专利名称：用于稻谷及大米中双草醚残留检测的预处理方法
技术领域：
本发明涉及的是一种食品安全技术领域的方法，具体是一种用于稻谷及大米中双 草醚残留检测的预处理方法。
背景技术：
稻谷是水稻(Oryza sativa L.)收获后的种子，大米是稻谷经脱壳、去皮和脱胚后 得到的可食用部分。大米是我国人民的主要粮食和众多加工食品的基本原料。由于农药的 使用或滥用，稻谷及大米中的农药残留已成为食品安全的一个重要问题。双草醚，是我国多 年使用苄嘧磺隆、吡嘧磺隆等磺酰脲类除草剂造成严重残留和抗药性问题后，引进使用的 除草剂类农药，是近年来被关注较多的除草剂类农药之一。双草醚是由日本1988年研制、1996年向全球农药市场推出的，主要防除稻田稗草 及其他禾本科杂草。双草醚获中国专利授权，已经逐步成为我国生产的一种高效大吨位除 草剂类农药。它的化学名称是2，6_双(4，6-二甲氧嘧啶-2-氧基)苯甲酸钠，它的英文名 为bispyrikic-sodium，国外商品名为Nominee，我国称农美利。双草醚水溶解度较高，为 73. 3g/L(25°C )，极易造成环境和农产品污染。欧美日、俄罗斯、东南亚等国都对大米中双草 醚残留做出了限量规定。目前国内外对双草醚的检测技术研究极少，国际上，作为该农药发 明地的日本，制定了双草醚的检测技术标准，采用带碱热离子检测器或高灵敏度氮磷检测 器的气相色谱仪和气相色谱-质谱仪，整个预处理过程十分复杂，在繁琐的提取步骤完成 之后，尚需采用剧毒的三甲基甲硅烷基重氮甲烷进行双草醚甲基化衍生，之后还需一道净 化工序后再进入仪器分析，其定量限是0. 01mg/kgo经过对现有技术的检索发现，郑丽英等在《水土壤植株和稻米中双草醚残留分析 的方法研究》(农业环境科学学报，200524- 中公开了一种采用液-液萃取方法对双草醚 残留进行净化的方法，但是该方法需要大量不互溶溶剂，样品处理步骤复杂，样品回收率和 精密度不理想和溶剂蒸发时产生样品损失等，不利于大范围推广。

发明内容
本发明针对现有技术存在的上述不足，提供一种用于稻谷及大米中双草醚残留检 测的预处理方法，这种方法能够利用固相萃取技术来代替常见的液-液净化方法，整个过 程时间缩短，溶剂使用量减少。本发明是通过以下技术方案实现的，本发明通过制作线性标准曲线并提取双草醚 残留，再进行双草醚残留的净化，实现HPLC检测的预处理。本发明具体包括以下步骤第一步、制作线性标准曲线分别配制浓度为4、2、1、0. 5、0. 25、0. 125,0. 0625, 0. 03125ppm的双草醚标准液，经色谱柱检测后，根据进样浓度和对应色谱峰面积制成线性 标准曲线。所述的色谱柱检测是指在色谱柱为C18250女4. 6mm ODS不锈钢柱，流动相是
365%乙腈和35%水的混合液，流速1. OmL/min,进样量20 μ L，检测波长248nm，柱温30°C的 环境下。第二步、双草醚残留的提取，具体步骤包括2. 1)采用420 μ m的标准网筛，以0. 5g/mL的比例与水混合后放置2h ；加入乙腈后 搅拌;3min后，用涂布Icm厚硅藻土的滤纸，抽滤于磨口减压浓缩器中。2.2)向残留物中加入乙腈，搅拌:3min后，用涂布Icm厚硅藻土的滤纸，抽滤于磨 口减压浓缩器中且合并滤液于减压浓缩器中，40°C以下浓缩至约20mL ；然后将浓缩后的残 留物移入预先注入含有1体积份的饱和NaCl溶液、10体积份的0. 05mol/LH3P04缓冲液(pH =7. 4)和10体积份的0. 5mol/L NaHCO3溶液的分液漏斗中；用乙酸乙酯洗涤上述减压浓 缩器的茄型瓶，合并洗液于上述分液漏斗中。2. 3)用振荡器激烈振荡5分钟后，静置，舍弃乙酸乙酯层，重复该操作两次后向余 下的水层加入0. 5% H3PO4溶液，调节pH = 3. 05后，加入乙酸乙酯，用振荡器激烈振荡5min 后，静置，乙酸乙酯层移入三角瓶中；再向水层中加入乙酸乙酯，按上述同样操作，合并乙酸 乙酯于磨口减压浓缩器中，最后用乙酸乙酯洗涤三角瓶，以此洗液洗涤滤纸上的残留物，重 复操作两次。2. 4)合并两次洗涤液于减压浓缩器中，40°C以下除去乙酸乙酯后加入甲醇以溶解 残留物。第三步、双草醚残留的净化采用固相萃取小柱进行净化，首先对进行活化平衡， 然后上样，上样完毕后将未吸附的非目标物淋洗掉，然后用洗脱液将吸附的目标物洗脱下 来，收集洗脱液减压浓缩至干，再用流动相溶解，用微孔滤膜过滤。与现有技术相比本发明的优点在于采用固相萃取技术作为净化手段，这种方法 可以进行批量实验，节省时间，减少溶剂使用和废物产生，同时可富集痕量分析物，回收率 尚ο


图1双草醚线性标准曲线。图2双草醚检测结果图。
