专利名称：一种血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体的形态学检测方法
技术领域：
本发明涉及自身抗体的检测方法，具体是一种血管紧张素II ι型受体自身抗体 (ATl-AA)的形态学检测方法。
背景技术：
传统的免疫组织化学法是用特异性抗体来显示目标蛋白在组织细胞中的分布及 表达情况，而用形态学手段来确定一种特异性抗体在机体组织中分布特征的报道甚少。子痫前期是妊娠期特发的母婴皆受累的严重病症，病因复杂难明。近年来，患者血 清中ATl-AA的发现为该病病因及发病机制的阐明提供了一条新思路。该自身抗体具有ATl 受体类激动剂样效应，可引发多种与疾病密切相关的病理改变，并且证明ATl-AA属于IgG3 类免疫球蛋白，提示其可能会通过胎盘/乳汁等途径由母体进入后代体内。尽管如此，由于 技术问题，目前对于ATl-AA的检测主要采用生物学鉴定法，比如酶联免疫吸附法、激光共 聚焦共定位、免疫共沉淀等，这些方法或可检测自身抗体的水平，或是通过观察ATl-AA与 ATl受体的特异结合，间接证明该自身抗体的存在，但均不能定位自身抗体的分布。

发明内容
本发明的目的在于提供一种血管紧张素II 1型受体自身抗体的形态学检测方 法，该方法能够定位自身抗体的分布。本发明是这样实现的，利用免疫组织化学法原理，先合成特异性识别ATl-AA的抗 原决定簇一ATl受体细胞外第二环(ATlR-EC11)肽段；将合成的ATlR-EC11肽段标记上辣 根过氧化物酶(HRP)；待组织取出后，迅速浸入4%多聚甲醛液中固定，24小时后石蜡包埋， 切片；组织切片经常规脱蜡、水化、高压抗原修复后，滴加HRP标记的ATlR-EC11肽段，4°C过 夜；最后采用DAB显色。所述的ATlR-EC11肽段，起止位置为I165-T191,其氨基酸序列为SEQ ID NO :1。所述的组织切片厚度为3-50 μ m。与现有技术相比本发明的优点本发明利用免疫组织化学法原理，采用合成的抗 原定位组织中的自身抗体，不仅能检测到该自身抗体的存在，还能显示自身抗体在组织中 的分布特征，为临床相关疾病病理检测提供了新的方法。


图IATl-AA在大鼠胎盘绒毛组织中的分布图
具体实施例方式实施例1 检测大鼠胎盘组织中ATl-AA 委托上海吉尔生化有限公司合成ATlR-EC11肽段；
3
采用济南泰天和生物科技有限公司生产的Glue活化辣根过氧化物酶A型试剂盒， 将合成的ATlR-EC11肽段标记上HRP ；大鼠怀孕20天时(临产前)，腹腔注射10%水合氯醛(0.3ml/100g)进行麻醉。 剖宫取出胎盘，用磷酸盐缓冲液(PBS，0.01M，pH 7. 2)经脐静脉充分灌流，待冲洗液彻底清 亮后将胎盘组织浸入4%多聚甲醛液中固定，石蜡包埋。8 μ m切片，脱蜡水化，3% H2O2孵育 10min，PBS冲洗5minX3次。高压抗原修复(0. OlM枸橼酸钠缓冲液，pH 6. 0, 270°C, IOmin)， PBS 冲洗 5minX 3 次，滴加 HRP 标记的 ATlR-EC11 肽段[5% PMT (0. OlM PBS+5% BSA), 1 100 稀释]后4°C过夜。PBS冲洗5minX3次。DAB显色。脱水、透明、封片。常规免疫组化法检 测胎盘中总IgGs作为阳性对照。结果见图1，在含有大量ATl-AA的免疫组Wistar孕鼠胎盘绒毛的滋养层细胞及血 管内皮细胞处均有明显黄染，证明有ATl-AA表达(短箭头)，其分布与总IgGs —致(长箭 头)；而不含ATl-AA的阴性组大鼠胎盘组织中有一般IgGs通过，却无特异性ATl-AA存在。 直接证明母体中的ATl-AA可以通过胎盘转给其后代。
权利要求
一种血管紧张素II 1型受体自身抗体的形态学检测方法，其特征在于，包括如下步骤先合成AT1R ECII肽段；将合成的AT1R ECII肽段标记上辣根过氧化物酶(HRP)；待组织取出后，迅速浸入4％多聚甲醛液中固定，24小时后石蜡包埋，切片；组织切片经常规脱蜡、水化、高压抗原修复后，滴加HRP标记的AT1R ECII肽段，4℃过夜；最后采用DAB显色；所述的AT1R ECII肽段，其氨基酸序列为SEQ ID NO1。
2.如权利要求1所述的一种血管紧张素II1型受体自身抗体的形态学检测方法，其特 征在于，所述的组织切片厚度为3-50 μ m。
全文摘要
本发明公开了一种血管紧张素II 1型受体自身抗体(AT1-AA)的形态学检测方法，步骤包括先合成AT1R-ECII肽段；再将合成的AT1R-ECII肽段标记上辣根过氧化物酶(HRP)；待组织取出后，迅速浸入4％多聚甲醛液中固定，24小时后石蜡包埋，切片；组织切片经常规脱蜡、水化、高压抗原修复后，滴加HRP标记的AT1R-ECII肽段，4℃过夜；最后采用DAB显色。本发明利用免疫组织化学法原理，采用合成的抗原定位组织中的自身抗体，不仅能检测到该自身抗体的存在，还能显示自身抗体在组织中的分布特征，为临床相关疾病病理检测提供了新的方法。
文档编号G01N33/53GK101968482SQ201010259270
公开日2011年2月9日 申请日期2010年8月18日 优先权日2010年8月18日
发明者刘慧荣, 张苏丽, 杨丽红, 杨晓丽, 燕子, 王瑾, 田珏, 郑荣华 申请人:山西医科大学