专利名称：利用磁珠法检测全血标本凝血项目的方法
所属领域本发明属于一种医学检验方法，特别涉及一种利用磁珠法检测全血标本凝血项目的方法。
背景技术：
传统的凝血实验采用血浆标本测定，可以准确、灵敏地反映临床患者的二期止血反应，但需要一定的条件(如离心等处理)，不适用于条件较差的实验室、战备、自然灾害尤其是战场急救和自然灾害急救中出血性疾病(如血友病等)患者的有效救助。

发明内容
本发明的目的就在在于克服上述现有技术中存在的不足，而提供一种利用磁珠法检测全血标本凝血项目的方法，该方法操作简单、省时、技术人员容易掌握，尤其可节约标本量。
本发明的技术方案是一种利用磁珠法检测全血标本凝血项目的方法，其特征在于依照下列步骤完成①取新鲜的临床标本；②将该标本放在凝血仪上利用磁珠法和针对全血标本状态特殊调整的全血测定用试剂分别测定凝血四项，即激活的部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原含量(FIB)。
所述标本为常规方法采取的枸橼酸钠抗凝全血标本。
所述激活的部分凝血活酶时间(APTT)在测定时，采用激活的部分凝血活酶时间试剂(APTT-WB)进行测定，所用样本量和试剂的加入量与传统的血浆法相同；激活的部分凝血活酶时试剂(APTT-WB)为以0.93mlAPTT复溶液溶解APTT试剂1ml。
所述凝血酶原时间(PT)在测定时采用全血测定用凝血酶原时间试剂(PT-WB)，所用样本量与试剂的加入量与传统的血浆法相同；全血测定用凝血酶原时间试剂(PT-WB)为以0.83mlPT复溶液溶解PT试剂1ml；所述凝血酶时间(TT)在测定时采用全血测定用凝血酶时试剂(TT-WB)，所用样本量的加入量为100μl、试剂的加入量为200μl；全血测定用凝血酶时间试剂(TT-WB)为以1.13mlTT复溶液溶解TT试剂1ml；所述纤维蛋白原含量(FIB)在测定时采用的全血测定用纤维蛋白原试剂(FIB-WB)，所用的样本量和试剂的加入量与传统血浆Clauss法相同；全血测定用纤维蛋白原试剂(FIB-WB)为0.6ml蒸馏水溶解FIB试剂1ml。
本发明的优点是1、方法简单、省时、技术人员容易掌握；2、降低成本，省却离心机等设备，减少差错机会；3、快捷，适于战场急救、自然灾害和边远山区医疗队，尤其是战场急救和自然灾害急救中出血性疾病(如血友病等)患者的有效救助。4、节约标本量凝血酶时测定，全血法测定所需标本量是血浆法所需要标本量的1/2(但血浆标本是全血的1/2，因此实际标本量仅是血浆法所需要标本量的1/4)。为特殊条件下出凝血患者诊治建立了一种新方法。5、可以精密、准确地反映标本的凝血水平。
具体实施例方式当需要测定激活的部分凝血活酶时间(APTT)时，将新鲜的枸橼酸钠抗凝全血标本放在凝血仪上，利用磁珠法和激活的部分凝血活酶时间试剂(APTT-WB)进行测定，所用样本量和试剂的加入量与传统的血浆法相同；激活的部分凝血活酶时试剂(APTT-WB)为以0.93mlAPTT复溶液溶解APTT试剂1ml。
当需要测定凝血酶原时间(PT)时，将新鲜的枸橼酸钠抗凝全血标本放在凝血仪上，利用磁珠法和全血测定用凝血酶原时间试剂(PT-WB)进行测定，所用样本量与试剂的加入量与传统的血浆法相同；全血测定用凝血酶原时间试剂(PT-WB)为以0.83mlPT复溶液溶解PT试剂1ml；当需要测定凝血酶时间(TT)时，将新鲜的枸橼酸钠抗凝全血标本放在凝血仪上，利用磁珠法和全血测定用凝血酶时试剂(TT-WB)进行测定，所用的样本量为100μl、试剂的加入量为200μl；全血测定用凝血酶时间试剂(TT-W B)为以1.13mlTT复溶液溶解TT试剂1ml；当需要测定纤维蛋白原含量(FIB)时，将新鲜的枸橼酸钠抗凝全血标本放在凝血仪上，利用磁珠法和全血测定用纤维蛋白原试剂(FIB-WB)进行测定，所用的样本量和试剂的加入量与传统血Clauss法相同；全血测定用纤维蛋白原试剂(FIB-WB)为0.6ml蒸馏水溶解FIB试剂1ml。
我们依据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)批准的《用患者样本进行方法学对比及偏差评估第二版EP-9-A2指南文件》，对磁珠法检测全血标本凝血水平进行方法学评价，并与传统的血浆测定法进行了分析，系统地对两种方法进行比较及偏倚评估。
依据NCCLS EP9-A2文件要求，每天取新鲜的临床样本8份，连续测定5天，共40份样本。测定时先对样本排序，再将同一标本处理为全血、血浆标本，用传统的血浆测定法和针对全血标本状态特殊调整的同批号试剂(APTT-WB、PT-WB、TT-WB及FIB-WB)测定凝血四项APTT、PT、TT、FIB，顺序为1至8测定第一次，8至1测定第二次。按表1、2、3、4收集实验数据。
(一)数据结果Xij和Yij为测定结果，Xi和Yi为每个样本测定结果的均值、Dxi和Dyi为样本重复测定值间差值的绝对值、Yi-Xi为两种方法测定结果均值间的差值。
1.病人样本APTT检验结果见表1
