专利名称：白细胞的分析方法及其使用的分析试剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种白细胞的分析方法及其使用的分析试剂。
背景技术：
医疗诊断中通常进行血液分析。所述血液分析的分析项目中，有白细胞、红细 胞、血红蛋白浓度、血细胞比容值等。可以由这些分析对象的数目、浓度、比率等诊断 例如红细胞增多症、贫血等血液疾病、感染症等疾病。其中，白细胞的数目、比率是感 染症等疾病诊断中的重要指标。因此，以提高血液中白细胞的分类以及计数的精度为目 的，开发了各种分析方法。作为所述白细胞的分析方法，提出了使溶解剂与白细胞以及 红细胞反应的方法(例如专利文献1)等。另一方面，近年来在医疗诊断中的生物试样的分析等中，正在研究微全化学分 析系统(Micro Total Analysis System,以下称为“ μ TAS”)。所述μ TAS是一种将微
小的流路、泵、阀、传感器等集成到硅等基板上的化学分析系统，具有试样的少量化、 测定用测试盒(Catridge)的一次性化、装置的小型化等优点。所述白细胞是集体体检等 中的分析项目，因此期望开发使用所述μ TAS的分析方法，但由于所述μ TAS为微全系 统，因而试样的稀释率变低，并且分析时的流速变慢。现有的白细胞的分析方法中，试 样的稀释率低时，所述试样中的红细胞有可能影响白细胞与分析试剂的反应，根据红细 胞含有率(血细胞比容值等)，所述白细胞的测定结果有时产生变化。因此不能稳定地分 析。另外，所述分析时的流速慢时，则由于可以测定的白细胞数少，分析精度变低。因 此，为提高分析精度，需要延长测定时间以增加总流量。然而，在现有的白细胞的分析 方法中，若如上所述延长测定时间，则所述白细胞与所述分析试剂的反应在测定时间内 进行，不能稳定地分析。现有技术文献专利文献专利文献1:日本专利第3143064号公报

发明内容
发明要解决的问题因此，本发明的目的为提供一种白细胞的分析方法及其使用的分析试剂，所述 分析方法例如即使在所述包含白细胞以及红细胞的试样的稀释率低的情况下，或者在分 析时的流速慢的情况下，也可以稳定地进行白细胞的分类以及计数。用于解决问题的方案为达成所述目的，本发明的分析方法，其特征在于，其是包括如下工序的白细 胞的分析方法混合工序，将包含白细胞和红细胞的试样以及包含与白细胞反应的表面 活性剂的分析试剂混合；以及测定工序，使所述试样与所述分析试剂的混合液通过微 孔，测定在所述通过时检出的信号，对所述试样中的白细胞进行分类以及计数；所述分
4析试剂进一步包含非离子表面活性剂，所述非离子表面活性剂具有作为亲水部的糖残基 和作为疏水部的脂肪链。本发明的分析试剂，其特征在于，其是用于本发明的分析方法的、包含与白细 胞反应的表面活性剂的分析试剂，其进一步包含非离子表面活性剂，所述非离子表面活 性剂具有作为亲水部的糖残基和作为疏水部的脂肪链。发明效果利用本发明，例如，即使在包含白细胞以及红细胞的试样的稀释率低的情况 下，也可以抑制红细胞对白细胞与分析试剂反应的影响，稳定地分析白细胞。另外，利 用本发明，例如，即使在分析时的流速慢的情况下，由于分析试剂对白细胞的反应缓慢 发生，因此也可以延长设定测定时间，可以在分析中获得充分的流量，可以稳定地进行 分析。进一步，本发明由于可以用于μ TAS，因而，例如试样的少量化、一次性测试盒 的利用、分析装置的小型化成为可能。


图1之(A)为表示本发明的分析方法中使用的测试盒的一个实施方式的平面图。 图1之(B)为图1之(A)中表示的测试盒的透视图。图2是表示本发明的分析方法中使用的白细胞分析装置的一个实施方式的截面 图。图3之(A)为表示本发明的一例中反应时间为30秒时白细胞的粒度分布的直方 图。图3之(B)为表示本发明的一例中反应时间为60秒时白细胞的粒度分布的直方图。 图3之(C)为表示本发明的一例中反应时间为30秒以及60秒时白细胞的粒度分布的直方 图。图4之(A)为表示本发明的另外一例中反应时间为30秒时白细胞的粒度分布的 直方图。图4之(B)为表示本发明的另外一例中反应时间为60秒时白细胞的粒度分布的 直方图。图4之(C)为表示本发明的另外一例中反应时间为30秒以及60秒时白细胞的 粒度分布的直方图。图5之(A)为表示比较例中反应时间为30秒时白细胞的粒度分布的直方图。图 5之(B)为表示比较例中反应时间为60秒时白细胞的粒度分布的直方图。图5之(C)为 表示比较例中反应时间为30秒以及60秒时白细胞的粒度分布的直方图。图6之(A)为表示另外的比较例中反应时间为30秒时白细胞的粒度分布的直方 图。图6之(B)为表示另外的比较例中反应时间为60秒时白细胞的粒度分布的直方图。 图6之(C)为表示另外的比较例中反应时间为30秒以及60秒时白细胞的粒度分布的直方 图。图7为表示本发明的分析方法中使用的白细胞分析装置的另一实施方式的截面 图。图8为本发明的分析方法中使用的白细胞分析装置的微孔部分的其它例子的截 面图。图9之(A) (C)为表示通过使用比较例的各种分析试剂进行分析而得到的白细 胞的粒度分布的直方图。图9之(A)为表示使用基本试剂的分析结果的直方图，图9之(B)为表示使用添加有月桂基三甲基氯化铵的分析试剂的分析结果的直方图，图9之(C) 为表示使用添加有聚氧乙烯月桂基醚的分析试剂的分析结果的直方图。图10之(A) (D)为表示通过使用本发明的各种分析试剂进行分析而得到的白 细胞的粒度分布的直方图。图10之(A)为表示使用添加有蔗糖月桂酸酯的分析试剂的 分析结果的直方图，图10之(B)为表示使用添加有蔗糖单月桂酸酯的分析试剂的分析结 果的直方图，图10之(C)为表示使用添加有蔗糖单癸酸酯的分析试剂的分析结果的直方 图，图10之(D)为表示使用添加有十二烷基麦芽糖苷的分析试剂的分析结果的直方图。图11之(A) (F)为表示通过使用添加了规定浓度蔗糖月桂酸酯的各种分析试 剂进行分析而得到的白细胞的粒度分布的直方图。图11之(A)为表示使用添加0w/v% 的分析试剂(无添加)的分析结果的直方图，图11之(B)为表示使用添加0.0125w/v% 的分析试剂的分析结果的直方图，图11之(C)为表示使用添加0.025w/V%的分析试剂的 分析结果的直方图，图11之(D)为表示使用添加0.05w/V%的分析试剂的分析结果的直 方图，图11之(E)为表示使用添加0.1w/V%的分析试剂的分析结果的直方图，图11之 (F)为表示使用添加0.2w/V%的分析试剂的分析结果的直方图。附图标记说明1 测试盒；2 上基板；3 下基板；4 试样计量部；41 试样导入部； 42:试样导入流路；43:分支部；44:溢出流路；45、55、58、65:排液部；46: 试样计量流路；47 节流孔；5 稀释部；51 试剂槽；52 试剂导入流路；53 :分 支部；54:溢出流路；56:试剂计量流路；57:锥形部；59:稀释槽；6:分析部； 61、62:电极、电极配置部；14、63、84微孔；64:流量测量流路；7:连接器； 8、88:白细胞分析装置；9:主槽；10:副槽；11:抽吸部；12、13:电极；15:定 量部；16 :基板部；17 搅拌槽；18 搅拌管；19 抽吸管；21a、21b 贯通孔、导 入口； 22a、22b、22c、22d、22e 贯通孔；90:主槽部；100:副槽部；160:搅拌 部；91a、91b、101a、101b、161a、161b 基板；840 弹性体；
