专利名称：赶黄祛斑胶囊中丹酚酸b的质量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种药物制剂中活性成分的质量检测方法，具体来说，涉及的是一种治疗黄褐斑的中药胶囊制剂中丹酚酸B的质量检测方法，属于药品质量控制技术领域。
背景技术：
本发明具体涉及的治疗黄褐斑的中药胶囊制剂即赶黄祛斑胶囊，由赶黄草835g和丹参300g制成稠膏后，经加入适当的辅料制备得到，其具体制备方法及用途已记载于公开号为CN101700276的发明专利中，该制剂具有退黄、化瘀、祛斑的作用，临床上拟用于治疗由于肝气郁结引起的女性黄褐斑的治疗。赶黄祛斑胶囊中含有赶黄草和丹参，经研究证明，赶黄草的主要有效成分一槲皮素具有祛斑、抗炎、抗过敏，增强皮肤毛细血管通透性功能；丹参中的主要成分有丹参酮II Λ和丹酚酸B，其中:丹参酮II 4具有抗炎的功能，丹酚酸B具有强大的抗氧化的作用。在对赶黄祛斑胶囊的分析中也发现本品中的主要有效成分为槲皮素，丹参酮II八和丹酚酸B。通过查询目前国内外的相关文献发现，仅有单独测定赶黄草制剂中的槲皮素或单独测定丹参制剂中的丹参酮II八和丹酚酸B的报道，还没有关于对由赶黄草、丹参两味药组成的复方制剂中的槲皮素，丹参酮II八和丹酚酸B进行检测的文献报道。为了更好的控制赶黄祛斑胶囊的质量，保证临床用药的安全性，有必要建立一套完整的质量控制标准以更好的控制本品的质量。赶黄祛斑胶囊的制备工艺中主要涉及的稠膏制备方法为:丹参300g，加90%乙醇回流1.5小时，滤过，滤液回收乙醇至稠膏；丹参药渣与赶黄草835g，加水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成相对密度为1.15 1.18 (60 65°C)的清膏，冷却，力口乙醇使含醇量达60%，搅拌，静置，滤过，沉淀用60%乙醇洗涤三次，合并洗液与滤液，回收乙醇并浓缩成相对密度1.30 1.32的稠膏；合并上述两种稠膏，备用。取稠膏，加入适量淀粉、微晶纤维素、滑石粉、硬脂酸镁等，混匀，制粒干燥后分装或浸膏直接干燥后打成粉末直接分装，即得。这里得到的其实是胶囊的内容物，经过分析可以得知，整个生产工艺中质量控制比较简单和粗糙，可能会因为生产批次的不一样，或者就算是同一批次也会生产出含量各不相同、品质不均勻的广品。如果在内容物制备完成或者在内容物制备过程中，就对内容物进行适当的鉴别和含量检测，这无疑对产品的质量稳定和疗效稳定起着至关重要的作用。

发明内容
本发明的目的是针对目前国内还没有上市的药物制剂赶黄祛斑胶囊，提供一种可以全面鉴别及检测该制剂有效成分之一丹酚酸B的质量检测方法，确保了该药物制剂的安全有效。为实现上述发明目的，本发明采用的具体技术方案如下: 赶黄祛斑胶囊中丹酚酸B的质量检测方法，其特征在于:以丹酚酸B为对照品，以甲醇、乙腈、甲酸和水的混合物为流动相，甲醇:乙腈:甲酸:水v/v/v/v =23:10:1:66，用高效液相色谱法进行鉴别和含量检测。所述高效液相色谱的条件为:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-甲酸-水(23:10:1:66)为流动相，检测波长为286nm ;理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。所述鉴别检测的具体方法如下:
A对照品溶液的制备:精密称取丹酚酸B对照品适量，用75%甲醇溶液制成每Iml中含
0.1mg的对照品溶液；
B供试品溶液的制备:精密称定赶黄祛斑胶囊内容物0.5g，置锥形瓶内，加入甲醇:水v/v=75:25的溶液50ml，精密称定后，超声提取30分钟，取出，放冷，再精密称定并采用甲醇:水v/v=75:25的溶液补足失去的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；
C液相色谱测定色谱峰:分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪中，检测出供试品色谱中与对照品色谱峰保留时间相一致的色谱峰。所述含量检测的具体步骤如下:
A对照品溶液的制备:精密称取丹酚酸B对照品适量，用75%甲醇溶液制成每Iml中含
0.1mg的对照品溶液；
B供试品溶液的制备:精密称定赶黄祛斑胶囊内容物0.5g，置锥形瓶内，加入甲醇:水v/v=75:25的溶液50ml，精密称定后，超声提取30分钟，取出，放冷，再精密称定并采用甲醇:水v/v=75:25的溶液补足失去的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；
C液相色谱测定含量:分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪中，测定，即得。发明人对鉴别方法和含量测定方法的可行性进行了验证研究；具体实验资料如下:
1、丹酚酸B的高效液相鉴别研究 方法:高效液相色谱法