NoYij-1 Yij-2 Yi DYiXij-1 Xij-2 Xi DXi Yi-Xi1 25.726.426.10 26.126.926.50 02 32.333.132.7-0.8 35.935.535.73 -1.53 32.730.831.81.934.236.935.63.8 -1.94 34.834.234.50.634.834.234.50 05 33.333.333.30 37 37.737.44.05-26 59.359.359.30 58.957.658.3-1.10.527 43.744.444.1-0.7 45.546.846.22.1 -1.18 29.130.930 -1.8 30.831.631.21.2 -0.69 35.935.935.90 37.138 37.61.65-0.81048.146.747.41.448.548.448.51.05-0.51135.835.635.70.236.235.535.90.15-0.11234.433.934.20.538.839.139 4.8 -2.41335.936.136 -0.2 38.136.137.11.1 -0.61432.132.132.10 33 33.733.41.25-0.61540.541.140.8-0.6 40.140.340.2-0.60.31635.935.135.50.837.337.937.62.1 -1.11737.336.236.81.139.641.640.63.85-1.91838.938.638.80.340.341.340.82.05-11937.537.537.50 37.737.837.80.25-0.12039.739.139.40.640.239.339.80.35-0.22131.531.331.40.235.236.635.94.5 -2.32239.940.740.3-0.8 39 41.740.40.05-02345.445.245.30.245.345.445.40.05-02432.632 32.30.632.432.532.50.15-0.12533.232.933.10.334.133.133.60.55-0.32631.230.831 0.432.132.232.21.15-0.62761.460.661 0.862.262.262.21.2 -0.62827.927.827.90.128.828 28.40.55-0.32940.440.740.6-0.3 41.641.841.71.15-0.63039 38.538.80.542.442.242.33.55-1.8
31 24.3 23.7 24 0.6 24.1 25.5 24.8 0.8-0.432 34.1 32.5 33.3 1.6 34.5 34.4 34.5 1.15 -0.633 33 33.1 33.1 -0.1 36.6 36.6 36.6 3.55 -1.834 32.1 32.2 32.2 -0.1 33.9 33.7 33.8 1.65 -0.835 35.9 35.5 35.7 0.4 35.8 36 35.9 0.2-0.136 58.5 57.1 57.8 1.4 59.9 61.7 60.8 3 -1.537 39.2 39 39.1 0.2 39 39.3 39.2 0.05 -038 31.4 31.9 31.7 -0.5 31.6 31.8 31.7 0.05 -039 31.1 30.1 30.6 1 33.2 33.7 33.5 2.85 -1.440 37.2 37.4 37.3 -0.2 37.7 37.1 37.4 0.1-0.1 36.9 0 38.4 0 0.012.病人样本PT检验结果见表2No Yij-1 Yij-2 Yi DYiXij-1 Xij-2 Xi DXiYi-Xi112.312.3 12.3 0 12.71212.40.70212.41212.2 0.412 12.7 12.4-0.7 -0.15312.41212.2 0.412.112.7 12.4-0.6 -0.2411.711.5 11.6 0.211.711.9 11.8-0.2 -0.2511.812.8 12.3 -1 12.312.8 12.6-0.5 -0.25613.813.5 13.7 0.313.813.6 13.70.2-0.05712.411.9 12.2 0.513.212.9 13.10.3-0.9812 11.8 11.9 0.212.512.2 12.40.3-0.45912.512.2 12.4 0.313.112.8 13 0.3-0.610 12.312.8 12.6 -0.5 13.313.3 13.30 -0.7511 12.912.5 12.7 0.413 12.8 12.90.2-0.212 12.512.4 12.5 0.112.812.6 12.70.2-0.2513 12.513.5 13 -1 12.913.4 13.2-0.5 -0.1514 12.912.9 12.9 0 13.312.8 13.10.5-0.1515 13 12.9 13 0.112.813.3 13.1-0.5 -0.116 13.11313.1 0.113 13.4 13.2-0.4 -0.1517 13 12.5 12.8 0.513.112.6 12.90.5-0.118 12.212.4 12.3 -0.2 12.512.8 12.7-0.3 -0.35