具体实施例方式本发明的分析方法中，所述非离子表面活性剂优选所述糖残基是二糖的残基。本发明的分析方法中，所述非离子表面活性剂优选所述脂肪链是脂肪酸残基或焼基。本发明的分析方法中，优选所述非离子表面活性剂为选自由蔗糖单月桂酸酯、 蔗糖月桂酸酯、蔗糖单癸酸酯以及十二烷基麦芽糖苷组成的组中的至少一种。本发明的分析方法中，优选所述非离子表面活性剂为蔗糖单月桂酸酯或蔗糖月 桂酸酯。本发明的分析方法中，优选所述试样与所述分析试剂的所述混合液中的所述非 离子表面活性剂的浓度为0.001 范围。本发明的分析方法中，优选所述与白细胞反应的表面活性剂为季铵盐。本发明的分析方法中，优选所述试样与所述分析试剂的所述混合液中的、所述 与白细胞反应的表面活性剂的浓度为0.01 范围。本发明的分析方法中，优选所述分析试剂进一步包含与红细胞反应的表面活性剂。本发明的分析方法中，优选所述与红细胞反应的表面活性剂为皂角苷。本发明的分析方法中，优选所述试样与所述分析试剂的所述混合液中的所述皂 角苷的浓度为0.05 5*八％的范围。本发明的分析方法的所述混合工序中，优选所述试样(X)和所述分析试剂(Y) 的混合体积比(X Y)为1 0.4 1 99的范围。本发明的分析方法的所述测定工序中，优选将所述白细胞按照其体积分类为3 种。本发明的分析方法的所述测定工序中，优选使用具有所述微孔的测试盒，并使 所述混合液通过所述测试盒内的所述微孔。本发明的分析方法中，优选所述测试盒为微全分析系统。本发明的分析试剂中，优选所述糖残基为二糖。本发明的分析试剂中，优选所述脂肪链为脂肪酸残基或烷基。本发明的分析试剂中，优选所述非离子表面活性剂为选自由蔗糖单月桂酸酯、 蔗糖月桂酸酯、蔗糖单癸酸酯以及十二烷基麦芽糖苷组成的组中的至少一种。本发明的分析试剂中，优选所述与白细胞反应的表面活性剂为季铵盐。本发明的分析试剂中，优选所述分析试剂进一步包含与红细胞反应的表面活性 剂。本发明的分析试剂中，优选所述与红细胞反应的表面活性剂为皂角苷。接下来举例说明本发明。<分析方法>如上所述，本发明的分析方法，其特征在于，其是包括如下工序的白细胞的分 析方法混合工序，将包含白细胞以及红细胞的试样以及包含与白细胞反应的表面活性 剂的分析试剂混合；以及测定工序，使所述试样与所述分析试剂的混合液通过微孔，测 定在所述通过时检出的信号，对所述试样中的白细胞进行分类以及计数，所述分析试剂 进一步包含非离子表面活性剂，所述非离子表面活性剂具有作为亲水部的糖残基和作为 疏水部的脂肪链。另外，本发明的分析方法中使用的所述分析试剂相当于本发明的分析 试齐LU通过本发明，例如，不易受到红细胞含量(血细胞比容值等)的影响，可以稳定 地分析。另外，通过本发明，例如，可以提高比淋巴细胞还要小的脉冲下检出的血液成 分(噪音)与淋巴细胞的分离精度，另外可以提高粒细胞的分离精度。因而通过本发明 例如可以提高分析精度。混合工序所述混合工序中，混合所述试样与所述分析试剂，使所述试样中的所述白细胞 以及所述红细胞与所述分析试剂反应。作为对所述白细胞的反应，例如可以列举出白细 胞的细胞膜溶解引起的裸核化，渗透压变化引起的收缩或膨胀等。另外，本发明中，作 为对所述红细胞的反应，例如可列举出溶血、红细胞膜的溶解等。作为包含所述白细胞以及所述红细胞的试样，没有特别限定，例如可列举出血 液试样、血液试样处理后的试样等。所述血液试样例如可列举出全血、血细胞等。作为所述处理，没有特别限定，例如可列举出稀释处理等。所述稀释处理没有特别限定，作 为稀释液例如可以使用生理盐水、缓冲液等。所述稀释倍率没有特别限定，例如为1 500倍的范围，优选为5 400倍的范围，更优选为200 300倍的范围。另外，例如 在稀释全血时，混合所述稀释试样与所述分析试剂时，优选使得全血被稀释至5 1000 倍，进一步优选15 400倍。另外，此时混合所述稀释试样与所述分析试剂而得到的所 述混合液内所述分析试剂的各成分的浓度范围优选为下述范围。作为所述缓冲液没有特别限定，例如可列举出ADA(N-(2-乙酰胺)亚氨基 二乙酸)缓冲液、MES (2-吗啉代乙烷磺酸)缓冲液、Bis-Tris (双_ (2-羟乙基)亚 氨基-三_(羟甲基甲烷)缓冲液、PIPES(哌嗪-1，4-双(2-乙烷磺酸))缓冲液、 ACES (N-(2-乙酰胺)-2-氨基乙烷磺酸)缓冲液、MOPSO (2-羟基-3-吗啉代丙烷磺酸) 缓冲液、BES(N，N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙烷磺酸)缓冲液、HEPES(2-[4-(2-羟乙 基)-1-哌嗪基]乙烷磺酸)缓冲液、磷酸缓冲液等。所述缓冲液的pH例如为pH2 12 的范围，优选为pH5 7.5的范围。所述试样的动物种类没有特别限定，例如可列举出人、牛、马、犬、猫等哺乳类等。本发明中，所述分析试剂包含所述白细胞反应性表面活性剂以及所述非离子表 面活性剂。所述白细胞反应性表面活性剂没有特别限定，例如可列举出季铵盐、皂角苷、 聚氧乙烯系非离子表面活性剂、聚氧乙烯系阴离子表面活性剂等，优选为季铵盐。所述 白细胞反应性表面活性剂例如可以为任意一种，也可以两种以上组合使用。所述季铵盐没有特别限定，例如可列举出月桂基三甲基氯化铵、鲸蜡基三甲基 氯化铵、四(三甲基)氯化铵、硬脂基三甲基氯化铵、山嵛基三甲基氯化铵、椰油基苄基 二甲基氯化铵、二癸基二甲基氯化铵、肉豆蔻基三甲基溴化铵等，优选为月桂基三甲基 氯化铵、鲸蜡基三甲基氯化铵、四(三甲基)氯化铵。所述季铵盐例如可以为任意一种， 也可以两种以上组合使用。所述试样与所述分析试剂的所述混合液中的所述白细胞反应性表面活性剂的浓 度没有特别限定，例如可以根据表面活性剂的种类适当地设定，例如为0.01
