专利名称：用于艾滋病的皮肤试验和试验用具箱的制作方法
1型人体免疫缺乏病毒(HIV-1)是一种还原病毒，此种病毒能引起全身性感染，而其主要症状是在免疫系统。HIV-1的各种临床隔离种群也称为LAV(伴随淋巴细胞病毒)(Lymphadenopathy-associatedvirus)、HTLV-Ⅲ(Ⅲ型人体T-细胞亲淋巴性病毒)(humanT-cellLymphotropicvirustypeⅢ)或ARV(伴随艾滋病还原病毒)(AIDS-associatedretrovirus)。HIV-1的感染引起获得性免疫缺乏综合症(艾滋病)。对于这种病没有特效治疗方法。到目前为止，这种病一般是致命的，而且也没有文献记载有缓解的病例。
感染了HIV-1的人会逐渐丧失免疫功能，这主要是由于T4淋巴细胞的损失造成的。T4淋巴细胞在识别抗原和继而调整体液和细胞的免疫反应方面起着极重要的作用，其功能如助细胞/诱导物细胞所定义。患有早期艾滋病的人会变得完全丧失变应性，这包括丧失对强有力的促细胞分裂剂(mitogen)的反应能力。
T4淋巴细胞也叫CD4细胞，这是由于在T4淋巴细胞的表面存在CD4分子的缘故。人们认为这种分子是HIV-1进入T4细胞的受体。在表面上带有这种分子的神经细胞也受到HIV-1的感染。
艾滋病的潜伏期是极长的。感染HIV-1并出现临床症状后，还可以过许多年才发病。人们估计从接触到艾滋病毒到血清转化之间的时间就其典型的情况而言是6至8周，但这段时间的长短可能有很大差别。已有报导，某些人在感染HIV-1后可保持血清反应阴性达数月之久。
感染了HIV-1的临床症状包括偶然的感染、各种恶性的及神经病学方面的并发症。在这组临床症状中，偶然的感染是最常见的。这种偶然的感染将最终导致艾滋病，并且是艾滋病患者最常见的死因。在这些感染中，最主要的包括卡氏肺囊虫肺炎、弓形体病、结核病、由单一的疱疹、带状疱疹及巨细胞病毒造成的病毒感染、囊球菌病(特别是脑膜炎)、口腔和食道含珠菌病以及隐性孢子虫病。
本发明的一个目的是提供一种简单的试验，该试验能有效地确定一个人是否感染了HIV-1或艾滋病。
本发明的另一个目的是提供一种花费不多的皮肤试验，该试验能有效地用来确定一个人是否感染了艾滋病，而且可相当快地得到试验结果。
本发明还有另一个目的就是提供一种人体试验，该试验用以确定一个人是否感染了艾滋病，该试验的副作用既使有也很小。
借助于本申请所公开的内容就可以清楚地了解本发明的这些目的和其他的目的是如何实现的。
本发明在实施时采用了免疫艾滋病毒被膜蛋白质物质，以确定一个人是否受到了艾滋病的感染，这是通过在一个人的皮肤内施用所述药物并观察施药或注射部位的免疫反应(例如，在施药或注射部位特有的发红或肿胀)来实现的。对上述施药或注射部位的免疫反应的观察结果表明那个人受到了HIV-1或艾滋病的感染。
在实施本发明的时候，最好是从合成的或按遗传学原理设计的、在昆虫细胞中产生的HIV-1被膜蛋白质中衍生出所述免疫艾滋病病毒被膜蛋白质物质。一种包含有HIV-1被膜基因部分的杆状病毒表达载体(baculovirusexpressionvector)被有效地用来改组人工培养的昆虫细胞的结构顺序以制备合成的HIV-1被膜蛋白质。合成的gp160抗原(HIV-1gp160)是一种醣蛋白，其分子量约为160，000。与本申请一起正在接受审查的并一起被转让的美国专利(申请号920197、申请日为1986年10月16日)公开了一种按遗传学原理设计的重组体免疫艾滋病病毒被膜蛋白质的制备方法。该专利申请的相应的欧洲专利申请已于1988年5月4日公开，其EP专利申请公开号0265785。上述专利申请所公开的内容被本申请所引用并成为本申请公开内容的一部分。
