专利名称：口腔粘膜病变着色呈色检测剂及其配制方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明是关于一种以着色反应来检验口腔粘膜及异常粘膜细胞病变的检测剂，特指一种口腔粘膜病变着色呈色检测剂及其配制方法和应用，将适当比例的甲基蓝、伊红、煌绿及甘油醇的混合溶液涂抹患部，利用癌症病变中组织异常生长时细胞会聚集核醣核酸与去氧核醣核酸的特性，甲基蓝与伊红在该处会显现不易脱色的蓝紫色；再利用慢性发炎与退化病变所生成的组织较为致密的原理，使煌绿与甘油醇在该患部呈现绿至蓝绿色，因此而达到双重检验的效果，有效地筛检口腔粘膜病变。
本发明为一种简易且有效的口腔粘膜细胞病变的检验试剂配方，利用特殊细胞组织着色剂的呈色反应判别病情的种类，达到双重检验的目的。此发明供医护人员能简便而准确地靠着肉眼评断初步病情，及早发现口腔癌的可疑病灶，同时更能应用于口腔粘膜病变患者的病情追踪检查，确定怀疑的病灶及其分布范围，以决定切片部位及手术位置，并增加手术的精确性，降低人们因患口腔癌的死亡率，为一极具突破性的医学新技术。
据统计，因为国人抽烟及咀嚼槟榔等不当的饮食习惯，近年来国内患口腔癌的人口数有逐年上升的趋势，其高居十大死因中男性癌症的第五名。
然而口腔癌根据发现的早，患者的存活率可高达75％，根据晚期才发现，其患者五年的存活率则降低至18％，因此可知早期诊断是否患有口腔癌的重要性，让国人可及早发现及早治疗，同时站在预防医学的角度，筛检预防口腔癌较的发病后再来治疗，不仅是减清患者的痛苦，而且更可节省大量的医疗资源及成本。
早期癌症病变细胞检测方式除了用目视加触诊法外，只能用病理切片检查，目视加触诊判断的结果准确率低，误诊机率高；而病理切片检查虽然最为准确，但却过程麻烦，且须耗费大量的人力与时间，无法早点得知诊断结果，因此使病患延误了医治的时机，同时也提高了死亡率。
另一种相关于口腔皮膜病变的TBO(Toludine blue 0)检测试剂，其检验结果为单一呈色结果，只对恶性化细胞(根据癌细胞、急性发炎细胞)具检验效果，而且其检测剂本身含有较高的毒性，对人体易产生不良的影响，根据一委托中山医学微生物学科组织病毒实验室所作的细胞毒性试验，详细说明请参考附件一。
该试验为XTT实验，将不同浓度TBO检测剂及本检测剂(以下简称GEM)分别加在Fibroblast(ATCC CCL 163)与HeLa Cell(ATCC CCL2)中，二十四小时后加入XTT灭剂，以分光计吸收光谱测OD值，分析比较两者的毒性，其结果根据表一、表二所示，TBO检测剂的毒性强度在正常纤维细胞组织中比GEM检测剂高出约十倍，因此说明传统的TBO检测剂的毒性较大，在使用上具较高的危险性。
本发明的主要目的是提供一种简易安全且准确度高的口腔粘膜细胞病变检验检测剂，利用特殊细胞组织着色剂的呈色反应判别病情的程度，达到双重检验的目的，以期及早发现病端、及早治疗及增进国人健康的目的。
本发明的目的是这样实现的一种口腔粘膜病变着色呈色检测剂，其特征是它包括如下成分和配比乳酸1％的水溶液95ml，
甲基蓝 0.5-3.0克，伊红G0.2-1.0克，煌绿 0.2-1.0克，甘油醇 50ml。