范围，优选为0.075 范围。所述白细胞反应性表面活性剂为所述季铵盐时， 所述试样与所述分析试剂的所述混合液中的所述季铵盐的浓度没有特别限定，例如为上 述的浓度范围。本发明中，如上所述，所述非离子表面活性剂具有作为亲水部的糖残基和作为 疏水部的脂肪链。作为所述糖残基没有特别限定，例如可列举出单糖、二糖、寡糖等的糖残基。 所述糖残基内单糖数没有特别限定，例如可以为1 20个的范围。作为所述单糖的糖残 基，没有特别限定，例如可列举出葡萄糖残基、半乳糖残基、甘露糖残基、硫代葡萄糖 残基、阿拉伯糖残基、木糖残基、葡萄糖醛酸残基、葡萄糖胺残基等。作为所述二糖的 糖残基，没有特别限定，例如可列举出蔗糖残基(蔗糖残基)、乳糖残基、麦芽糖残基、 硫代麦芽糖残基等，优选为蔗糖残基。作为所述脂肪链，没有特别限定，例如可列举出脂肪酸残基、烷基等。作为所述脂肪酸残基，没有特别限定，例如可以为饱和脂肪酸残基，也可以为不饱和脂肪酸残 基。另外，所述脂肪酸残基，例如可列举出直链脂肪酸残基、支链脂肪酸残基、环状脂 肪酸残基等，没有特别限定。所述脂肪酸残基的碳原子数没有特别限定，例如为4 28的范围，优选为10 22的范围。作为所述饱和脂肪酸残基，没有特别限定，例如 可列举出癸酸残基、月桂酸残基、肉豆蔻酸残基、十五酸残基、棕榈酸残基、硬脂酸残 基、花生酸残基、山嵛酸残基等，优选为癸酸残基、月桂酸残基，这些例如优选为癸酰 基、十二酰基、十四酰基、十五酰基、十六酰基、十八酰基、二十酰基、二十二酰基等 酰基。作为所述不饱和脂肪酸残基，没有特别限定，例如可列举出油酸残基、亚油酸残 基等，这些例如优选为顺-9-十八碳烯酰基、顺，顺-9，12-十八碳二烯酰基等酰基。作为所述烷基，没有特别限定，例如可以为直链状烷基，也可以为支链状烷 基。所述烷基的碳原子数没有特别限定，例如可以为1 18个的范围。作为所述烷基 的具体例，没有特别限定，例如可列举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁 基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、 十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷 基等ο作为所述非离子表面活性剂的具体例没有特别限定，例如可列举出蔗糖脂肪酸
酯、烷基糖苷、烷基寡糖等。作为所述蔗糖脂肪酸酯没有特别限定，例如可列举出蔗糖癸酸酯、蔗糖月桂酸 酯、蔗糖肉豆蔻酸酯、蔗糖棕榈酸酯、蔗糖硬脂酸酯、蔗糖山嵛酸酯、蔗糖油酸酯、蔗 糖亚油酸酯等，优选为蔗糖癸酸酯、蔗糖月桂酸酯。所述蔗糖脂肪酸酯，例如可列举出 单酯、二酯、三酯等，没有特别限定。作为所述蔗糖脂肪酸单酯，没有特别限定，例如 可列举出蔗糖单癸酸酯、蔗糖单月桂酸酯、蔗糖单肉豆蔻酸酯、蔗糖单棕榈酸酯、蔗糖 单硬脂酸酯、蔗糖单山嵛酸酯、蔗糖单油酸酯、蔗糖单亚油酸酯等，优选为蔗糖单癸酸 酯、蔗糖单月桂酸酯。作为所述蔗糖脂肪酸二酯，没有特别限定，例如可例举出蔗糖二 癸酸酯、蔗糖二月桂酸酯、蔗糖二肉豆蔻酸酯、蔗糖二棕榈酸酯、蔗糖二硬脂酸酯、蔗 糖二山嵛酸酯、蔗糖二油酸酯、蔗糖二亚油酸酯等，优选为蔗糖二癸酸酯、蔗糖二月桂 酸酯。作为所述蔗糖脂肪酸三酯，没有特别限定，例如可例举出蔗糖三癸酸酯、蔗糖三 月桂酸酯、蔗糖三肉豆蔻酸酯、蔗糖三棕榈酸酯、蔗糖三硬脂酸酯、蔗糖三山嵛酸酯、 蔗糖三油酸酯、蔗糖三亚油酸酯等，优选为蔗糖三癸酸酯、蔗糖三月桂酸酯。所述蔗糖脂肪酸酯，例如可以为单酯、二酯、三酯等任意一种，还可以为这些 的混合物。所述蔗糖脂肪酸酯，例如优选为包含所述单酯的蔗糖脂肪酸酯，所述蔗糖脂 肪酸单酯的比例没有特别限定，例如为50 100体积％的范围，优选为70 100体积％ 的范围。作为所述烷基糖苷，没有特别限定，例如可列举出正辛基-D-葡糖苷、正 十二烷基-β-麦芽糖苷、正癸基麦芽糖苷、正辛基-D-麦芽糖苷、3-氧杂十三 烷基-a-D-甘露糖苷、正庚基-β-硫代葡糖苷、正壬基-β-D-硫代麦芽糖苷、正辛 基-β-D-硫代葡糖苷等。所述非离子表面活性剂，例如，可以为任意一种，也可以两种以上组合使用。所述试样与所述分析试剂的所述混合液中的所述非离子表面活性剂的浓度没有
9特别限定，例如为0.001 范围，优选为0.001 范围，更优选为 0.01 1\￥八％的范围。如上所述，所述分析试剂优选不仅包含所述白细胞反应性表面活性剂以及所述 非离子表面活性剂，还包含与所述红细胞反应的表面活性剂(以下称为红细胞反应性表 面活性剂)。本发明中，作为所述红细胞反应性表面活性剂，没有特别限定，例如可以为化 学合成的表面活性剂，也可以为来自天然物质的表面活性剂。作为所述化学合成的表面 活性剂，没有特别限定，例如可列举出阳离子性表面活性剂、阴离子性表面活性剂、两 性表面活性剂等。作为所述阳离子性表面活性剂，没有特别限定，例如可列举出十二烷 基溴化吡啶、鲸蜡基氯化吡啶等。作为所述阴离子性表面活性剂，没有特别限定，例如 可列举出十二烷基硫酸钠、十四烷基磺酸钠等。作为所述两性表面活性剂，没有特别 限定，例如可列举出CHAPS (硫酸-3-[(3-胆酰胺丙基)二甲基铵]-1_丙烷)、十二烷 基-N-甜菜碱等。另外，所述来自天然物质的表面活性剂没有特别限定，例如可列举 出皂角苷、酪蛋白、卵磷脂等。作为所述红细胞反应性表面活性剂，在其中优选为皂角 苷。而且，所述皂角苷可以兼作所述白细胞反应性表面活性剂和所述红细胞反应性表面 活性剂。所述试样与所述分析试剂的所述混合液中的所述红细胞反应性表面活性剂的浓 度没有特别限定，例如可以根据使用的表面活性剂适当地设定。所述试样与所述分析试 剂的所述混合液中的所述红细胞反应性表面活性剂的浓度没有特别限定，例如为0.05
