专利名称：真假酿造酱油现场快速鉴别试剂盒的制作方法
真假酿造酱油现场快速鉴别试剂盒技术领域
本发明属于食品快速检测领域，具体涉及一种真假酿造酱油现场快速鉴别试剂盒。
背景技术：
酱油是我国传统的酿造制品，是人民生活中不可缺少的调味品，酱油以富含蛋白质的豆类和富含淀粉的谷类及副产品为主要原料，在微生物酶的催化作下分解熟成并经浸滤提取的调味汁液。酱油在酿造过程中，原料蛋白质、淀粉等物质在多种微生物酶的共作用下，生成氨基酸、糖、醇、酮、醛、酸、酯、醛和萜烯类等300多种物质，它们给酱油鲜美的口味，醇香扑鼻的香气，美丽夺目的色和浓厚粘稠的体态，形成了酿造酱油独的色、香、味、体。然而一些单位和个人在利益驱动下用用酱色、食盐、味精和水配制成所谓“化学酱油”，高明些的还增加氨氮全氮增补剂、酱油助香剂、增稠剂、口感协调剂、高效防腐剂，或完全用酱色、食盐、水和以植物蛋白经盐酸水解成的蛋白水解液配制“化学酱油”。根据SB/T10173-93的规定，由上述两种酱油的制作既未以豆类、谷类为料，又未经过发酵，显然不符合SB/T10173-8的规定，应属假酱油。这些假酱油不仅不能给菜肴调味、增香，反而破坏了菜肴的风和香气，甚至可能危及消费者的人身健康，严重损害了费者的权益。
国家已经制定了相应的国家标准，对酱油的感官特性、理化特性(可溶性无盐固形物、全氮和氨基酸态氮)和微生物指标进行了规定，但在国家标准中对于酿造酱油和化学配制酱油仅通过该指标很难区分。目前市场上销售的酱油检测试剂盒检测项目仅限于全氮、氨基酸态氮、可溶性无盐固形物和总酸，因此很难快速鉴别真假酿造酱油。根据酱油中氯丙醇或乙酰丙酸有无来鉴别为化学酱油还是酿造酱油，对于氯丙醇的测定主要是利用色谱学方法，对于乙酰丙酸测定主要有化学显色、纸色谱和气相色谱方法，化学显色方法需要把乙酰丙酸经过萃取浓缩，再与香草醛、硫酸显色，操作繁琐，很难在现场快速实施，纸色谱和气相色谱方法也只能在实验室进行，不能现场快速检测。发明内容
本发明提供一种操作简单、快速准确、适用于现场检测的真假酿造酱油鉴别试剂盒。主要发明内容:
I)筛选酿造酱油中特有成分，如醇、醛、酯或其他化合物为特征物质。利用现代分析仪器技术，通过试验发现酿造酱油在发酵过程中会产生乙醇、色氨酸，而化学酱油则没有。
2)发明酱油脱色柱，用50ml注射器去掉针头和推杆做填充柱，先用脱脂棉填至5ml，压实，装填活性炭，敲动使之压实至25ml。样品检测前通过脱色柱脱色，除去色素对显色鉴别反应的影响。
3)酿造酱油中特征物质乙醇和色氨酸的特异显色反应，乙醇在高锰酸钾氧化下与品红反应生成深紫色化合物来进行鉴别；在酸性介质中，色氨酸与对二甲氨基苯甲醛(DMAB)发生缩合反应生成黄色化合物。
4)真假酿造酱油现场快速鉴别试剂盒，其包括活性炭脱色柱和下列化学试剂:
A检测液:3%高锰酸钾-磷酸液
B检测液:草酸-硫酸溶液
C检测液:亚硫酸品红溶液
D检测液:5%对二甲氨基苯甲醛(DMAB)
E检测液:亚硝酸钠溶液
所述试剂盒还包括试剂盒类产品常配的塑料吸管，玻璃比色管等。
本发明利用活性炭对酱油进行脱色，经多次试验，制作的脱色柱对酱油脱色效果很好，操作简单，不需要抽滤，可以在现场快速脱色，脱色后样品清彻透明，可以进行下一步的比色实验，而且，经过试验表明，活性炭对酱油中的乙醇和色氨酸没有吸附。
本发明优点在于:
1.弥补了市场上该类产品的空白。
2.通过验证实验，没有出假阳性和假阴性的结果，表明本方法准确可靠。
3.操作简单，快速，适合在质检、工商、市场监督等部门推广应用。
具体实施方式
脱色柱的制作