1914.6 14.4 14.5 0.2 14.9 14.7 14.8 0.2 -0.32011.4 11.2 11.3 0.2 11.7 11.3 11.5 0.4 -0.22112.1 12.7 12.4 -0.6 12.6 12.8 12.7 -0.2 -0.32212.2 11.8 12 0.4 12.9 12.1 12.5 0.8 -0.52312.3 11.8 12.1 0.5 12.6 12.1 12.4 0.5 -0.32411.6 11.3 11.5 0.3 11.9 11.7 11.8 0.2 -0.352512.3 12.1 12.2 0.2 12.7 12.3 12.5 0.4 -0.32612.3 12.3 12.3 0 13 12.8 12.9 0.2 -0.62712.5 12.3 12.4 0.2 12.8 12.6 12.7 0.2 -0.32813.6 14 13.8 -0.4 13.7 14.5 14.1 -0.8 -0.32912.1 12 12.1 0.1 12.2 12.1 12.2 0.1 -0.13012.7 12.5 12.6 0.2 12.4 13.1 12.8 -0.7 -0.153111.1 10.9 11 0.2 11.5 11.5 11.5 0 -0.53213.9 14.5 14.2 -0.6 14.1 14.6 14.4 -0.5 -0.153312.2 11.7 12 0.5 12.1 12.5 12.3 -0.4 -0.353412.2 12.5 12.4 -0.3 12.4 12.7 12.6 -0.3 -0.23512.5 12.1 12.3 0.4 12.1 12.6 12.4 -0.5 -0.053612.2 12 12.1 0.2 12.2 12.2 12.2 0 -0.13712.9 12.5 12.7 0.4 13.2 12.7 13 0.5 -0.253812.7 13 12.9 -0.3 13.3 13.2 13.3 0.1 -0.43915.7 16.2 16 -0.5 15.7 16.4 16.1 -0.7 -0.14012.1 12 12.1 0.1 12.9 12.8 12.9 0.1 -0.8 12.5 0.0512.8 0.23 03.病人样本TT检验结果见表3No Yij-1 Yij-2Yj DYi Xij-1 Xij-2Xi DXiYi-Xi120.519.2 19.9 1.3 19.519.6 19.6 -0.1 0.3211.612 11.8 -0.4 11.911.4 11.7 0.50.15313.113.7 13.4 -0.6 13.313.4 13.4 -0.1 0.0549.9 10.3 10.1 -0.4 10.19.8 9.95 0.30.15511.210.1 10.7 1.1 10.610.4 10.5 0.20.15611.311.5 11.4 -0.2 11.511.7 11.6 -0.2 -0.2
7 12.612.2 12.40.4 12.6 12.1 12.4 0.5 0.058 11.411.6 11.5-0.211.8 11.2 11.5 0.6 09 11.511 11.30.5 11.9 11.3 11.6 0.6 -0.351012 12.1 12.1-0.112.5 11.9 12.2 0.6 -0.151112.211.4 11.80.8 12.4 11.6 12 0.8 -0.21211.511.3 11.40.2 12.1 11.6 11.9 0.5 -0.451313 12.7 12.90.3 12.8 12.9 12.9 -0.1 01411.911.1 11.50.8 12.2 11.4 11.8 0.8 -0.31512.812.6 12.70.2 12.3 12.9 12.6 -0.6 0.11620.621.1 20.9-0.520.2 21.7 21 -1.5 -0.11712 12.7 12.4-0.712.5 12.2 12.4 0.3 01811.811.8 11.80 11.9 11.5 11.7 0.4 0.11911.711.8 11.8-0.112.4 12.3 12.4 0.1 -0.62011.311.9 11.6-0.611.8 11.8 11.8 0 -0.22111.511.4 11.50.1 11.6 11.9 11.8 -0.3 -0.32220.520.4 20.50.1 20.2 20.9 20.6 -0.7 -0.12313.111.3 12.21.8 11.1 11.9 11.5 -0.8 0.72412.512 12.30.5 12.2 