在暴露于上述重组体杆状病毒载体后，从鳞翅昆虫(Lepidopteran)的人工培养物(昆虫细胞)中获取上述HIV被膜蛋白质并加以提纯。然后再将上述蛋白质加以提纯，以使最后得到的被提纯的蛋白质产物或制品所含昆虫杆状病毒的蛋白质不多于5%，而且不含人体血液或血液制品。
从感染了HIV-1病毒的人体T细胞分离出的免疫艾滋病或HIV-1病毒被膜蛋白质物质也是有用的。但目前在本发明的实施中最好不用这样的蛋白质物质。关于用已感染HIV-1的T细胞制备这种免疫物质，参见1988年2月16日授权的美国专利4，725，609，这篇美国专利所公开的内容被本申请所引用并成为本申请公开内容的一部分。
在实施本发明时，在一种延迟类型的过敏性(DTH)皮肤试验中或在检查接受该试验的人是否已感染艾滋病或HIV-1的过程中，使用上述免疫艾滋病病毒被膜蛋白质物质是很有效的。
DTH皮肤试验已用于鉴定由于传染病和恶性疾病而被怀疑有免疫缺陷的人们的免疫系统的细胞臂。DTH皮肤试验也已被用于予测癌症病人和外科病人的发病。然而，对于感染艾滋病的DTH皮肤试验，还没有用过免疫艾滋病病毒被膜蛋白质物质。按照本发明，在DTH皮肤试验中，使用免疫艾滋病病毒被膜蛋白质物质，这一点被用来帮助确定HIV-1特殊的细胞免疫学的反应，而且，对感染艾滋病或HIV-1的人，在皮内施用这种物质应该产生一种特有的DTH反应(局部发红或硬结)，这是由于特殊的淋巴细胞活素及单核细胞在被注射部位的浸润作用造成的。尽管按照本发明的皮肤试验的施药量并不打算施加到能产生免疫的剂量，但在本发明中施用上述免疫艾滋病病毒被膜蛋白质物质，特别是gp160蛋白质，对于所有艾滋病或HIV-1被膜抗原都可以产生血清转化。
对于感染艾滋病或HIV-1的人们，在临床处置(Staging)及疾病的予后中，本发明的实施也是很有帮助的。如已指出的那样，在本发明的皮肤试验中，并不打算使施药量达到能产生免疫的剂量。然而，这个试验的施药可能导致一种免疫激发剂的接种。但是，应该注意因为艾滋病或HIV-1的潜伏期长，在进行上述试验，例如在进行gp160蛋白质的皮内施药时，有可能存在未被发现的HIV-1的感染。
在实施本发明时，对于HIV-1血清反应阳性的人们，应该避免进行免疫艾滋病病毒被膜蛋白质物质的皮下施药。然而，应该注意，当对试验呈阳性的人们进行结核病毒的皮下注入时，一般不出现反应，但对高度敏感的个别人，可能出现普通的发热反应或在旧结核病的病灶周围的急性炎症。此外，应该小心，按照本发明紧接皮肤试验的施药之后，对于抗艾滋病或HIV-1被膜蛋白质的抗体，血清反应呈阴性的人们可变为血清反应阳性。
按照本发明，使用一套注射器和针头在皮内注射0.1mlgp160溶液，这样来进行上述艾滋病或HIV-1病毒感染试验，并且通过测量红斑和硬结的最大范围，或通过活组织检查等其它试验，来研究上述试验的结果。具体来说，本发明的免疫艾滋病病毒被膜蛋白质物质的施药，按下述详细步骤来进行1、上述被试验的部位通常是在前臂的屈肌或背侧表面位于肘下约4″的部位。也可用其它皮肤部位。但最好用上述前臂的屈肌表面。
2、用70%的洒精清洗上述注射部位处的皮肤并使其干燥。
3、上述试验物质用一个结核病素注射器(0.5ml或1.0ml)来注入;该注射器装有一个短的(1/2″)26或27号规格的针头。
4、上述注射器和针头应是经过消毒处理的，并且应是一次性使用类型的。对每个被试验的人，应该单独使用一套消毒器械。
5、所用小药瓶塞子的膜片应该用70%的酒精擦洗。
6、上述针头穿过上述倒置的小药瓶的塞子的膜片插进该小药瓶。用上述注射器严格地抽取0.1ml药品，并且要小心操作，不使该注射器中含有气泡，并且要保持所述针头的腔被充满。
7、将所述针尖刺入皮肤的最表层，并且要使所述针的斜面指向上方。当该溶液被注射入皮肤时，在针刺点的上部将起一个水泡，直径可达6-10mm(大约为1/4″到1/2″)。这个泡很快被吸收，通常无需包扎。