用50ml注射器去掉针头和推杆做填充柱，先用脱脂棉填至5ml，压实，装填活性炭，敲动使之压实至25ml，活性炭太少样品脱色不完全，太多影响脱色速度。
检测液的配制
A检测液:称取3g高锰酸钾加磷酸15ml，待其溶解后加水定容至100ml。B检测液:取5g无水草酸溶于1:1硫酸中定容至100ml。
C检测液:称取0.1g碱性品红，研细溶解后加入IOOml容量瓶中，冷却后加IOml 10%亚硫酸钠和Iml盐酸,加水至刻度,混匀,放置过夜,得无色溶液。
D检测液:5%对二甲氨基苯甲醛(DMAB)
E检测液:0.2%亚硝酸钠溶液。
试剂盒操作步骤
1.取10 15ml酱油样品置于脱色柱中，让其自然慢慢脱色，收集脱色后的样品溶液，备用。
2.分别取2.5ml脱色后清彻透明样品溶液加入两支玻璃比色试管中。
3.其中一支比色管中加0.5ml A检测液，5min后加B检测液0.5ml，摇匀，再加入C检测液1.5ml,20min后观察其颜色变化，真酿造酱油显紫色，假酱油则完全褪色。
4.另外一支比色管中加入1.5ml D检测液，20min后加入2滴E检测液，溶液呈淡黄色的即为真酿造酱油，没有显淡黄色的则为假酱油。
权利要求
1.一种真假酿造酱油现场快速鉴别试剂盒，其特征在于:将待测样品经过脱色柱脱色后，针对酿造酱油中特征物乙醇、色氨酸特异显色反应，分别加入A、B、C检测液和D、E检测液，如果待测样品溶液显深紫色和淡黄色，可判断样品是真酿造酱油。
2.如权利要求1所述的真假酿造酱油现场快速鉴别试剂盒，其特征在于:所述的A检测液为3%高锰酸钾-磷酸液。
3.如权利要求1所述的真假酿造酱油现场快速鉴别试剂盒，其特征在于:所述的B检测液为5%草酸-硫酸溶液(I: I)。
4.如权利要求1所述的真假酿造酱油现场快速鉴别试剂盒，其特征在于:所述的C检测液为亚硫Ife品红溶液。
5.如权利要求1所述的真假酿造酱油现场快速鉴别试剂盒，其特征在于:所述的D检测液为5%对二甲氨基苯甲醛(DMAB)。
6.如权利要求1所述的真假酿造酱油现场快速鉴别试剂盒，其特征在于:所述的E检测液为0.2%亚硝酸钠溶液。
7.如权利要求1所述的真假酿造酱油现场快速鉴别试剂盒的使用方法: (1)取10 15ml酱油样品置于脱色柱中，让其自然慢慢脱色，收集脱色后的样品溶液，备用。
(2)分别取2.5ml脱色后清彻透明样品溶液加入两支玻璃比色试管中。
(3)其中一支比色管中加0.5mlA检测液，5min后加B检测液0.5ml，摇匀，再加入C检测液1.5ml,20min后观察其颜色变化，真酿造酱油显紫色，假酱油则完全褪色。
(4)另外一支比色管中加入1.5mlD检测液，20min后加入2滴E检测液，溶液呈淡黄色的即为真酿造酱油，没有显淡黄色的则为假酱油。
全文摘要
本发明公开了一种真假酿造酱油现场快速鉴别试剂盒，属于食品快速检测领域。通过仪器分析找到了酿造酱油中都含有乙醇和色氨酸，建立针对酿造酱油中特征物质乙醇和色氨酸的特异显色反应，乙醇在高锰酸钾氧化下与品红反应生成深紫色化合物；在酸性介质中，色氨酸与对二甲氨基苯甲醛(DMAB)发生缩合反应生成黄色化合物。先用酱油活性炭脱色柱对酱油进行有效脱色后，取脱色后的样品加入两支小试管中，一支加A、B、C检测液，真酿造酱油显紫色，一支加入D、E检测液，真酿造酱油溶液呈淡黄色。本发明试剂盒简单快速、准确可靠，易于应用于现场进行检测。
文档编号G01N21/78GK103149204SQ20131006275
公开日2013年6月12日 申请日期2013年2月7日 优先权日2013年2月7日
发明者方邢有, 路东琪, 马青, 邵秋荣, 丁晓 申请人:顺德出入境检验检疫局