12.4 12.3 -0.2 -0.052511.311.9 11.6-0.611.6 11.2 11.4 0.4 0.22613.212.8 13 0.4 12.9 13.4 13.2 -0.5 -0.152712.813.4 13.1-0.612.9 13.5 13.2 -0.6 -0.12813.413.3 13.40.1 13 13.9 13.5 -0.9 -0.12912.713.1 12.9-0.412.9 13.2 13.1 -0.3 -0.153013.113.3 13.2-0.213.6 13 13.3 0.6 -0.13112.212.7 12.5-0.512.1 12.8 12.5 -0.7 03212.112.3 12.2-0.212.7 12.3 12.5 0.4 -0.33313.213.2 13.20 11.6 11.9 11.8 -0.3 1.453412.113.4 12.8-1.313.6 14.1 13.9 -0.5 -1.13513.214.3 13.8-1.114.7 14.4 14.6 0.3 -0.83612.713.4 13.1-0.713.2 13.4 13.3 -0.2 -0.253712.512.6 12.6-0.112.7 13 12.9 -0.3 -0.3
3811.3 11.2 11.3 0.1 10.1 10.9 10.5 -0.8 0.753910.7 10.4 10.6 0.3 11.5 10.7 11.1 0.8-0.554016.2 1616.1 0.2 15 14.9 15 0.11.15 12.9 -0 12.9 0.01 -0.644.病人样本FIB检验结果见表4No.Yij-1Yij-2Yi DYiXij-1 Xij-2Xi DXi Yi-Xi1 211.1210 210.61.1212.2 214.5213.4 -2.3-2.82 326.2328.9327.6-2.7 328.9 331.6330.3 -2.7-2.73 446 441.1443.64.9451 446 448.5 5 -4.954 368.3368.3368.30 374.8 378.2376.5 -3.4-8.25 334.4331.6333 2.8337.2 337.2337.2 0 -4.26 436.3441.1438.7-4.8 456.1 456.1456.1 0 -17.47 215.3212.2213.83.1221.6 222.8222.2 -1.2-8.458 297.2295 296.12.2299.4 299.4299.4 0 -3.39 301.6308.6305.1-7 313.4 308.6311 4.8 -5.910 297.2299.4298.3-2.2 303.9 303.9303.9 0 -5.611 489.5483.6486.65.9495.6 477.9486.8 17.7-0.212 218 218 218 0 220.4 222.8221.6 -2.4-3.613 267.4269.2268.3-1.8 269.2 271 270.1 -1.8-1.814 348.9355.1352 -6.2 352 355.1353.6 -3.1-1.5515 313.4313.4313.40 321 311 316 10 -2.616 466.7472.2469.5-5.5 477.9 483.6480.8 -5.7-11.317 276.7274.8275.81.9284 288 286 -4 -10.2518 340 358.3349.2-18352 355.1353.6 -3.1-4.419 341.6341.6341.60 345.9 359.1352.5 -13.2 -10.920 265.6276.6271.1-11276.6 274.6275.6 2 -4.521 409.5393.5401.516 413.4 408.6411 4.8 -9.522 224 215.6219.88.4216.8 226.6221.7 -9.8-1.923 364.8397.4381.1-33385.9 385.9385.9 0 -4.824 501.8508.2505 -6.4 508.2 508.2508.2 0 -3.225 364.8355.1360 9.7364.8 368.2366.5 -3.4-6.55