在上述注射是出现针头刺入皮下的情况(即不起泡)，或者如果注射剂量的相当多一部分从所注射部位流出，那么，应立即在至少5cm(2″)远的另一部位重新作该试验。在2℃-8℃温度下，上述试验用蛋白质物质可储存长达3个月，就象储存任何胃肠外药物制品一样，在施药前，应该用肉眼检查上述试验用物质是否含有粒子状物质以及是否变色。
对每个患者，重要的是独自使用一套消毒注射器及针头，以防止HIV、肝炎血清病毒和其它感染媒介物从一个人传到另一个人。在使用注射器的场合，用不含防腐剂，消毒剂和去污剂的消毒针头和注射器从所述小药瓶中吸取所推荐剂量的药品。
应该在进行上述注射后48至72小时的时间内，按照指定的追加次数，采用标准技术来测量记录上述DTH反应。我们建议用一支圆珠笔勾划出标记红斑及硬结最大范围边界，然后将该边界的轮廓线按其尺寸转画到纸带上。应该取该轮廓线的相互垂直的两条直径之和的一半作为上述反应的尺寸。可认为大于5mm(标准判据)的反应是阳性的。上述红斑及硬结的一条直径应该沿与前臂长轴垂直的横向来测量。也可以另外增加一些试验，例如对单核细胞浸润的活组织的检查和组织的检查。
应该注意，对上述抗原物质(例如gp160)的反应性可能会受到非HIV病毒感染、活病毒疫苗(即麻疹、天花、脊髓灰质炎、风疹和流行性腮腺炎)或者施用皮质类固醇的非特定的抑制，而且营养不良也可能有类似的影响。
提供免疫艾滋病病毒被膜蛋白质物质，例如gp160，最好使用一种2ml的装有多剂量上述物质的小药瓶，每个小药瓶装有1.1ml抗原制品。由于上述试验物质不含防腐剂，因而应该在打开上述密封容器后的24小时内使用所述试验物质。上述各个密封容器或小药瓶最好在2°-8℃下储存。如已指出的那样，未使用的药品在开盖后24小时就失效了，在高于或低于上述所推荐的温度下储存可能会使其效能降低，而且不应该使所述抗原物质或其溶液结冰，因为结冰会破坏其性能。
提供上述各种免疫艾滋病病毒被膜蛋白质试验物质最好采用用具箱的形式。该用具箱包括一个或多个2.0ml的小药瓶，还包括许多套经过消毒的注射器和针头，所述经过消毒的注射器和针头的套数足够按每次0.1ml的剂量从2ml的小药瓶中抽取瓶中全部剂量药品之用，例如每个2ml的抗原溶液小药瓶配备10套注射器和针头。
如上面所指出的那样，在本发明的实施中，最好采用gp160抗原物质，正象前面所述相关的申请号为920，197的美国专利所说明的那样，gp160抗原物质最好用上述艾滋病病毒被膜基因来表达(expressedfrom)并从其中衍生出来，而该艾滋病病毒被膜基因又是通过一种昆虫细胞中的杆状病毒表达的(expressedthrough)。除了gp160或gp24之外，在本发明的实施中被有效地采用的艾滋病病毒被膜蛋白质物质的其他免疫成分还包括gp120蛋白质、gp40蛋白质和这些蛋白质的以及所述被膜蛋白质的其他免疫成分。
在参考了上述说明之后，在本发明的实施中，本领域普通专业人员能很容易地做出许多修改、更替和代换，而不会偏离本发明的精神和范围。
权利要求
1.一种用于皮内施药以检查艾滋病感染的试验用具箱，包括一个密封容器，该密封容器装有一种不含防腐剂的含水溶液或者装有一种免疫艾滋病病毒蛋白质成分，所述试验用具箱至少装有一套经过消毒处理的注射器和针头。
2.如权利要求1所述的试验用具箱，还装有浓度至少为70%的乙醇溶液，在进行所述艾滋病免疫病毒蛋白质物质的皮内注射前用来清洗皮肤。
全文摘要
一种用于检验人体感染艾滋病病毒的方法，该方法包括在一个人的皮内注入一有效剂量的免疫艾滋病病毒被膜蛋白质，随后观察注射部位的免疫反应，例如特有的发红或肿胀。
文档编号G01N33/569GK1043081SQ89109558
公开日1990年6月20日 申请日期1989年11月21日 优先权日1988年11月21日
发明者弗兰克林·沃尔沃维兹 申请人:微基因系统公司