第二隔层，所述第一隔层与所述第二隔层通过 一屏障分离开来，以允许所述样本和所述剂液体之间相通但不直接接触；以及(C)使用指南。
22.根据权利要求21所述的试剂盒，还包括精子隔离装置。
23.根据权利要求21所述的试剂盒，还包括用于确定样本中精子浓度的至少一个预先 标定的颜色基准。
24.根据权利要求21至23中任一项所述的试剂盒，所述试剂盒还包括用于盛放精子 样本并把所述样本分离成两个或更多个部分的至少一个测量单元。
25.根据权利要求21至24中任一项所述的试剂盒，所述试剂盒还包括用于盛放精子 清洗液以清洗精子的至少一个附加接收器。
26.根据权利要求1至20中任一项所述的方法或根据权利要求21至25中任一项所述 的试剂盒，其中，所述样本一旦被收集，就立即予以冷冻。
27.—种方法，其如说明书和说明书附图所公开的。
28.—种试剂盒，其如说明书和说明书附图所公开的。
全文摘要
公开了一种用于诊断男性生育能力的方法和试剂盒。
文档编号G01N33/58GK102016591SQ200980114881
公开日2011年4月13日 申请日期2009年3月22日 优先权日2008年3月20日
发明者泰德哈尔·赞巴尔 申请人:泰德哈尔·赞巴尔