专利名称：一种检测赭曲霉毒素a的试剂盒的制作方法
技术领域：
一种检测赭曲霉毒素A的试剂盒，属于酶联免疫吸附分析(ELISA)技术领域，用于对粮食，饲料及其食品中赭曲霉毒素A (简称0TA)含量的检测。
背景技术：
赫曲霉毒素A (OTA)是真菌曲霉ochraceous和几种Penicillium真菌产生的一种毒素。OTA已经被证明对动物及人的肾产生损害，也是一种致癌物质，霉菌毒素引起的中毒大多通过被霉菌污染的粮食，油料作物以及发酵食品等引起，而且霉菌毒素中毒往往表现为明显的地方性和季节性，临床表现较为复杂，有急性中毒、慢性中毒以及致癌、致畸和致突变等。OTA在大多数谷物中均可分离到，包括大麦、小麦、燕麦、玉米、咖啡豆等，以这些谷物作为饲料的家禽也会受到污染，因此为了保障人们的健康，开展食品中OTA的卫生检测研究是很有必要的。 第56次FA0/WH0食品添加剂联合专家委员会(JECFA)会议对OTA进行了危险性评价，得出的结论是体内和体外试验显示OTA都具有遗传毒性，考虑到小麦、大麦和黑麦等谷物是摄入TTA主要的食物品种，决定制定这些食物中OTA的限量标准，会议认为这些食物及其制品中OTA限量为5ug/kg。到目前为止，已有11个国家制定了食品(l-50ug/kg)和饲料(100-1000Pg/kg)中的OTA的限量标准，主要是欧洲国家，我国尚无粮食中的OTA限量标准。因而作为国际食品安全评价机构的JECFA很少能得到我国的污染监测和暴露量评估数据，使我们始终处于被动地位。另外对于食品、农副土特产品、保健品等出口到欧盟市场，其检验检疫必须符合有关0TA、黄曲霉、污染农药等食品安全规定的要求，在这方面我国产品的出口已遭受了很多的损失，而且进口方面，也迫切要求建立一个完善、方便的检测手段。因此，尽快建立高灵敏的OTA的检测，积极开展OTA的研究是当务之急。目前赭曲霉毒素A的测定方法有多种,如薄层色谱法TLC(灵敏度为10ug/ml),高效液相色谱法HPLC (灵敏度为10ug/ml)，免疫荧光染色法(灵敏度0. 025ug/ml)，但由于费时，灵敏度低，仪器设备昂贵，操作复杂且不适用于大批量样品的检测等缺点，已被逐步淘汰。酶联免疫测定法ELISA (灵敏度为0. 25ng/ml)，由于其特异性强，灵敏度高，操作简便，不需直接接触毒素，且特别适于大批量样品的检测等优点而越来越被人们所重视和采用。尽管如此，检测的灵敏度和试剂的稳定性还无法达到要求，致使无法实际应用，所以目前为止没有一个国产的试剂盒面市。

实用新型内容本实用新型的目的在于提供一种检测OTA的试剂盒，用于对粮食，饲料及其食品中OTA含量的检测。本实用新型解决其技术问题所采用的技术方案是一种检测赭曲霉毒素A的试剂盒，包括盒体和盒内的一块24孔OTA包被反应板，一个反应盖板，14瓶试剂和放试剂的下凹瓶位，一个冰袋，一个框架，一份说明书，一包吸水纸，2支一次性滴管和一份质检报告，其特征在于包被反应板是采用24孔试剂板作为固相载体，14瓶试剂分别为6瓶OTA标准品溶液、酶标二抗、OTA抗体、抗体稀释缓冲液、样品稀释液、浓缩洗涤液、底物液、显色液、终止液，下凹瓶位共16个。盒体是硬纸盒；24孔的OTA包被反应板，放于真空铝箔袋内；框架为白色48孔塑料框架，框架孔大小与OTA包被反应板微孔大小相配；反应盖板是塑料硬盖，大小与框架大小相配；0TA标准品溶液均用黑色帽的棕色玻璃瓶，酶标二抗用绿色帽的棕色玻璃瓶，OTA抗体用白色帽的白色PE塑料瓶，抗体稀释缓冲液用绿色帽的白色PE塑料瓶，样品稀释液用篮色帽的白色PE塑料瓶，浓缩洗涤液用白色帽的白色PE塑料瓶，底物液用蓝色帽的白色PE塑料瓶，显色液用黑色帽的黑色PE塑料瓶，终止液用黄色帽的白色PE塑料瓶；下凹瓶位由塑料泡沫制成。本实用新型的有益效果是该试剂盒结构简单，使用方便、廉价、灵敏度高，可以 达到0. lng/ml以上。

图I是本实用新型的外观示意图。
具体实施方式
以下结合附图，进一步说明本实用新型的具体实施方式