样品和对照品处理方法:精密称取丹酚酸B对照品适量，加75%甲醇溶液制成每Iml中含0.1mg的对照品溶液液。供试品溶液制备:取供试品0.5g，精密称定，置锥形瓶内，加入50ml甲醇:水v/v=75:25的溶液，精密称定后，超声提取30分钟，取出，放冷，再精密称定并采用甲醇:水v/v=75:25的溶液补足失去的重量，摇匀，滤过。作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪中，测定，即得。色谱柱:月旭XB-C18 (250mmX 4.6mm, 5 μ m)
流动相:甲醇-乙腈-甲酸-水(23:10:1:66)
检测波长:286nm
流速:1.0ml/min
结果:在拟定条件下，样品中有与对照品保留时间一致的色谱峰。2、丹酚酸B的高效液相含量测定研究 方法:高效液相色谱法
1.仪器与实验药 Alltech-426型高效液相，CQX25-06超声波清洗器。甲醇，乙腈为色谱级，甲酸为分析纯。丹酚酸B对照品为中国药品生物制品检定所提供，赶黄祛斑胶囊由成都力思特药物研究有限公司提供。2.方法与结果 2.1色谱条件:
色谱柱:月旭 XB- C18 (250mmX 4.6mm, 5 μ m)
流动相:甲醇-乙腈-甲酸-水(23:10:1:66)
检测波长:286nm 流速:1.0ml/min
2.2溶液制备
2.2.1精密称取丹酚酸B对照品适量，加75%甲醇溶液制成每Iml中含0.1mg的对照品溶液液。2.2.2供试品溶液制备:取供试品约0.5g，精密称定，置锥形瓶内，加入50ml甲醇:水v/v=75:25的溶液，精密称定后，超声提取30分钟，取出，放冷，再精密称定并采用甲醇:水v/v=75:25的溶液补足失去的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。2.3系统适用性实验:分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μ 1，注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，结果丹酹酸B的保留时间为17.214min,丹酹酸B峰与前后色谱峰的分离度均大于1.5，理论塔板以丹酚酸B峰计算为5474.2.4线性关系:分别精密吸取2.2.1项下对照品溶液2.5，5，7.5，10，15，20 μ 1，注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值A对进样量C进行回归，得标准曲线方程:A=1014741C-10244 r=0.9991，结果表明丹酚酸B进样量在2.5_20ng范围内峰面积与进样量有良好的线性关系。2.5精密度研究，精密吸取2.2.1项下对照品溶液20 μ 1，注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定峰面积，重复进样6次，测得丹酚酸B峰面积RSD为1.32%，表明仪器精密度良好。2.6稳定性研究，精密吸取2.2.2项下对照品溶液20 μ 1，分别在O，2,4,6,8小时注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定峰面积，测得丹酚酸B峰面积RSD为0.99%，表明供试品溶液在8小时内稳定。2.7重复性实验精密吸取2.2.2项下样品溶液20μ 1，注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定峰面积，重复进样6次，测得丹酚酸B峰面积RSD为1.09%，表明仪器精密度良好。2.8回收率实验:精密称取已知含量的本品9份，每份0.5g，分成3组，每组3份，分别紧密添加丹酚酸B对照溶液适量，按照2.2.2项下方法制备供试品溶液，按照上述色谱条件测定峰面积，计算回收率，回收率为99.05%, RSD=0.69%。实验结果表明本品具有良好的回收率。2.9样品含量测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪中，测定，即得。本品每Ig含丹酚酸B (C36H3tlO16)不得少于8.6mg。本发明的优点是采用高效液相色谱法对丹酚酸B的鉴别及含量进行检测，方法更科学，检测手段更先进，定性定量更准确，不仅可以更好更全面的反映赶黄祛斑胶囊的有效成分，而且还可以杜绝采用其他药材代替赶黄草投料生产的情况，从而保证该药品的质量，保证人民用药安全有效。本发明的另一优点是，通过对丹酚酸B的鉴别和含量检测，可以在胶囊填充之前就进行质量控制，以便生产出质量合格的产品，同时，也可以为市售的流通产品提供一种科学合理的检测方法，以便从生产和流通领域控制产品质量。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明技术方案仅限于以下实施例。实施例1 丹酚酸B的鉴别