范围，优选为0.1 范围。在使用所述皂角苷时，所述试样与所述 分析试剂的所述混合液中的所述皂角苷的浓度没有特别限定，例如为前述的浓度范围。本发明中，所述分析试剂的上述表面活性剂以外的组成没有特别限定，例如可 以包含缓冲液、添加剂等。作为所述缓冲液，没有特别限定，例如可列举出前述的缓冲 液等。所述缓冲液的pH没有特别限定，例如与前述的pH范围一样。作为所述添加剂，没有特别限定，例如可列举出防再凝集剂、血红蛋白测定用 的添加剂等。所述防再凝集剂例如为用于防止血液试样成分的再凝集的溶液。作为所述防再 凝集剂，没有特别限定，例如可列举出柠檬酸钠、肝素、EDTA(乙二胺四乙酸)、氟化 钠、ACD (柠檬酸-葡萄糖(dextrose)液)等。所述试样与所述分析试剂的所述混合液中的所述防再凝集剂的浓度没有特别限 定，可以根据所使用的成分适当地设定。所述试样与所述分析试剂的所述混合液中的所 述防再凝集剂的浓度没有特别限定，例如为0.05 范围，优选为0.1 0.5w/
范围。在使用所述柠檬酸钠作为所述防再凝集剂时，所述试样与所述分析试剂的所 述混合液中的所述柠檬酸钠的浓度没有特别限定，例如为前述的浓度范围。作为所述血红蛋白测定用的添加剂，没有特别限定，例如可列举出亚硝酸钠、 高氯酸、硫氰酸、碘化钾、溴化钾、三氯乙酸、三氟乙酸等。所述试样与所述分析试剂 的所述混合液中的所述血红蛋白测定用的添加剂浓度没有特别限定，例如为0.01 Iw/ 乂％的范围，优选为0.01 范围。使用所述亚硝酸钠时，所述试样与所述分 析试剂的所述混合液中的所述亚硝酸钠的浓度没有特别限定，例如为所述的浓度范围。
本发明的分析方法中，在所述反应工序中，所述试样(X)与所述分析试剂(Y) 的混合体积比没有特别限定，例如为X Y=I 0.4 1 99的范围，优选为X Y =1 9 1 99的范围，更优选为X Y = 1 19 1 49的范围。所述混合液中，例如，相对于IyL全血，所述白细胞反应性表面活性剂例如优 选为0.02 2mg的范围，所述非离子表面活性剂优选为0.001 0.25mg的范围，所述红 细胞反应性表面活性剂优选为0.004 0.4mg的范围。在所述反应工序中，混合所述试样和所述分析试剂，使所述分析试剂与所述白 细胞以及红细胞反应的时间没有特别限定，例如为10 300秒的范围，优选为30 120 秒的范围。通过使所述反应时间在所述时间的范围内，从而使白细胞与分析试剂反应至 适于分类的程度，且该反应状态保持固定，因而可以稳定地分析白细胞。本发明的分析试剂的剂型没有特别限定，例如可列举出液剂、粉剂、粒剂等。 作为所述分析试剂的制备方法，例如，可以采用目前公知的制造方法，没有特别限定。 作为所述液剂的制备方法，没有特别限定，例如可以将所述的表面活性剂混合于所述的 缓冲液中而制备。作为所述粉剂的制备方法，没有特别限定，例如可以使所述液剂干燥 而制备。另外，作为所述粒剂的制备方法，没有特别限定，例如可以将造粒剂等助剂添 加到所述粉剂内，使用造粒装置等而制备。本发明的分析试剂为例如粉剂或粒剂时，通 过将所述试样与所述分析试剂混合，可以使所述分析试剂的成分溶解、悬浮或分散于所 述混合液中，也可以预先溶解、悬浮或分散于缓冲液等中，再与所述试样混合。测定工序所述测定工序中，使所述试样与所述分析试剂的所述混合液通过微孔，测定在 所述通过时产生的信号，对白细胞进行分类以及计数。另外，本发明例如也可以说是如 下方法对所述试样与所述分析试剂的所述混合液，检出与所述试样中的细胞的大小相 关的信息以及与形态相关的信息中的至少一者，由此对白细胞进行分类以及计数。这些 信息可以作为下述的信号检出。所述混合液的微孔的通过以及所述通过时产生的信号的测定，没有特别限定。 所述微孔，例如，可以为流路的一部分(一点)。即，例如，在使所述混合液通过流路 时，可以将所述流路的需要的部位(一点)作为所述微孔部，测定通过该部位时的信号。 另外，所述微孔也可以为流路途中变细而形成。即，可以使流路上的“变细部分”成为 微孔。这样，所述流路在具有所述微孔时，例如，从所述流路的一端侧向所述流路内导 入、填充所述试样与所述分析试剂的所述混合液。然后，使所述试样向所述流路的另一 端侧移动。由此，使所述混合液通过所述微孔，测定使所述混合液通过所述微孔时产生 的信号。将所述混合液导入流路内的方法没有特别限定，例如，可以通过在所述流路的 另一端侧连接减压泵等抽吸空气而导入，也可以通过在电极和电极之间配置所述微孔， 并在所述两电极间施加电压而导入。在后者的情况下，例如，优选在所述电极间填充电 泳溶液后，通过电泳使所述混合液移动。所述流路例如优选设置于测试盒中，作为测试 盒，优选为μ TAS等微芯片。另外，所述微孔例如也可以为设置于用于隔开相连的液槽的隔壁上的贯通孔 (节流孔)。这种情况下，例如，向一方的所述液槽内注入所述试样以及所述分析试剂， 向另一方的所述液槽内填充生理盐水。接着，通过与所述另一方的液槽相连的减压泵，对所述液槽内部进行减压，使所述试样与所述分析试剂的所述混合液向所述另一方的液 槽移动。由此，使所述白细胞通过所述微孔，测定使所述混合液通过所述微孔时产生的信号。所述微孔的大小没有特别限定，可以根据所使用的分析装置适当地设定。例 如，使用所述μ TAS作为所述分析装置时，在与所述混合液的移动方向垂直的方向上， 所述微孔的截面形状没有特别限定，例如可列举出矩形、圆形等。所述截面形状为矩形 时，所述微孔没有特别限定，例如其宽度为10 200 μ m的范围，其深度为10 200 μ m 的范围，优选其宽度为50 100 μ m的范围，其深度为50 100 μ m的范围。所述截 面形状为圆形时，所述微孔的孔径(直径)例如为10 200μιη的范围，优选为50 IOOym的范围。另外，所述微孔的在所述移动方向上的长度没有特别限定，例如为10 200 μ m的范围，优选为50 100 μ m的范围。所述微孔例如为所述隔壁的贯通孔(节流孔)的情况下，在与所述混合液的移 动方向垂直的方向上，所述贯通孔的截面形状没有特别限定，例如可列举出矩形、圆形 等。所述截面形状为矩形时，所述微孔没有特别限定，例如其宽度为10 200 μ m的范 围，其高度为10 200 μ m的范围，优选其宽度为50 100 μ m的范围，其高度为50 100 μ m的范围。所述截面形状为圆形时，所述微孔的孔径(直径)例如为10 200 μ m 的范围，优选为50 100 μ m的范围。另外，所述微孔的在所述移动方向上的长度没有 特别限定，例如为10 200 μ m的范围，优选为50 IOOym的范围。作为通过所述微孔时检出的信号，没有特别限定，例如可列举出DC电阻 (impedance) > RF电阻等电阻、前向散射光、侧向散射光、荧光等。作为测定所述信号的方法，没有特别限定，例如可列举出测定电压或电流值的 电化学方法，测定光、染料的强度的光学方法等。所述电阻，例如为在含有血细胞的溶液通过所述微孔时电极间的电阻。