专利名称：一种苯并芘快速检测卡的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种苯并芘快速检测卡，是一种检测苯并芘的检测器具，属于食品检 测技术领域。
背景技术：
苯并芘(3，4-Benzopyrene，benzo [a]pyrene)又称 3，4 苯并芘，是由 5 个苯环构 成的多环芳烃，是1933年第一次由浙青中分离出来的一种致癌烃。其在常温下为浅黄色晶 状固体，熔点179°C，沸点312°C，难溶于水，易溶于苯、甲苯、丙酮、乙烷等有机溶剂，碱性情 况下稳定，遇酸易起化学变化，性质较为稳定，在大气中的化学半衰期在有日光照射下少于 1天，没有日光照射时要数天。水体表层中的3，4苯并芘在强烈照射下半衰期为几小时至 十几小时，土壤中3，4苯并芘的降解速度8天约为53% 82%。3,4苯并芘在环境中广泛存 在，且与其他多环芳烃化合物的含量有一定相关性，所以3，4-苯并芘经常被视作大气致病 物质的代表。苯并芘已公认为一种常见的高活性间接致癌物。3，4_苯并芘释放到大气中以后， 总是和大气中各种类型微粒所形成的气溶胶结合在一起，直径8微米以下的苯并芘粒子可 吸附在尘粒中，吸入肺部的比率较高。携带苯并芘的尘粒经呼吸道进入肺部、肺泡甚至血 液，导致肺癌和心血管疾病。随着城市大气污染的增加，呼吸道癌症发病率、肺癌死亡率显 著增加。3，4苯并芘是一种强的环境致癌物，可诱发皮肤、肺和消化道癌症，是环境污染主要 监测项目之一。食物中苯并芘超标，主要有几种来源一是环境污染，在水体、土壤和作物中苯并 芘都容易残留。苯并芘存在于煤焦油、各类炭黑和煤、石油等燃烧产生的烟气、香烟烟雾、汽 车尾气，以及焦化、炼油、浙青、塑料等工业污水中；二是食品加工过程，煎烤或烟熏的牛肉、 鱼表面切下的焦痂物质有很强的致突变性。在煎烤如牛、猪、羊、鸡、鱼、蛋等动物蛋白及加 工完毕的咸肉、火腿中都能检出苯并芘等多环芳烃类化合物。三是植物油提炼过程，反复高 温加热烘烤蒸炒茶饼容易产生苯并芘。农户在加工茶饼的时候，会对茶籽反复烘烤、蒸炒， 如温度控制不好，很容易烧焦并生成苯并芘，残留在茶籽的外壳上。而压榨后苯并芘就全部 残留在茶饼中，在萃取茶饼中的残油时，残留的苯并芘也被大量萃取出来，通过高温又与溶 剂油发生化学反应，最终导致浸出后毛茶油苯并芘含量不断提高。许多国家已经规定了相应的苯并芘膳食摄入量和食品的限量标准。按照中国国家 GB2716-2005《食用植物油卫生标准》要求，在食用植物油类产品中苯并芘的安全限量为不 超过10微克/千克。因此，拟发明一种基于蛋白质抗原性的免疫学检测方法，采取免疫学竞争法的原 理，结合胶体金标记技术和免疫层析法设计的一种快速检测试剂，可快速特异检测食品样 品中的苯并芘。根据检测卡样品检测带(10)和质检带(11)的有无显色来判定样品中的苯 并芘含量。检测卡操作简单快速，无需特殊的仪器设备，既可以在实验室进行，也可在超市、 家庭、车间等实地进行测定。由于样品量需要少、测试简便快速，适用于大量样品的筛查。结果准确，检测灵敏度为2微克/千克，准确率大于95%。

发明内容
本发明的目的在于提供一种能检测苯并芘的检测器具，应用免疫学的方法直接检 测食用油、油炸食品样品中苯并芘的含量。本发明的技术方案一种苯并芘快速检测卡，在长条扁平薄壳状的检测卡外壳 (1)中设置测试条(2)，检测卡外壳表面有检测窗孔(3)和加样孔(4);测试条(2)是由支承 背板(5)上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫(8)、胶体金膜(7)、硝酸纤维素膜(6)、和吸 水膜(9)所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜(6)，支承背板一端叠置粘贴吸水膜，另一端叠置粘贴样品垫(8)，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接， 在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜(7);胶体金膜为含抗 苯并芘抗体胶体金标记的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次 是含苯并芘蛋白偶联物的检测带(10)，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带(11)，测试条置 入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。所述苯并芘快速检测卡的检测方法，应用免疫学的方法直接检测样品中苯并芘的 含量，检测样品为食用油、油炸食品样品，对于各种不同的检测样品用不同的处理方法；
