专利名称：一种测定抗性淀粉含量的方法
技术领域：
本发明涉及一种测定抗性淀粉含量的方法，更具体涉及一种能够准确测定食品、饲料原料中抗性淀粉含量的方法。
背景技术：
抗性淀粉(Resistant starch，简称RS)，这一概念由Englyst提出，也有的将其称为抗消化淀粉，抗性淀粉有防治肠道疾病，降低血糖、血脂，降低体重以及促进矿物质吸收等作用。因此，开展对抗性淀粉的测定方法的研究有着重要的现实意义。
最早建立的抗性淀粉测定方法是Englyst法(1983)用胰α-淀粉酶将试样水解，然后测定残留的淀粉量。之后又出现了Berry法、Bjorck法、Tovar法、Champ法、EURESTA等不同的抗性淀粉测定方法，这些方法的灵敏度、稳定性和重现性都不高，而且测定步骤繁琐。不满足对抗性淀粉作进一步研究的需要。因此，选择一种方便、快捷、灵敏度高定量测定方法就十分必要了。
双酶水解法是一种灵敏度和重现性都非常好的检测抗性淀粉含量的理想方法，其工作原理为先用胰α-淀粉酶(Pancreatic α-amylase)将非抗性淀粉水解成葡萄糖，再利用抗性淀粉能溶于KOH中的性质，用淀粉葡萄糖苷酶(Amyloglucosidase，AMG)使其水解成葡萄糖，然后测定糖的含量，从而推算出抗性淀粉的含量。

发明内容
本发明的目的在于提供一种测定抗性淀粉含量的方法，该方法能够较准确地定量测定食品和饲料原料中抗性淀粉的含量。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术措施其特征为分两步水解样品中的淀粉(先将非抗性淀粉水解掉，然后再水解抗性淀粉)，这样可以消除非抗性淀粉对抗性淀粉的测定所产生的影响，从而获得更加准确的测定结果。
其步骤如下1.取样准确称取95-105mg食品或饲料原料样品于离心试管中。(食品原料有土豆粉、小麦、玉米、绿豆、芋头、米、蚕豆等，饲料原料有玉米、荞麦、红薯等)2.第一次酶解反应加胰α-淀粉酶(Pancreatic α-amylase)反应液3.8-4.5ml，放入30-40℃的水浴恒温振荡器中水解，15-17小时后取出。加入3.8-4.2ml乙醇(95％)旋涡混匀，以2800-3100rpm的速度离心11-14分钟，弃上清液，再加入7-13ml乙醇(95％)，旋涡混匀，仍然以2800-3100rpm的速度离心11-14分钟，弃上清液。
胰α-淀粉酶(Pancreatic α-amylase)反应液的配制为称取0.8-1.1g胰α-淀粉酶，用适量0.1-0.3mol/L的马来酸缓冲液(调PH为6.0-7.5)溶解，转入于100ml容量瓶，加入0.9-1.3ml淀粉葡萄糖苷酶液(AMG)工作液，振摇4-7分钟，摇匀，用0.1-0.3mol/L的马来酸缓冲液定容。溶液于12000rpm离心8-12分钟，取出上清液，备用。
3.溶解抗性淀粉向离心管中加入1.8-2.5ml氢氧化钾溶液(1.5-2.2mol/L)，冰浴振荡16-21分钟，再加7.8-9.0ml醋酸钠缓冲溶液(1.1-1.5mol/L，pH＝3.5-4.0)，摇匀。
4.第二次酶解反应加入淀粉葡萄糖苷酶液(AMG)，放入48-55℃水浴恒温振荡器中，26-31分钟后取出。
5.测定离心后，吸取100μl上清液于生化分析仪中测定葡萄糖(GLU)，计算出抗性淀粉含量。
6.计算公式抗性淀粉含量＝G×(10.3/W)×0.9×100％其中G为水解样中葡萄糖含量，W为样品干物质重量(mg)，0.9为淀粉与葡萄糖的转换系数，10.3为一经验值。
应用实例根据上述方法，对不同食品(饲料)原料中抗性淀粉的含量进行了各20次测定。结果如下