具体 地，例如，在所述两电极之间通有电流的状态下，所述溶液通过配置在电极和电极之间 的微孔时产生的电阻。所述溶液中悬浮的白细胞等血细胞通过所述微孔时电阻发生变 化，因此通过测定电阻检出该变化，可以分析所述试样中含有的白细胞。通直流电流作 为电流时的电阻为DC电阻，通常，根据血细胞的容积而变化。另外，通高频电流作为 电流时的电阻为RF电阻，通常，根据血细胞的容积以及内部状态而变化。本发明中， 所述包含血细胞的溶液为包含本发明的分析试剂和试样的混合液。包含所述分析试剂或 所述血细胞的溶液(即所述混合液)的电导率没有特别限定，例如为11 20mS/cm的范 围，优选为13 18mS/cm的范围。另外，所述散射光以及荧光的检出方法没有特别限定，例如可以采用常规的方 法，可以使用流式细胞仪，对通过所述微孔的血细胞照射光而检出。作为所述光的光 源，没有特别限定，例如可列举出水冷高功率激光、低功率风冷激光、二极管激光、氙灯等。所述白细胞的分类以及计数没有特别限定，例如可以使用能够由所述信号的信 息进行分析的方法适当地实施。作为所述信号，例如，在测定所述DC电阻时，从检出 的脉冲(电阻变化)的大小，按尺寸大小将白细胞分类，从所述脉冲的频率，可以算出所 述白细胞的按尺寸大小的比率。所述白细胞一般可列举出嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞以及嗜碱性粒细胞等粒细胞、淋巴细胞以及单核细胞这类无颗粒白细胞等。本发明中， 白细胞的分类类别没有特别限定，例如可列举出分为粒细胞和无颗粒白细胞2种(即白细 胞的2分类)，分为淋巴细胞、单核细胞以及粒细胞3种(即白细胞的3分类)，分为嗜 中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞以及淋巴细胞5种(即白细胞的5 分类)。本发明的分析方法中，所述白细胞的分类没有特别限定，但优选为3分类。本发明的分析方法可以与其它的血液分析同时实施。作为所述其它血液分析的 对象，没有特别限定，例如可列举出红细胞、血红蛋白、血小板等。下面针对本发明的分析方法举例说明。但是，本发明的分析方法并不限于下述 的例子。(实施方式1)以下说明使用μ TAS测试盒的本发明的分析方法的一个实施方式。首先图1所 示为本实施方式的所述测试盒的一例。本例的测试盒是可以安装于分析装置(未图示) 的一次性的测试盒。图1之(A)为所述测试盒的平面图。图1之(B)为所述测试盒的 透视图。图1之(A)以及(B)中，同一部分附加同一标记。两图为为了便于理解的简 图，各构成元素的大小、比率等，不限于此，可以不同。如两图所示，所述测试盒1具 有下基板3、上基板2和连接器7，在所述下基板3上层叠有所述上基板2而形成的层叠 体的一个侧面上配置了连接器7。在所述下基板3上形成了布线图案(未图示)。在所述上基板2上形成了 5个贯通孔。所述5个贯通孔的底部被所述下基板3 密封而形成5个液槽。所述5个液槽分别为试样导入部41、排液部45、排液部55、排液 部58和排液部65。另外，所述上基板2的底面上形成有大小4个凹部。在所述4个凹 部中2个凹部的开口面被所述下基板3密封而形成2个液槽。所述2个液槽分别为试剂 槽51和稀释槽59。在所述试剂槽51中封入有分析试剂。在所述稀释槽59中封入有搅 拌子(未图示)。在所述4个凹部中剩余的2个凹部的开口面被所述下基板3密封所得的 空隙内，分别配置了连接所述布线图案中线路的电极61和62。所述空隙为电极配置部。 上述图中，61和62为所述电极，也为所述电极配置部。进而，在所述上基板2的底面形 成多条沟。所述多条沟的开口面被所述下基板3密封而形成流路，连通由所述5个贯通 孔和所述2个凹部形成的7个液槽以及2个所述电极配置部。所述试样导入部41依次通过试样导入流路42、分支部43、溢出流路44连通到 所述排液部45。另外，所述试样导入部41还从所述分支部43经由试样计量流路46连通 到所述稀释槽59。所述试样导入部41的开口部为用于将作为分析对象的试样导入到测试 盒中的导入口。而且，所述试样计量流路46的所述稀释槽59侧的端部形成了流路截面 积狭小的节流孔47。所述测试盒1，例如，可以如下所述计量所述试样并导入到稀释槽59内。首 先，将试样导入所述试样导入部41中后，通过连接到所述排液部45的减压泵等(未图 示)抽吸空气，对连通于所述排液部45的流路内部减压，从所述试样导入部41导入试 样。通过所述抽吸使超过所述分支部43和所述节流孔47之间的所述试样计量流路46的 容积的所述试样流出到溢出流路44。接着，关闭所述排液部45，通过连接到所述试样导 入部41的加压泵等(未图示)喷出空气，对连通于所述试样导入部41的流路内部加压。 由此，将与所述试样计量流路46的容积相当的试样导入到所述稀释槽59中。因此，所述导入量例如设定为所述试样计量流路46的容积，可以计量导入。所述试剂槽51依次通过试剂导入流路52、分支部53、溢出流路54连通到所述 排液部55。另外，所述试剂槽51还从所述分支部53通过试剂计量流路56连通到所述稀 释槽59。在所述试剂槽51中封入有分析试剂(未图示)。所述试剂计量流路56在该所 述稀释槽侧的端部与所述稀释槽59之间分支，在该分支末端形成所述排液部58。由所述 试剂槽51、试剂导入流路52、分支部53、溢出流路54、排液部55、试剂计量流路56、 排液部58和稀释槽59构成稀释部5。另外，在所述试剂计量流路56的所述稀释槽侧的 部分形成有锥形部57。在所述稀释部5中可以如下所述计量所述分析试剂并导入到所述稀释槽59内。 首先，使所述排液部55和排液部65为关闭状态，使所述排液部58为打开状态，通过连 接到所述试剂槽51的加压泵(未图示)等喷出空气，对连通到所述试剂槽51的流路内部 加压。由此，将所述分析试剂填充到所述试剂计量流路56中。进而，关闭所述排液部 58，使所述排液部65为打开状态，通过连接于所述排液部55的加压泵(未图示)等喷出 空气，对连通到所述排液部55的流路内部加压。由此，将与所述试剂计量流路56的容 积相当的分析试剂导入到所述稀释槽59中。因此，所述导入量例如设定为所述试样计量 流路56的容积，可以计量导入。进而，如前所述将所述试样导入到所述稀释槽59中。 然后，利用磁力搅拌器(未图示)使所述稀释槽59内的所述搅拌子(未图示)旋转，从 而可以混合所述试样和所述分析试剂。