专利名称：真菌葡聚糖检测鲎试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型公开一种真菌葡聚糖检测鲎试剂盒，按国际专利分类表(IPC)划分属于检测试剂盒制造技术领域，尤其是涉及一种检测血浆真菌(1，3) β -D葡聚糖水平的检测试齐U盒。
背景技术：
近年来由于抗生素和免疫抑制剂的广泛应用，真菌感染病症逐年增多。侵袭性真菌感染对患者的健康与生命构成严重威胁。由致病性真菌所引起的人体侵袭性感染，如侵及到皮肤深层和内脏，如肺、粘膜、肌肉、脑、消化道等器官，危害性很大。目前，侵袭性真菌感染已成为免疫功能低下患者发病和死亡最常见的原因。目前作为诊断真菌病的基本方法包括临床表现，真菌学、免疫学和病理学。一般是通过真菌镜检、真菌培养、组织病理、生理生化等指标来诊断。最直接的方法是能够证明真菌存在于组织中，或在渗出物中可分离培养。常用的微生物培养法的特点是耗时长，并由于大量广谱抗生素的广泛使用，其培养阳性率也是很低。(1，3)-β-D-葡聚糖为真菌细胞壁主要组成结构成分之一，所有真菌细胞壁结构均含有(1，3)-β-D-葡聚糖，因此，通过检测细胞壁成分(1，3)-β-D-葡聚糖的含量，可以直接反应真菌的感染程度。鲎试剂中含有对(1，3)-β-D-葡聚糖敏感的G因子和会形成凝胶的凝固蛋白，目前还没有专门检测血浆真菌(1，3) β -D葡聚糖水平的检测鲎试剂盒。
发明内容针对现有技术的不足，本实用新型提供了一种真菌葡聚糖检测鲎试剂盒，检测的检品是病人血浆，通过检测血浆中的(1，3) β-D葡聚糖水平，为临床侵袭性真菌感染的早期诊断提供依据。为达到上述目的，本实用新型是通过以下技术方案实现的一种真菌葡聚糖检测鲎试剂盒，是由检品盒和标准品盒组成，其中检品盒，其盒体内包含数支鲎试剂瓶和葡聚糖检品处理液瓶，两者的数量比例为 1:1 ；标准品盒，其盒体内包含鲎试剂瓶、葡聚糖检品处理液瓶、(1，3)-β-D-葡聚糖标准品一支、溶解液瓶及空安瓿两支以上。进一步，所述的标准品盒包含鲎试剂瓶八支、葡聚糖检品处理液瓶四支、 (1,3)-β-D-葡聚糖标准品瓶一支、溶解液瓶三支及空安瓿四支，且上述的鲎试剂瓶、检品处理液瓶、标准品瓶及溶解液瓶均为封口的无葡聚糖安瓿瓶。进一步，所述的鲎试剂瓶内鲎试剂装量为0. Iml/支，(1，3)-β-D葡聚糖标准品瓶内灌装有效价为l-20ng的(1，3) -β -D葡聚糖标准品，葡聚糖检品处理液内处理液的装量为0. 9ml/支，溶解液瓶内溶解液装量为aiil/支。本实用新型试剂盒中的鲎试剂为只对(1，3)-β-D-葡聚糖起反应的鲎试剂。本试剂盒配有能排除血浆对鲎试验干扰的葡聚糖检品处理液。血浆经葡聚糖检品处理液稀释10倍后，在70° C加热10分钟处理。处理后的血浆对鲎试验的干扰基本被排除。本试剂盒配套带有恒温装置的光学检测系统使用。检品和鲎试剂在37°C反应，用软件记录反应液OD值的动态变化。根据反应液OD值上升到启动OD所需要的启动时间的对数与 (1，3)-β-D-葡聚糖浓度的对数成反比例线性关系的原理，用本实用新型中的标准品盒做标准曲线。再根据血浆和鲎试剂反应的OD值的动态变化情况从标准曲线上得出血浆中的 (1,3)-β-D-葡聚糖含量。本实用新型具有如下有益效果1、采用葡聚糖检品处理液对血浆进行稀释加热处理，能有效地排除血浆中的干扰因子对鲎试验的干扰，快速准确地检测出血浆中(1，3) β-D葡聚糖水平。配套的鲎试剂为只对(1，3) β-D葡聚糖反应的试剂，特异性高；2、该试剂盒内的反应可在2小时内完成，比传统的微生物培养法诊断侵袭性真菌感染缩短几天时间；3、本实用新型检测过程不受抗真菌药物的影响。
图1是本实用新型标准品盒示意图；图2是本实用新型检品盒示意图。
具体实施方式
以下结合附图对本实用新型作进一步说明实施例请参阅图1及图2，本实用新型试剂盒由检品盒1和标准品盒2组成，检品盒1包含数支鲎试剂瓶11和葡聚糖检品处理液瓶12，针对不同的测样可以选择不同数量的鲎试剂和内毒素检品处理液，但两者的数量比例为1 1 ；标准品盒2包含八支鲎试剂瓶 21、四支葡聚糖检品处理液瓶22、一支(1，3)-β-D-葡聚糖标准品瓶23、三支溶解液M及四支空安瓿25。本试剂盒中的鲎试剂为只对(1，3)-β-D-葡聚糖起反应的鲎试剂。