测定结果的变异系数均小于2.00，说明本方法的稳定性和重复性都是令人满意的。
本发明与现有技术相比，其灵敏度和重现性都比较高，而且方便、快捷。
具体实施例方式
一种测定抗性淀粉含量的方法，其具体步骤如下1.取样准确称取100mg食品或饲料原料样品于离心试管中。(食品原料有土豆粉、小麦、玉米、绿豆、芋头、米、蚕豆等，饲料原料有玉米、荞麦、红薯等)2.第一次酶解反应加胰α-淀粉酶(Pancreatic α-amylase)反应液4.0ml，放入35℃或37℃或40℃的水浴恒温振荡器中水解，15或16或17小时后取出。加入4.0ml乙醇(95％)旋涡混匀，以2800或3000rpm的速度离心12分钟，弃上清液，再加入8ml乙醇(95％)，旋涡混匀，仍然以2800或3000rpm的速度离心12分钟，弃上清液。(胰α-淀粉酶反应液的配制为称取0.8-1.1g胰α-淀粉酶，用0.1-0.3mol/L马来酸缓冲液(调PH值为6.0-7.5)溶解，转入于100ml容量瓶，加入1.0ml淀粉葡萄糖苷酶液(297-305U/ml)，振摇4-7分钟，摇匀，用马来酸缓冲液定容，溶液于12000rpm离心10分钟，取出上清液，备用。)3.溶解抗性淀粉向离心管中加入2.0或2.4ml氢氧化钾溶液(1.5-2.2mol/L)，冰浴振荡20分钟，再加8.0ml醋酸钠缓冲溶液(1.2mol/L，pH＝3.8)，摇匀。
4.第二次酶解反应加入淀粉葡萄糖苷酶液(AMG)，放入48或50或52或55℃水浴恒温振荡器中，30分钟后取出。
5.测定离心后，吸取100μl上清液于生化分析仪中测定葡萄糖(GLU)，计算出抗性淀粉含量。
6.计算公式抗性淀粉含量＝G×(10.3/W)×0.9×100％。
权利要求
1.一种测定抗性淀粉含量的方法，其步骤如下①.取样称取95-105mg样品于离心试管中；②.第一次酶解反应加胰α-淀粉酶反应液3.8-4.5ml，放入35-40℃的水浴恒温振荡器中水解，15-17小时后取出，加入3.8-4.2ml乙醇旋涡混匀，以2800-3100rpm的速度离心11-14分钟，弃上清液，再加入7-13ml乙醇，旋涡混匀，仍然以2800-3100rpm的速度离心10-13分钟，弃上清液；③.溶解抗性淀粉向离心管中加入1.8-2.5ml氢氧化钾溶液，冰浴振荡16-21分钟，再加7.8-9ml醋酸钠缓冲溶液，摇匀；④.第二次酶解反应加入淀粉葡萄糖苷酶液200-350U/ml，放入48-55℃水浴恒温振荡器中，26-31分钟后取出；⑤.测定离心后，吸取100μl上清液于生化分析仪中测定葡萄糖，计算出抗性淀粉含量。
2.根据权利要求1所述的一种测定抗性淀粉含量的方法，其特征在于所述的胰α-淀粉酶反应液的配制为称取0.8-1.1g胰α-淀粉酶，用0.1-0.3mol/L马来酸缓冲液溶解，PH值为6.0-7.5，转入于100ml容量瓶，加入0.9-1.3ml淀粉葡萄糖苷酶液297-305U/ml，振摇4-7分钟，摇匀，用马来酸缓冲液定容，溶液于12000rpm离心8-12分钟，取出上清液，备用。
全文摘要
本发明公开了一种测定抗性淀粉含量的方法，其步骤是①取样；②第一步酶解反应；③溶解抗性淀粉；④第二步酶解反应；⑤测定。本发明可以定量检测出食品原料、饲料原料中抗性淀粉的含量；方便、快捷、灵敏度高、稳定性和重复性好，实用性强。
文档编号G01N31/00GK1719221SQ200510018859
公开日2006年1月11日 申请日期2005年6月7日 优先权日2005年6月7日
发明者印遇龙, 张平, 黄瑞林, 李铁军, 李丽立, 侯振平 申请人:中国科学院亚热带农业生态研究所