另外，本例中为了能够进行溶血处理，所述分析 试剂中可以添加表面活性剂。在连通所述稀释槽59和所述排液部65的流路上形成微孔63。并且，在所述 微孔63两端的流路上形成所述电极配置部61和62 (2个凹部)。所述电极配置部61和 62(凹部)中分别配置了通过所述电线与电阻检测仪(未图示)相连的所述电极61、62。 另外，通过所述微孔63和所述2个电极61、62，在所述排液部65侧形成流量测量流路 64。由所述电极61和62、微孔63、流量测量流路64和排液部65构成分析部6。所述测试盒1中，所述上基板2的长度和宽度没有特别限定，例如为10 200mm的范围，优选为20 IOOmm的范围。另外，所述上基板2的厚度没有特别限 定，例如为0.1 IOmm的范围，优选为1 5mm的范围。所述测试盒1中，所述下基板3的长度和宽度没有特别限定，例如为与所述上基 板2同样的长度和宽度。所述下基板3的厚度没有特别限定，例如为0.1 IOmm的范 围，优选为1 5mm的范围。所述测试盒1中所述上基板2以及下基板3的材质，例如只要为不妨碍所述吸 光度测定的材质就没有特别限定。作为所述上基板2以及下基板3的材质，例如可以使 用由玻璃、聚合物材料等形成的材质。作为所述玻璃材料没有特别限定，例如可列举出 合成石英玻璃、熔融二氧化硅、硼硅酸玻璃等。作为所述聚合物材料没有特别限定，例 如可列举出聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)等丙烯酸类树脂、环烯烃聚合物(COP)、聚碳酸 酯(PC)、聚二甲基硅氧烷(PDMS)、聚苯乙烯(PS)、聚乳酸(PLA)、环氧树脂、聚乙烯 (PE)、聚四氟乙烯(PTFE)、聚醚醚酮(PEEK)等。另外，所述下基板3层叠有由所述材 质形成的多个基板。所述多个基板之间形成由铜箔等构成的布线图案。所述测试盒1中所述试样导入部41的直径和深度没有特别限定，例如为直径0.1 IOmm的范围、深度0.1 IOmm的范围，优选为直径1 5mm的范围、深度1 5mm的范围。所述测试盒1中所述试剂槽51的直径和深度没有特别限定，例如为直径0.5 50mm的范围、深度0.1 IOmm的范围，优选为直径1 20mm的范围、深度1 5mm 的范围。所述测试盒1中所述稀释槽59的直径和深度没有特别限定，例如为直径0.5 50mm的范围、深度0.1 IOmm的范围，优选为直径1 IOmm的范围、深度1 5mm 的范围。所述测试盒1中所述排液部45、55、58以及65的直径以及深度没有特别限定， 例如分别为直径0.1 IOmm的范围、深度0.1 IOmm的范围，优选分别为直径1 5mm 的范围、深度1 5mm的范围。所述测试盒1中，所述试样导入部41、所述试剂槽51、所述稀释槽59和所述排 液部45、55、58以及65的液槽的形状为圆柱状，但本发明不限于此。本发明中各液槽 的形状没有特别限定，例如可列举出圆柱状、四棱柱状、四棱锥状、圆锥状等。所述各 液槽的形状可以完全相同也可以不同，没有特别限定。所述测试盒1中所述试剂计量流路56的流路的宽度和深度没有特别限定，截面 积的最大部分处例如宽度为0.1 IOmm的范围、深度为0.1 IOmm的范围，优选宽度 为0.5 5mm、深度为0.1 5mm。所述测试盒1中所述节流孔47的宽度和深度没有特别限定，例如宽度为1 200 μ m的范围、深度为0.1 IOmm的范围，优选宽度为10 100 μ m、深度为0.1 5mm。所述测试盒1中所述微孔63的宽度、深度以及长度如前所述。所述测试盒1中所述试剂计量流路56、所述节流孔47以及微孔63以外的流路的 宽度和深度没有特别限定，例如宽度为10 1000 μ m的范围、深度为0.1 IOmm的范 围，优选宽度为100 500 μ m、深度为0.1 5mm。所述测试盒1中，所述测试盒总体的最大厚度为所述上基板2以及所述下基板3 的厚度的总和。所述上基板2以及所述下基板3的厚度如前所述。所述测试盒1的制造方法没有特别限定，例如可采用目前公知的方法。接下来，针对使用所述测试盒1的本例的白细胞的分析方法进行说明。首先，将所述测试盒1通过连接器7安装到分析装置(未图示)中。另外，与 上述同样地从所述试样导入部41导入作为所述试样的人类全血。并且，如上所述计量与 所述试样计量流路46的容量相当的量的人类全血并导入到所述稀释槽59中。进而，如 上所述计量与所述试剂计量流路56的容量相当的量的所述分析试剂并导入到所述稀释槽 59中。在所述稀释槽59中混合所导入的所述试样以及所述分析试剂，用所述磁力搅拌器 (未图示)使所述搅拌子(未图示)旋转、搅拌，使所述试样中的所述白细胞和红细胞与 所述分析试剂反应。接下来，在所述电极61和62之间施加电压，通过连接到所述排液部65的减压 泵等(未图示)抽吸空气，对连通到所述排液部65的流路内部减压。由此，使混合了所 述试样和所述分析试剂的溶液(混合液)通过所述微孔63，进而流出到所述流量测量流路
1564。通过电阻检测仪(未图示)测定所述混合液通过所述微孔63时产生的脉冲(电阻变 化)，制作以所述脉冲的大小以及频率为两轴的直方图。根据所制作的所述直方图的弯 曲状态将白细胞按尺寸大小分为三类，累加每种所述分类的脉冲频率。用所述累加的脉 冲频率除以流出到所述流量测量流路64的流量，算出所述试样中的所述三类白细胞的比 率。另外，所述三类白细胞以脉冲小的顺序依次为淋巴细胞、单核细胞以及粒细胞。(实施方式2)接下来说明本发明分析方法的其它实施方式。首先，图2表示本实施方式的分 析方法中使用的白细胞分析装置的一例。图2为所述白细胞分析装置的截面图。图2为 为了便于理解的简图，各构成元素的大小、比率等，不限于此，可以不同。如图2所示，所述白细胞分析装置8由主槽9和副槽10这2个槽、抽吸部11、 电极12和电极13这2个电极以及分析部(未图示)构成。所述主槽9和所述副槽10通 过隔壁隔开配置。在所述隔壁上形成作为微孔14的贯通孔而连通所述两槽的内部。所 述主槽9的上面处于开口状态。所述副槽10在与所述隔壁相异的侧面上形成贯通孔，通 过所述贯通孔连通所述抽吸部11。所述抽吸部11的另一端配置泵(未图示)。另外， 所述电极12以及13分别配置在所述主槽9以及所述副槽10上。所述电极12以及13配 置在连接到所述分析部(未图示)的电线(仅图示一部分)的末端。作为所述主槽9以及所述副槽10的材质，例如可以使用与前述测试盒的上基板 同样的材质等。