食用油样品的处理方法称取ImL食用油样品，加入ImL样品抽提液，在试管中搅拌均 勻，再用样品稀释液稀释至2倍体积滴入加样孔后用于检测；
油炸食品样品的处理方法取Ig捣碎后的油炸食品样品，加入2mL样品抽提液，在试管 中搅拌均勻，再用样品稀释液稀释至2倍体积滴入加样孔后用于检测；
所述样品抽提液为PH 7. 6、含体积分数50%的丙酮和IOmmol PBST缓冲液的混合溶
液；
所述样品稀释液为PH 7. 6、含IOmmol PBST缓冲液的溶液；
所述检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹带，检测结果为阴性，表示被检测样品 中苯并芘含量未超标；
所述检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表 示被检测样品中苯并芘含量超标；
所述检测带10和质控带11均不显色，则表明测试条已失效。所述标准为样品中苯并芘含量低于10微克/千克。本发明的优点是能检测食用油、油炸食品等样品中含有的苯并芘，易于制备且节 省检测费用，使用方便，检测快速，灵敏度高，结果准确。


图1苯并芘快速检测卡外壳及测试条在外壳内的安置图。1、检测卡外壳，2、测试 条，3、检测窗孔，4、加样孔。图2测试条的硝酸纤维素膜上显示印迹示意图。6、硝酸纤维素膜，10、检测带，11、 质控带。图3苯并芘快速检测卡的测试条结构示意图。5、支承背板，6、硝酸纤维素膜，7、胶 体金膜，8、样品垫，9、吸水膜。
具体实施例方式本发明结合具体实施例参见附图进一步说明如下 实施例1
一种苯并芘快速检测卡，它是在检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳1的结构及 测试条2的设置参见图1，检测卡外壳1为长条扁平薄壳状外壳，长70mm，宽20mm，厚5mm， 薄壳壁厚1mm，由工程塑料制成。检测卡外壳1由壳盖与壳座两半联接构成，在检测卡外壳 1壳盖上有检测窗孔3和加样孔4。测试条2放置在检测卡外壳1的壳座内。测试条2是多层结构的窄条薄片，片长约60mm，片宽约4mm，厚度约2. 5mm。测试 条2是多层结构底层是支承背板5，为聚氯乙烯塑料薄片，厚约0. 5mm,长60mm，宽4mm ；支 承背板5中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，硝酸纤维素膜厚0. 5mm,长20_25mm，宽4mm。硝酸 纤维素膜6上有二条间隔开的横向显示印迹带，参见图2，二条显示印迹带中，一条是检测 带10，含苯并芘蛋白偶联物；另一条是质孔带11，含抗兔抗体或抗鼠抗体。支承背板5—端 部上叠置粘贴吸水膜9，支承背板5另一端部上叠置粘贴样品垫8 ；吸水膜9内端与样品垫 8内端各自分别与硝酸纤维素膜6 —端搭接，在样品垫8与硝酸纤维素膜6的搭接部，两者 之间夹置粘贴一段胶体金膜7，胶体金膜7是含抗苯并芘单克隆抗体或多克隆抗体胶体金 标记物的玻璃纤维膜。胶体金膜7厚0. 5-0. 8mm,长5_，宽4_。样品垫8厚0. 5-0. 8mm, 长20_，宽4_。吸水膜9厚0. 5-0. 8mm,长16-20_，宽4_。胶体金膜7、样品垫8及吸水 膜9与硝酸纤维素膜搭接长度为l_2mm。吸水膜9材料是吸水纸，样品垫8材料是吸水玻璃 纤维膜。本发明苯并芘检测卡用于检测食用油和油炸食品等样品中的苯并芘的检测。实施例2
样品的处理方法是
针对食用油样品的处理方法是称取ImL食用油样品，加入ImL样品抽提液(pH 7.6、 含体积分数50%丙酮和lOmmolPBST的混合溶液)，在试管中搅拌均勻，再用样品稀释液 (pH7. 6、含lOmmolPBST的溶液)稀释至2倍体积后用于检测；
针对油炸食品样品的处理方法是取Ig捣碎后的油炸食品样品，加入2mL样品抽提液 CpH 7. 6、含体积分数50%丙酮和lOmmolPBST的混合溶液)，在试管中搅拌均勻，再用样品稀 释液(pH7. 6、含lOmmolPBST的溶液)稀释至2倍体积后用于检测；