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-甲酸-水(23:10:1:66)为流动相；检测波长为286nm ;理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。精密称取丹酚酸B对照品适量，用75%甲醇溶液制成每Iml中含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。取本品内容物粉末约0.5g，精密称定，置于锥形瓶内，加入50ml甲醇:水v/v=75:25的溶液，精密称重后，超声提取30分钟，取出，放冷，再精密称定并采用甲醇:水v/v=75:25的溶液补足失去的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪中，检测，供试品色谱中应存在与对照品色谱峰保留时间相一致的色谱峰。实施例2 丹酚酸B的含量测定
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-甲酸-水(23:10:1:66)为流动相；检测波长为286nm ;理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。精密称取丹酚酸B对照品适量，加75%甲醇溶液制成每Iml中含0.1mg的溶液，作为对照品溶液液。取本品内容物粉末0.5g，精密称定，置于锥形瓶内，加入50ml甲醇:水v/v=75:25的溶液，精密称定后，超声提取30分钟，取出，放冷，再精密称定并采用甲醇:水v/v=75:25的溶液补足失去的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪中，测定即得。
权利要求
1.赶黄祛斑胶囊中丹酚酸B的质量检测方法，其特征在于:以丹酚酸B为对照品，以甲醇、乙腈、甲酸和水的混合物为流动相，甲醇:乙腈:甲酸:水v/v/v/v =23:10:1:66，用高效液相色谱法进行鉴别和含量检测。
2.根据权利要求1所述的赶黄祛斑胶囊中丹酚酸B的质量检测方法，其特征在于:所述高效液相色谱的条件为:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比23:10:1:66的甲醇-乙腈-甲酸-水为流动相，检测波长为286nm，理论板数按丹酚酸B峰计算不低于2000。
3.根据权利要求1所述的赶黄祛斑胶囊中丹酚酸B的质量检测方法，其特征在于:所述鉴别检测的具体方法如下: A对照品溶液的制备:精密称取丹酚酸B对照品适量，用75%甲醇溶液制成每Iml中含0.1mg的对照品溶液； B供试品溶液的制备:精密称定赶黄祛斑胶囊内容物0.5g，置于锥形瓶内，加入甲醇:水v/v=75:25的溶液50ml，精密称定后，超声提取30分钟，取出，放冷，再精密称定并采用甲醇:水v/v=75:25的溶液补足失去的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液； C液相色谱测定色谱峰:分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪中，检测出供试品色谱中与对照品色谱峰保留时间相一致的色谱峰。
4.根据权利要求1所述的赶黄祛斑胶囊中丹酚酸B的质量检测方法，其特征在于:所述含量检测的具体步骤如下: A对照品溶液的制备:精密称取丹酚酸B对照品适量，用75%甲醇溶液制成每Iml中含.0.1mg的对照品溶液； B供试品溶液的制备:精密称定赶黄祛斑胶囊内容物0.5g，置于锥形瓶内，加入甲醇:水v/v=75:25的溶液50ml，精密称定后，超声提取30分钟，取出，放冷，再精密称定并采用甲醇:水v/v=75:25的溶液补足失去的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液； C液相色谱测定含量:分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪中，测定，即得。
全文摘要
本发明公开了一种赶黄祛斑胶囊中丹酚酸B的质量检测方法，属于药品质量控制技术领域。本发明是以丹酚酸B为对照品，赶黄祛斑胶囊内容物为供试品，通过高效液相色谱法进行的鉴别和含量检测。高效液相色谱条件为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-甲酸-水(2310166)为流动相，检测波长为286nm；理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。本发明采用高效液相色谱法对丹酚酸B进行鉴别和含量检测，方法更科学，检测手段更先进，定性定量更准确，不仅可以更好更全面的反映赶黄祛斑胶囊的有效成分，而且还可以杜绝采用其他药材代替丹参投料生产的情况，从而确保了该药品的质量，保证了用药的安全有效。
文档编号G01N30/02GK103115975SQ20131002934
公开日2013年5月22日 申请日期2013年1月25日 优先权日2013年1月25日
发明者张玲, 张熠, 赵力科 申请人:成都力思特药物研究有限公司