所述主槽9以及所述副槽10的形状没有特别限定，例如可列举出长方 体、圆筒状等。所述主槽9以及所述副槽10的形状可以完全相同也可以不同，没有特别 限定。另外，所述主槽9如上所述例如上面可以处于开放状态。所述微孔14是例如直径为1 500 μ m的范围、长度为1 200 μ m的范围，优 选为直径10 IOOym的范围、长度10 100 μ m的范围的贯通孔。另外，所述直径例 如为垂直于所述微孔14贯通方向的截面直径，所述长度为所述微孔14贯通方向的长度， 并且为隔开所述主槽9和所述副槽10的所述隔壁的厚度。作为所述抽吸部11的材质没有特别限定，例如可以使用与所述的两槽相同的材 料等。所述抽吸部11的形状没有特别限定，例如为圆筒状。本例的白细胞分析装置8的制造方法没有特别限定，例如可以适当地使用目前 公知的方法。接下来，针对使用所述白细胞分析装置8的本例白细胞分析方法进行说明。首先，向所述主槽9和所述副槽10注入本发明的分析试剂。并且，将人类的全 血作为所述试样添加到所述主槽9中混合30秒钟。接下来，在两个所述电极之间施加电 压，通过连接于所述抽吸部11的所述泵抽吸，对所述副槽10内部减压。由此，使所述 混合液通过所述微孔14从所述主槽9向所述副槽10移动。使用所述分析部(未图示) 测定所述混合液通过所述微孔14时产生的脉冲(电阻变化)。与实施方式1同样地制作 直方图，对白细胞进行分类并计数，算出被分类的白细胞的比率。(实施方式3)接下来，说明本发明的分析方法的另一实施方式。首先，图7表示本实施方式 的分析方法中使用的白细胞分析装置的一例。图7为所述白细胞分析装置的截面图。图 7为为了便于理解的简图，各构成元素的大小、比率等不限于此，可以不同。
如图7所示，所述白细胞分析装置88包含主槽部90、副槽部100、搅拌部160、 抽吸部11、电极12和13。另外，所述搅拌部160包含基板部16和搅拌管18。所述抽 吸部11包含抽吸管19和注射筒(未图示)。所述主槽部90由使基板91a和基板91b这2个基板并列重叠而成的两层体构成， 并具备在上方开口且可以容纳液体的空隙部9。该空隙部成为主槽9。所述主槽部90 中，在所述主槽9的侧面即基板91a和基板91b上分别形成了连通所述主槽9内部的贯通 孔22a和贯通孔22c。所述搅拌管18的一端与所述贯通孔22c连接。所述主槽9内配置 有电极12。所述电极12通过电线与电压器连接(未图示)。所述副槽部100由使基板IOla和基板IOlb这2个基板并列重叠而成的两层体构 成，与所述主槽部90邻接配置。所述副槽部100内部具备可以导入液体的空隙部10。该 空隙部成为副槽10。所述副槽部100内，在所述副槽10的侧面即基板IOla上，在纵向 上形成与所述副槽10的内部连通的3个贯通孔。所述3个贯通孔中，正中的贯通孔22b 与邻接的所述主槽部90的贯通孔22a连接。由此，连通所述主槽部90内部和所述副槽 部100内部。另外，本例白细胞分析装置88中，所述副槽部100的贯通孔22b与所述主 槽部90的贯通孔22a的连接部分成为微孔14。所述3个贯通孔中，上方的贯通孔21a以 及下方的贯通孔21b分别成为导入口 21a以及导入口 21b。抽吸管(未图示)的一端与所 述导入口 21a连接，所述抽吸管的另一端与所述注射筒(未图示)连接。另外，所述导 入口 21a和21b可以能够开关，也可以与用于将导入到所述副槽部100内的溶液排出的溶 液槽连接。所述空隙部10中，从所述导入口 21a连通所述贯通孔22b的空隙部分例如可 以作为定量部15使用。所述副槽10内配置有电极13。所述电极13通过电线连接到所 述电压器(未图示)。图8表示所述白细胞分析装置88的所述微孔14部分的其他例子。图8是表示 图7中虚线围住部分的其他例子的放大图。如图8所示，在连通所述主槽部90的贯通孔 22a和所述副槽部100的贯通孔22b的区域，可以配置具有贯通孔的弹性体840。在这种 情况下，在所述弹性体840上形成的所述贯通孔成为所述微孔84。所述弹性体840的材 质没有特别限定，例如可列举出硅橡胶等。所述基板部16由基板161a和基板161b这2个基板并列重叠而成的两层体构成， 其内部具备可以容纳液体的空隙部17。该空隙部成为搅拌槽17。所述基板部16中所述 搅拌槽17的侧面即基板161b上，在纵向上形成有连通所述搅拌槽17内部的两个贯通孔 22d和22e。所述抽吸管19的一端连接于所述贯通孔22d，所述抽吸管19的另一端连接 所述注射筒(未图示)。所述搅拌管18的一端连接于所述贯通孔22e，所述搅拌管18的 另一端如上所述与所述主槽部90的所述贯通孔22c连接。通过该搅拌管18连通所述基 板部16和所述主槽部90的内部。本例的白细胞分析装置88中，作为所述基板91a、91b、101a、101b、161a以及 161b的材质没有特别限定，例如可列举出所述的玻璃、聚合物材料等。所述主槽部90的大小没有特别限定，例如其高度为3 IOOmm的范围、其宽度 为3 50mm的范围、其厚度为3 50mm的范围。另外，所述主槽9的体积没有特别 限定，例如为10 5000 μ L的范围，优选为100 1000 μ L。所述副槽部100的大小没有特别限定，例如其高度为10 200mm的范围、其宽度为3 50mm的范围、其厚度为3 50mm的范围。另外，所述副槽10的体积没有 特别限定，例如为10 5000 μ L的范围，优选为100 1000 μ L。另外，从所述贯通孔 22b至所述导入口 21a的空隙部，可以作为定量部15，在这种情况下，所述定量部15，优 选设定为适于定量的所期望的体积。所述基板部16的大小没有特别限定，例如其高度为3 200mm的范围、其宽度 为3 50mm的范围、其厚度为3 50mm的范围。另外，所述搅拌槽17的体积没有特 别限定，例如优选为100 1000 μ L。所述微孔14的大小例如直径为1 500 μ m的范围、长度为1 200 μ m的范 围，优选直径为10 200 μ m的范围、长度为10 IOOym的范围。另外，所述直径例 如为垂直于所述微孔14的贯通方向的截面的直径，所述长度为所述微孔14部分中的所述 基板91b和所述基板IOla厚度的总和。另外，例如图8中微孔84的大小也相同。所述导入口 21a和21b的直径，例如为0.1 2mm的范围，优选为0.5 Imm 的范围。所述贯通孔22c、22d和22e的直径，例如为0.1 2mm的范围，优选为0.5 Imm的范围。