一种口腔粘膜病变着色呈色检测剂的配制方法，其特征是它包括如下步骤(1)按如下成分和配比备料乳酸1％的水溶液95ml，甲基蓝 0.5-3.0克，伊红G 0.2-1.0克，煌绿0.2-1.0克，甘油醇 50ml。
(2)配制①先将甲基蓝和伊红G加入乳酸的纯水溶液中充分混合，于常温常压下静置等待其充分溶解混合，备用；②将煌绿溶于甘油醇搅拌混合后，加入步骤①的混合溶液，再次充分搅拌，常温常压下静置待完全均匀即可。
该甲基蓝的剂量为在每95ml的1％乳酸中加入2.0克。该伊红剂量为每95ml的1％乳酸中加入0.5克。该煌绿的加入剂量为每50ml的甘油醇中加入0.5克。该煌绿用甲基绿取代。该甲基绿的剂量为每50ml的甘油醇中加入0.2-1.0克。该乳酸纯水溶液的浓度为1％。该配方的组成剂量为每95ml的1％乳酸中加入2.0克甲基蓝和0.5克伊红。该配方的组成剂量为每50ml的甘油醇中加入0.5克煌绿。
一种口腔粘膜病变着色呈色检测剂的应用，其特征是该检测剂搭配一媒染剂使用。该搭配的媒染剂为乳酸的纯水溶液。
本发明的相关原理说明如下本发明的口腔粘膜病变染色呈色检测剂配方中加入一定比例组合的甲基蓝(Methylene blue)和伊红(Eosin G)染料，因该两染剂为硷性，同时对酸性组织产生亲和性的异质染色剂，主要针对去氧核醣核酸(DNA)与核醣核酸(RNA)等氨基酸或多醣体的类酸性组织有反应，同时因为癌细胞的快速生长造成核酸(DNA、RNA)比一般细胞较为聚集，因此可以选择性的在恶性化的细胞上染上一片深蓝紫色，达到检验出癌症细胞的第一重效果。
本发明的口腔粘膜病变染色呈色检测剂配方之中加入另外一定比例的煌绿(Malachite green)与甘油醇(Glycerol)混合溶液，该理论基础为；甘油醇可溶解煌绿，同时为无毒性的组织浸润剂，因此煌绿可随甘油醇渗透入因慢性发炎或退化性病变所生的致密组织，将该处病变染成绿色或蓝绿色，以达到检验轻度病变的第二重效果。
本发明的口腔粘膜病变染色呈色检测剂在识别上及诊断上应用的有效性请见附件二，该附件二为光田医院牙科部口腔颚面外科及口腔病理科，将本检测剂应用于临床病诊的评估报告。
该报告中指出，本检测剂针对口腔病变者予以检查，染色后，随即切片检查以取得病理组织学诊断，使用的方法为先以一作为媒染剂的乳酸(Lacticacid)水溶液喷洒疑似口腔患部2-3次，吐掉后再以主着色剂喷射2-3次，待一分钟后，充分漱口后，即染色完成。
判断准则为依着色的结果分为强阳性、阳性及阴性，其中强阳性的染色部位呈现深蓝紫色，界限分明，且表面不规则；阳性部分则染色界限皆不明显，表面也较规则；遇有怀疑是否为阳性者，可再沾用乳酸水溶液轻拭粘膜表面，若颜色退落，或原先即未染色成功，皆可判定为阴性。
该临床实验的检验人数为148人，筛检的专一性可达90％以上，其敏感度颇高，因此具有相当重要的参考价值。
为使贵审查委员能进一步了解本发明口腔粘膜病变着色呈色检测剂的配方、制法及其它配置条件，兹详细说明根据后本发明中口腔粘膜病变染色呈色检测剂的配制方法的主着色剂分为两大部分第一部分为甲基蓝2.0克及伊红G 0.5克，加入1％乳酸的纯水溶液95ml中充分混合，于常温常压下静置24小时，待其完全溶解。
第二部分将煌绿0.5克溶于5ml的甘油醇中，充分搅拌混合后，放入已完成的第一部分溶液中，再次充分搅拌，常温常压下静置24小时，使其完全溶解后，以滤纸过滤掉未溶解的颗粒，取滤液即成。