先将大麦样品进行处理将大麦样品粉碎至20目，取5克样品放在试管中，加入提取液12.5ml (甲醇水=7: 3)。加塞振荡3分钟，过滤，滤纸采用新华I号纸。取Iml滤液用Iml蒸馏水或去离子水进行稀释，备用。实验准备浓缩洗涤液用蒸馏水稀释20倍，使用前稀释。(例如3ml浓缩洗涤液+57ml蒸馏水，足够24孔使用)OTA抗体工作溶液配制方法在使用前，取I瓶OTA抗体，准确加入2. Oml抗体稀释缓冲液，混匀，配制成实验用OTA抗体工作溶液,够24孔反应板使用。酶标二抗工作溶液配制方法在使用前，取I瓶酶标二抗，准确加入4. 0 ml抗体稀释缓冲液，混匀，配制成实验用酶标二抗工作溶液，够24孔反应板使用。实验步骤试剂平衡将测试盒取出，放置15分钟以上，平衡至室温。小孔编号移取所需微孔放置反应板支架上，不要冲洗。设定I号孔为酶标仪调零孔，2-7号为OTA标准溶液对照孔，其余为样品孔。免疫反应按系列步骤所示，依次加入配制好的溶液及样品液。第一步1号孔加入50ul样品稀释液，2-7号孔分别加入50ul0TA标准溶液(0，
0.1,0. 3，l，3，10ppb)，其余孔加入相应的样品提取液。第二步I号孔内加入50ul抗体稀释缓冲液，在其他所有微孔中加入50ul OTA
抗体工作溶液。第三步轻轻振摇，使各孔中反应物混匀。[0024]第四步37 °C，孵育60分钟。洗涤倒掉板中液体，每孔加入250ul洗涤液，洗液不得溢出，放置I分钟后，甩掉洗液，在吸水纸上拍干，重复洗涤3次。酶标二抗反应每孔加入IOOul酶标二抗工作溶液，37°C，孵育30分钟。洗涤倒掉板中液体，每孔加入250ul洗涤液，洗液不得溢出，放置I分钟后，甩掉洗液，在吸水纸上拍干，重复洗涤5次。在每个小孔内加入50ul底物液，再加入50ul显色液，混匀，在37°C保温箱中显色15分钟。在每个微孔中加入50ul终止液。轻轻摇动微孔板，30分钟内在450nm处读取光密度值(0D值)。最后应当说明的是以上实施例仅用以说明本实用新型的技术方案而非对其限制；尽管参照较佳实施例对本实用新型进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解依然可以对本实用新型的具体实施方式
进行修改或者对部分技术特征进行等同替换；而不脱离本实用新型技术方案的精神，其均应涵盖在本实用新型请求保护的技术方案·范围当中。
权利要求1.一种检测赭曲霉毒素A的试剂盒，包括盒体和盒内的一块24孔OTA包被反应板，一个反应盖板，14瓶试剂和放试剂的下凹瓶位，一个冰袋，一个框架，一份说明书，一包吸水纸，2支一次性滴管和一份质检报告，其特征在于包被反应板是采用24孔试剂板作为固相载体，14瓶试剂分别为6瓶OTA标准品溶液、酶标二抗、OTA抗体、抗体稀释缓冲液、样品稀释液、浓缩洗涤液、底物液、显色液、终止液，下凹瓶位共16个。
2.根据权利要求I所述的一种检测赭曲霉毒素A的试剂盒，其特征在于盒体是硬纸盒；24孔的OTA包被反应板，放于真空铝箔袋内；框架为48孔塑料框架，框架孔大小与OTA包被反应板微孔大小相配；反应盖板是塑料硬盖，大小与框架大小相配；0TA标准品溶液、酶标二抗采用玻璃瓶；OTA抗体、抗体稀释缓冲液、样品稀释液、浓缩洗涤液、底物液、显色液、终止液采用PE塑料瓶；下凹瓶位由塑料泡沫制成。
专利摘要一种检测赭曲霉毒素A的试剂盒，属于酶联免疫吸附分析(ELISA)技术领域，用于对粮食，饲料及其食品中赭曲霉毒素A(简称OTA)含量的检测。一种检测赭曲霉毒素A的试剂盒，包括盒体和盒内的一块24孔OTA包被反应板，一个反应盖板，14瓶试剂和放试剂的下凹瓶位，一个冰袋，一个框架，一份说明书，一包吸水纸，2支一次性滴管和一份质检报告，其特征在于包被反应板是采用24孔试剂板作为固相载体，14瓶试剂分别为6瓶OTA标准品溶液、酶标二抗、OTA抗体、抗体稀释缓冲液、样品稀释液、浓缩洗涤液、底物液、显色液、终止液，下凹瓶位共16个。该试剂盒结构简单，使用方便、廉价、灵敏度高，可以达到0.lng/ml以上。
文档编号G01N33/543GK202583190SQ20112047762
公开日2012年12月5日 申请日期2011年11月26日 优先权日2011年11月26日
发明者赵春城, 赵黎明, 王晓东, 单金莲, 钱汝文 申请人:无锡艾科瑞思产品设计与研究有限公司