使用苯并芘快速检测卡进行检测时，先将待检测的样品液从加样孔4中滴注入苯并芘 快速检测卡测试条2的样品垫8上，由于虹吸作用原理，带动待检测的样品液及胶体金膜7 所含的抗苯并芘单克隆抗体或多克隆抗体胶体金标记物一起向硝酸纤维素膜6扩散，5-10 分钟后观察结果。检测卡的主要反应是免疫学的抗原和抗体反应，在硝酸纤维素膜上迁移的胶体金 标记的抗体，在测试带上分别与含苯并芘，以及在质控带上与抗兔抗体或抗鼠抗体反应，形 成棕红色条带。若样品中有待检苯并芘存在超标，当样品加入后即与抗体发生反应，而不会 与检测带所含的苯并芘反应，从而检测带不显色。主要反应的结果有以下3种情况
1、当显示检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹带，表示检测结果为阴性，说明被 检测样品中苯并芘含量未超标(< 10微克/千克)。
5
2、当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，说 明被检测样品中苯并芘含量超标10微克/千克)。3、当检测带10和质控带12均不显色，则表明检测试条已失效。
权利要求
一种苯并芘快速检测卡，其特征在于在长条扁平薄壳状的检测卡外壳(1)中设置测试条(2)，检测卡外壳表面有检测窗孔(3)和加样孔(4)；测试条(2)是由支承背板(5)上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫(8)、胶体金膜(7)、硝酸纤维素膜(6)、和吸水膜(9)所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜(6)，支承背板一端叠置粘贴吸水膜(9)，另一端叠置粘贴样品垫(8)，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜(7)；胶体金膜为含抗苯并芘抗体胶体金标记的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是含苯并芘蛋白偶联物的检测带(10)，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带(11)，测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。
2.权利要求1所述苯并芘快速检测卡的检测方法，其特征在于应用免疫学的方法直 接检测样品中苯并芘的含量，检测样品为食用油、油炸食品样品，对于各种不同的检测样品 用不同的处理方法；食用油样品的处理方法称取ImL食用油样品，加入ImL样品抽提液，在试管中搅拌均 勻，再用样品稀释液稀释至2倍体积滴入加样孔后用于检测；油炸食品样品的处理方法取Ig捣碎后的油炸食品样品，加入2mL样品抽提液，在试管 中搅拌均勻，再用样品稀释液稀释至2倍体积滴入加样孔后用于检测；所述样品抽提液为PH 7. 6、含体积分数50%的丙酮和IOmmol PBST缓冲液的混合溶液；所述样品稀释液为PH 7. 6、含IOmmol PBST缓冲液的溶液；所述检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹带，检测结果为阴性，表示被检测样品 中苯并芘含量未超标；所述检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表示被 检测样品中苯并芘含量超标；所述检测带10和质控带11均不显色，则表明测试条已失效； 所述标准为样品中苯并芘含量低于10微克/千克。
全文摘要
一种苯并芘快速检测卡，属于食品检测技术领域。本发明苯并芘快速检测卡外壳内有测试条，由测试条支承背板上依次粘贴样品垫、胶体金膜、硝酸纤维素膜和吸水膜所组成；胶体金膜为含抗苯并芘抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有两条显示印迹带，一条为含苯并芘蛋白偶联物的检测带，另一条为含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带。本发明优点是应用免疫学的方法直接检测食用油、油炸食品等标本中苯并芘的含量。本发明苯并芘快速检测卡易于制备，使用方便快速，结果准确。
文档编号G01N33/558GK101957374SQ201010284519
公开日2011年1月26日 申请日期2010年9月17日 优先权日2010年9月17日
发明者周坚 申请人:无锡安迪生物工程有限公司