作为所述搅拌管18和所述抽吸管19的材质没有特别限定，例如可以使用不锈钢 等。作为所述不锈钢没有特别限定，例如可列举出SUS等。所述搅拌管18和抽吸管19 的形状没有特别限定，例如为圆筒状。在为所述圆筒状时，所述搅拌管和所述抽吸管的 内径，例如为1 500 μ m的范围，优选为10 200 μ m的范围。所述搅拌管和所述抽 吸管的长度没有特别限定，例如为1 500mm的范围，优选为10 200mm的范围。本例白细胞分析装置88的制造方法没有特别限定，例如可以适当地使用目前公 知的方法。接下来，针对使用所述白细胞分析装置88的本例白细胞分析方法进行说明。首先，用生理盐水稀释人类全血以配制所述试样。使用注射筒(未图示)从所 述导入口 21b导入生理盐水并填充至所述副槽10内的所述电极13的上部，关闭所述导入 口 21b。将所述试样注入到所述主槽9。通过连接于所述抽吸管19的所述注射筒(未图 示)，对连通于所述主槽9的各槽和管减压(抽吸)。由此，将所述主槽9内的所述试样 导入到所述搅拌槽17。接下来，在所述主槽9中注入本发明的分析试剂。通过所述注射 筒对连通于所述主槽9的槽和管加压(喷出)。由此，使所述搅拌槽17内的所述试样再 次导入到所述主槽9内。进而，通过所述注射筒对连通于所述主槽9的槽和管交替反复 进行减压以及加压。由此，混合所述试样和所述分析试剂。混合完成后，在所述主槽9 内静置所述试样与所述分析试剂的混合液。在所述电极12和13间施加电压，通过连接 于所述导入口 21a的注射筒(未图示)抽吸，对所述副槽10和所述主槽9减压。由此， 使所述混合液通过所述微孔14从所述主槽9向所述副槽10移动。使用分析部(未图示) 测定所述试样通过所述微孔14时产生的脉冲(电阻变化)。与实施例1同样地制作直方 图，对白细胞进行分类以及计数，算出所分类的白细胞的比率。另外，在所述副槽部100 的所述空隙部10中，将从所述贯通孔22b到所述导入口 21a的空隙部作为定量部15时， 例如可以对从所述主槽部90通过的所述混合液进行定量。实施例接下来结合比较例对本发明的实施例进行说明。但是，本发明并不限于以下的
副槽10
实施例。(实施例1)本例中，使用血细胞比容值为31.4%的人类全血作为试样，按照以下的步骤测 定白细胞。另外，本例的白细胞的测定中，使用所述的图2所示的白细胞分析装置8。 在所述白细胞分析装置8中所述微孔14为直径50 μ m、长度60 μ m的贯通孔。首先，配制如下表1所示组成的分析试剂。另外，使用氯化钠将所述分析试剂 的电导率调整为11.33mS/cm。(表1)分析试剂
权利要求
1.一种白细胞的分析方法，其特征在于，其是包括如下工序的白细胞的分析方法 混合工序，将包含白细胞和红细胞的试样以及包含与白细胞反应的表面活性剂的分析试剂混合；以及测定工序，使所述试样与所述分析试剂的混合液通过微孔，测定在所述通过时检出 的信号，对所述试样中的白细胞进行分类以及计数； 其中，所述分析试剂进一步包含非离子表面活性剂， 所述非离子表面活性剂具有作为亲水部的糖残基和作为疏水部的脂肪链。
2.根据权利要求1所述的白细胞的分析方法，所述糖残基为二糖的残基。
3.根据权利要求1所述的白细胞的分析方法，所述脂肪链为脂肪酸残基或烷基。
4.根据权利要求1所述的白细胞的分析方法，所述非离子表面活性剂为选自由蔗糖 单月桂酸酯、蔗糖月桂酸酯、蔗糖单癸酸酯以及十二烷基麦芽糖苷构成的组中的至少一 种。
5.根据权利要求1所述的白细胞的分析方法，所述试样与所述分析试剂的所述混合液 中的所述非离子表面活性剂的浓度为0.001 范围。
6.根据权利要求1所述的白细胞的分析方法，所述与白细胞反应的表面活性剂为季铵 盐。
7.根据权利要求1所述的白细胞的分析方法，所述试样与所述分析试剂的所述混合液 中的、所述与白细胞反应的表面活性剂的浓度为0.01 范围。
8.根据权利要求1所述的白细胞的分析方法，所述分析试剂进一步包含与红细胞反应 的表面活性剂。
9.根据权利要求8所述的白细胞的分析方法，所述与红细胞反应的表面活性剂为皂角苷。
10.根据权利要求9所述的白细胞的分析方法，所述试样与所述分析试剂的所述混合 液中的所述皂角苷的浓度为0.05 范围。
11.根据权利要求1所述的白细胞的分析方法，所述混合工序中，所述试样(X)与所 述分析试剂(Y)的混合体积比(X Y)为1 0.4 1 99的范围。
12.根据权利要求1所述的白细胞的分析方法，所述测定工序中，所述白细胞按照其 体积分类为3种。
13.根据权利要求1所述的分析方法，所述测定工序中， 使用具有所述微孔的测试盒，使所述混合液通过所述测试盒内的所述微孔。
14.根据权利要求13所述的分析方法，所述测试盒为微全分析系统。
15.—种分析试剂，其特征在于，该分析试剂为用于权利要求1所述的分析方法的、 包含与白细胞反应的表面活性剂的分析试剂，其进一步包含非离子表面活性剂，所述非离子表面活性剂具有作为亲水部的糖残基和作为疏水部的脂肪链。
16.根据权利要求15所述的分析试剂，所述糖残基为二糖。
17.根据权利要求15所述的分析试剂，所述脂肪链为脂肪酸残基或烷基。
18.根据权利要求15所述的分析试剂，所述非离子表面活性剂为选自由蔗糖单月桂酸酯、蔗糖月桂酸酯、蔗糖单癸酸酯以及十二烷基麦芽糖苷构成的组中的至少一种。
19.根据权利要求15所述的分析试剂，所述与白细胞反应的表面活性剂为季铵盐。
20.根据权利要求15所述的分析试剂，所述分析试剂进一步包含与红细胞反应的表面 活性剂。
21.根据权利要求20所述的分析试剂，所述与红细胞反应的表面活性剂为皂角苷。
全文摘要
提供一种白细胞的分析方法及其使用的分析试剂，该方法即使在含有白细胞试样的稀释率低的情况下，或者在分析时的流速慢的情况下，也可以稳定地以高精度进行白细胞的分类以及计数。本发明的分析方法的特征在于，其是包括如下工序的白细胞分析方法混合工序，将包含白细胞和红细胞的试样以及包含与白细胞反应的表面活性剂的分析试剂混合；以及测定工序，使所述试样与所述分析试剂的混合液通过微孔，并测定在所述通过时检出的信号，对所述试样中的白细胞进行分类以及计数；其中，所述分析试剂进一步包含非离子表面活性剂，所述非离子表面活性剂具有作为亲水部的糖残基和作为疏水部的脂肪链。
文档编号G01N33/49GK102016576SQ20098011555
公开日2011年4月13日 申请日期2009年4月30日 优先权日2008年5月2日
发明者福家博司, 高木英纪 申请人:爱科来株式会社