具体实施例方式下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行 实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施 例。以下实施例中，所用的试剂均为HPLC级。实施例1 采用Waters OASIS MAX 6cc固相萃取小柱，在样品提取完毕后进行净化，具体步 骤包括a)活化平衡，3mL甲醇活化，3mL水平衡；b)上样，将3mL待净化溶液加入小柱，流出液弃去；c)淋洗，依次将3mL 0. 05M pH = 7. 0醋酸钠水溶液、3mL甲醇淋洗，淋洗液弃去；
d)洗脱，3mL 5%甲酸甲醇溶液洗脱，收集洗脱液；e)再溶解，将洗脱液减压浓缩至干，5mL流动相溶解，微孔滤膜过滤后进行HPLC检 测分析。实施例2采用Supelclean ENVI-18固相萃取小柱，在样品提取完毕后进行净化。净化步骤 如下a)活化平衡，3mL乙腈活化，3mL水平衡；b)上样，将3mL待净化溶液加入小柱，流出液弃去；c)淋洗，3mL 0. IM醋酸水溶液淋洗，淋洗液弃去；d)洗脱，5mL异戊烷洗脱，收集洗脱液；e)再溶解，将洗脱液减压浓缩至干，5mL流动相溶解，微孔滤膜过滤后进行HPLC检 测分析。实施例3采用DIKMA ProElut PXA 3cc固相萃取小柱，在样品提取完毕后进行净化，具体步 骤包括a)活化平衡，3mL甲醇活化，3mL水平衡；b)上样，将3mL待净化溶液加入小柱，流出液弃去；c)淋洗，依次将3mL 0. 05M pH = 7. 0醋酸钠水溶液、3mL甲醇淋洗，淋洗液弃去；d)洗脱，3mL 5%甲酸甲醇溶液洗脱，收集洗脱液；e)再溶解，将洗脱液减压浓缩至干，5mL流动相溶解，微孔滤膜过滤后进行HPLC检 测分析。
权利要求
1.一种用于稻谷及大米中双草醚残留检测的预处理方法，其特征在于，通过制作线性 标准曲线并提取双草醚残留，再进行双草醚残留的净化，实现HPLC检测的预处理。
2.根据权利要求1所述的用于稻谷及大米中双草醚残留检测的预处理方法，其特 征是，所述的制作线性标准曲线是指分别配制浓度为4、2、1、0.5、0. 25,0. 125,0. 0625、 0. 03125ppm的双草醚标准液，经色谱柱检测后，根据进样浓度和对应色谱峰面积制成线性 标准曲线。
3.根据权利要求2所述的用于稻谷及大米中双草醚残留检测的预处理方法，其特征 是，所述的色谱柱检测是指在色谱柱为C18250 4. 6mm ODS不锈钢柱，流动相是65%乙腈 和35%水的混合液，流速1. OmL/min,进样量20 μ L，检测波长248nm，柱温30°C的环境下。
4.根据权利要求1所述的用于稻谷及大米中双草醚残留检测的预处理方法，其特征 是，所述的提取双草醚残留具体包括以下步骤2. 1)采用420 μ m的标准网筛，以0. 5g/mL的比例与水混合后放置2h ；加入乙腈后搅拌 :3min后，用涂布Icm厚硅藻土的滤纸，抽滤于磨口减压浓缩器中；2.2)向残留物中加入乙腈，搅拌:3min后，用涂布Icm厚硅藻土的滤纸，抽滤于磨口减 压浓缩器中且合并滤液于减压浓缩器中，40°C以下浓缩至约20mL ；然后将浓缩后的残留物 移入预先注入含有1体积份的饱和NaCl溶液、10体积份的0. 05mol/LH3P04缓冲液(pH = 7. 4)和10体积份的0. 5mol/L NaHCO3溶液的分液漏斗中；用乙酸乙酯洗涤上述减压浓缩器 的茄型瓶，合并洗液于上述分液漏斗中；2. 3)用振荡器激烈振荡5分钟后，静置，舍弃乙酸乙酯层，重复该操作两次后向余下的 水层加入0. 5% H3PO4溶液，调节pH = 3. 05后，加入乙酸乙酯，用振荡器激烈振荡5min后， 静置，乙酸乙酯层移入三角瓶中；再向水层中加入乙酸乙酯，按上述同样操作，合并乙酸乙 酯于磨口减压浓缩器中，最后用乙酸乙酯洗涤三角瓶，以此洗液洗涤滤纸上的残留物，重复 操作两次；2. 4)合并两次洗涤液于减压浓缩器中，40°C以下除去乙酸乙酯后加入甲醇以溶解残留物。
5.根据权利要求1所述的用于稻谷及大米中双草醚残留检测的预处理方法，其特征 是，所述的净化是指采用固相萃取小柱进行净化，首先对进行活化平衡，然后上样，上样完 毕后将未吸附的非目标物淋洗掉，然后用洗脱液将吸附的目标物洗脱下来，收集洗脱液减 压浓缩至干，再用流动相溶解，用微孔滤膜过滤。
全文摘要
一种食品安全技术领域的用于稻谷及大米中双草醚残留检测的预处理方法，通过制作线性标准曲线并提取双草醚残留，再进行双草醚残留的净化，实现HPLC检测的预处理。本发明利用固相萃取技术来代替常见的液-液净化方法，整个过程时间缩短，溶剂使用量减少。
文档编号G01N30/02GK102095819SQ20101060104
公开日2011年6月15日 申请日期2010年12月23日 优先权日2010年12月23日
发明者吴时敏, 梅俊 申请人:上海交通大学