本实用新型，对葡聚糖特异反应的鲎试剂，装量为0. Iml/支，灌装于无葡聚糖安瓿中，冷冻干燥封口 ；(1，3) β-D葡聚糖标准品，效价为l-20ng，灌装于无葡聚糖安瓿中， 冷冻干燥封口 ；葡聚糖检品处理液，装量为0.9ml/支，灌装于无葡聚糖安瓿中，高压灭菌； 溶解液，装量为ani/支，灌装于无葡聚糖安瓿中，高压灭菌；无葡聚糖空安瓿，无菌状态下封口。鲎试剂中含有对(1，3)- β -D-葡聚糖敏感的G因子和会形成凝胶的凝固蛋白。当葡聚糖激活G因子形成活化的G因子，会近一步激活凝固蛋白形成凝胶。在凝胶形成的过程中，反应液的OD值逐步升高。反应液OD达到某一预设值的反应时间是和反应液葡聚糖的浓度成反比例关系的。通过光学检测仪器和软件记录反应液OD的变化，可以根据标准曲线计算出反应液中葡聚糖浓度。本实用新型的使用方法如下一.标准曲线的制作1.从标准品盒中取(1，3)-β-D-葡聚糖标准品一支加入适量溶解液溶解，在漩涡混合仪上剧烈震荡2分钟以上，按所标示效价用溶解液在空安瓿中逐步稀释配制成 10000pg/ml, 1000pg/ml, 100pg/ml 的标准葡聚糖溶液；2.取 0. Iml 阴性对照液(即溶解液)及浓度为 10000pg/ml、1000pg/ml、100pg/ml 的标准葡聚糖溶液，分别加入到0. 9ml葡聚糖检品处理液中，混勻。70°C保温10分钟，取出后立即放入冷水中冷却；3.取处理后的阴性对照液、各浓度葡聚糖标准溶液混合液0.2 ml加入鲎试剂中， 轻轻振摇溶解鲎试剂后移取0. Iml反应混合液至除热原96孔微板中，放置于光学检测仪器中检测。反应结束后，软件自动进行标准曲线拟合；二.检品检测1.血浆采集用无热原肝素钠抗凝真空采血管采集静脉血anl，进行3000rpm离心60s，分离得到富含血小板的血浆；2.检测2. 1.取0. Iml血浆，加入到0. 9ml葡聚糖检品处理液中，混勻后70°C保温10分钟，取出后立即放入冷水中冷却；2. 2取经葡聚糖检品处理液处理后的血浆混合液0. 2 ml加入鲎试剂中，溶解后移取0. Iml至除热原96孔微板中，放置于光学检测仪器中检测，反应结束后自动计算出样本 (1,3)-β-D-葡聚糖含量；三.检测结果解释正常体液中(1，3)-β-D-葡聚糖含量< 10pg/ml。检测结果(1，3)_β _D_葡聚糖含量大于或等于10pg/ml表明该检品有(1，3)-β-D-葡聚糖存在，病人有侵袭性真菌感染危险。检测结果(1，3)-β-D-葡聚糖含量小于10pg/ml表明该检品(1，3)-β-D-葡聚糖含量低，病人侵袭性真菌感染的可能性小。以上所记载，仅为利用本创作技术内容的实施例，任何熟悉本项技艺者运用本创作所做的修饰、变化，皆属本创作主张的专利范围，而不限于实施例所揭示者。
权利要求1.一种真菌葡聚糖检测鲎试剂盒，其特征在于是由检品盒和标准品盒组成，其中 检品盒，其盒体内包含数支鲎试剂瓶和葡聚糖检品处理液瓶，两者的数量比例为1:1 ; 标准品盒，其盒体内包含鲎试剂瓶、葡聚糖检品处理液瓶、(1，3)-β-D-葡聚糖标准品一支、溶解液瓶及空安瓿两支以上。
2.根据权利要求1所述的真菌葡聚糖检测鲎试剂盒，其特征在于所述的标准品盒包含鲎试剂瓶八支、葡聚糖检品处理液瓶四支、(1，3)-β-D-葡聚糖标准品瓶一支、溶解液瓶三支及空安瓿四支，且上述的鲎试剂瓶、检品处理液瓶、标准品瓶及溶解液瓶均为封口的无葡聚糖安瓿瓶。
3.根据权利要求1或2所述的真菌葡聚糖检测鲎试剂盒，其特征在于所述的鲎试剂瓶内鲎试剂装量为0. Iml/支，(1，3)-β-D葡聚糖标准品瓶内灌装有效价为l-20ng的 (1，3)-β-D葡聚糖标准品，葡聚糖检品处理液内处理液的装量为0. 9ml/支，溶解液瓶内溶解液装量为anl/支。
专利摘要本实用新型公开一种真菌葡聚糖检测鲎试剂盒，通过检测血浆中的(1,3)β-D葡聚糖水平，为临床侵袭性真菌感染的早期诊断提供依据。本实用新型检测试剂盒由检品盒和标准品盒组成，其中检品盒包含的鲎试剂瓶和葡聚糖检品处理液瓶的数量比例为1:1；标准品盒包含鲎试剂瓶八支、葡聚糖检品处理液瓶四支、(1,3)β-D葡聚糖标准品瓶一支、溶解液瓶三支及空安瓿四支。本实用新型采用葡聚糖检品处理液对血浆进行稀释加热处理，能有效地排除血浆中的干扰因子对鲎试验的干扰，快速准确地检测出血浆中(1,3)β-D葡聚糖水平，并不受抗真菌药物的影响。
文档编号G01N33/50GK202119774SQ201120213878
公开日2012年1月18日 申请日期2011年6月23日 优先权日2011年6月23日
发明者不公告发明人 申请人:厦门市鲎试剂实验厂有限公司