26 226.6 226.6 226.6 0 227.9 229.2 228.6 -1.3 -1.9527 238.2 226.6 232.4 11.6 238.2 233.2 235.7 5 -3.328 295 299.4 297.2 -4.4 299.4 297.2 298.3 2.2-1.129 348.9 348.9 348.9 0 364.3 355.1 359.7 9.2-10.830 405.4 393.5 399.5 11.9 401.3 409.5 405.4 -8.2 -5.9531 483.6 436.3 460 47.3 469.5 477.9 473.7 -8.4 -13.7532 345.9 348.9 347.4 -3 358.3 345.9 352.1 12.4 -4.733 215.6 215.6 215.6 0 220.4 219.1 219.8 1.3-4.1534 371.6 371.6 371.6 0 388.6 371.6 380.1 17 -8.535 364.8 352 358.4 12.8 371 363.9 367.5 7.1-9.0536 255.5 271 263.3 -16269.2 271 270.1 -1.8 -6.8537 334.4 348.9 341.7 -15337.2 348.9 343.1 -11.7 -1.438 405.4 418.1 411.8 -13422.5 413.4 418 9.1-6.239 393.5 401.3 397.4 -7.8 405.4 401.3 403.4 4.1-5.9540 345.9 345.9 345.9 0 352 355.1 353.6 -3.1 -7.65336.6 3.7342.4 3.534.6(二)以全血标本结果为X轴，血浆标本为Y轴，计算两种方法测定样本APTT、PT、TT、FIB结果的线性回归方程及相关系数r分别为y＝0.9323x+0.1219(r＝0.9763)、y＝0.9265x+0.0904(r＝0.9827)、y＝0.9722x+0.0322(r＝0.9755)、y＝0.9997x+0.0082(r＝0.9992)，r均＞0.975，结果表明全血标本(X)与传统的血浆标本(Y)具有良好相关性。
(三)以传统的血浆法重复测定的均值为靶值，进行APTT、PT、TT、FIB偏倚性评估预期偏倚(％)分别为≤5、≤5、≤5、≤10，实测相对偏倚(％)分别为2.3、5.3、4.6和9.9；结果表明全血测定法可以真实、准确地反映标本的凝血水平。
(四)精密度以不精密度表示。APTT、PT、TT、FIB预期精密度(％)分别为≤5、≤5、≤5、410；实测精密度(％)分别为2.7、3.4、2.8、1.9。
以上结果表明全血测定法具有较高的精密度，可以精密、准确地反映标本的凝血水平。
权利要求
1.一种利用磁珠法检测全血标本凝血项目的方法，其特征在于依照下列步骤完成①取新鲜的临床标本；②将该标本放在凝血仪上利用磁珠法和针对全血标本状态特殊调整的全血测定用试剂分别测定凝血四项，即激活的部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原含量(FIB)。
2.根据权利要求1所述的利用磁珠法检测全血标本凝血项目的方法，其特征在于所述标本为常规方法采取的枸橼酸钠抗凝全血标本。
3.根据权利要求1所述的利用磁珠法检测全血标本凝血项目的方法，其特征在于所述激活的部分凝血活酶时间(APTT)在测定时，采用激活的部分凝血活酶时间试剂(APTT-WB)进行测定，所用样本量和试剂的加入量与传统的血浆法相同；激活的部分凝血活酶时试剂(APTT-WB)为以0.93mlAPTT复溶液溶解APTT试剂1ml。
4.根据权利要求1所述的利用磁珠法检测全血标本凝血项目的方法，其特征在于所述凝血酶原时间(PT)在测定时采用全血测定用凝血酶原时间试剂(PT-WB)，所用样本量与试剂的加入量与传统的血浆法相同；全血测定用凝血酶原时间试剂(PT-WB)为以0.83mlPT复溶液溶解PT试剂1ml。
5根据权利要求1所述的利用磁珠法检测全血标本凝血项目的方法，其特征在于所述凝血酶时间(TT)在测定时采用全血测定用凝血酶时试剂(TT-WB)，所用样本量的加入量为100μl、试剂的加入量为200μl；全血测定用凝血酶时间试剂(TT-WB)为以1.13mlTT复溶液溶解TT试剂1ml。
6.根据权利要求1所述的利用磁珠法检测全血标本凝血项目的方法，其特征在于所述纤维蛋白原含量(FIB)在测定时采用的全血测定用纤维蛋白原试剂(FIB-WB)，所用的样本量和试剂的加入量与传统血浆Clauss法相同；全血测定用纤维蛋白原试剂(FIB-WB)为0.6ml蒸馏水溶解FIB试剂1ml。
全文摘要
一种利用磁珠法检测全血标本凝血项目的方法，依照下列步骤完成①取新鲜的临床标本；②将该标本放在凝血仪上利用磁珠法和针对全血标本状态特殊调整的全血测定用试剂分别测定凝血四项，即激活的部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原含量(FIB)。本发明的优点是1.方法简单、省时、技术人员容易掌握；2.降低成本，省却离心机等设备，减少差错机会；3.快捷，适于战场急救、自然灾害和边远山区医疗队，尤其是战场急救和自然灾害急救中出血性疾病(如血友病等)患者的有效救助。4.节约标本量。5.可以精密、准确地反映标本的凝血水平。
文档编号G01N33/49GK1936580SQ20051001515
公开日2007年3月28日 申请日期2005年9月22日 优先权日2005年9月22日
发明者任峰, 张桂珍 申请人:天津市美德太平洋精密仪器制造有限公司