另外在媒染剂部分将1％乳酸的纯水溶液加入食用色素及香料，分装即成，供主着色剂染色前，将其喷洒于患部使用。
附件一中山医学微生物学科组织病毒实验室的细胞毒性试验(共14页)。
附件二光田医院牙科部口腔颚面外科及口腔病理科的临床病诊评估报告(共3页)。
权利要求
1.一种口腔粘膜病变着色呈色检测剂，其特征是它包括如下成分和配比乳酸 1％的水溶液95ml，甲基蓝0.5-3.0克，伊红G 0.2-1.0克，煌绿 0.2-1.0克，甘油醇50ml。
2.一种口腔粘膜病变着色呈色检测剂的配制方法，其特征是它包括如下步骤(1)按如下成分和配比备料乳酸1％的水溶液95ml，甲基蓝 0.5-3.0克，伊红G 0.2-1.0克，煌绿0.2-1.0克，甘油醇 50ml。(2)配制①先将甲基蓝和伊红G加入乳酸的纯水溶液中充分混合，于常温常压下静置等待其充分溶解混合，备用；②将煌绿溶于甘油醇搅拌混合后，加入步骤①的混合溶液，再次充分搅拌，常温常压下静置待完全均匀即可。
3.根据权利要求2所述的口腔粘膜病变着色呈色检测剂的配制方法，其特征是该甲基蓝的剂量为在每95ml的1％乳酸中加入2.0克。
4.根据权利要求2所述的口腔粘膜病变着色呈色检测剂的配制方法，其特征是该伊红剂量为每95ml的1％乳酸中加入0.5克。
5.根据权利要求2所述的口腔粘膜病变着色呈色检测剂的配制方法，其特征是该煌绿的加入剂量为每50ml的甘油醇中加入0.5克。
6.根据权利要求2所述的口腔粘膜病变着色呈色检测剂的配制方法，其特征是该煌绿用甲基绿取代。
7.根据权利要求6所述的口腔粘膜病变着色呈色检测剂的配制方法，其特征是该甲基绿的剂量为每50ml的甘油醇中加入0.2-1.0克。
8.根据权利要求3所述的口腔粘膜病变着色呈色检测剂的配制方法，其特征是该乳酸纯水溶液的浓度为1％。
9.根据权利要求1所述的口腔粘膜病变着色呈色检测剂的配制方法，其特征是该配方的组成剂量为每95ml的1％乳酸中加入2.0克甲基蓝和0.5克伊红。
10.根据权利要求1所述的口腔粘膜病变着色呈色检测剂的配制方法，其特征是该配方的组成剂量为每50ml的甘油醇中加入0.5克煌绿。
11.一种根据权利要求1所述的口腔粘膜病变着色呈色检测剂的应用，其特征是该检测剂搭配一媒染剂使用。
12.根据权利要求11所述的口腔粘膜病变着色呈色检测剂的应用，其特征是该搭配的媒染剂为乳酸的纯水溶液。
全文摘要
一种口腔粘膜病变着色呈色检测剂及其配制方法和应用，它包括按如下成分和配比备料乳酸1％的水溶液95ml，甲基蓝0.5－3.0克，伊红G0.2－1.0克，煌绿0.2－1.0克，甘油醇50ml；将甲基蓝和伊红G加入乳酸的纯水溶液中充分混合，将煌绿溶于甘油醇搅拌混合后，加入混合溶液，常温常压下静置待完全均匀即可。利用癌症病变中组织异常生长时细胞会聚集核醣核酸与去氧核醣核酸的特性，甲基蓝与伊红在该处会显现不易脱色的蓝紫色，使煌绿与甘油醇在患部呈现绿至蓝绿色，达到双重检验的效果，有效地筛检口腔粘膜病变。
文档编号G01N33/52GK1390948SQ0111596
公开日2003年1月15日 申请日期2001年6月12日 优先权日2001年6月12日
发明者钱佑 申请人:仲华生化科技股份有限公司