专利名称：：一种人参及其制品中杀真菌剂含量的检测方法
技术领域：
：本发明涉及到食品检测领域，具体指一种人参及其制品中杀真菌剂含量的检测方法。
背景技术：
：人参(PanaxGinsengC.A.Meyer)属于五力口科(Araliaceae)人参属，为多年生草本，根状茎肉质。人参为人所知至少已有4000年的历史，现代药理学研究表明，人参属几乎所有的种均可入药，且人参的各种化学成分在药理方面又有各自的活性和特点。然而，人参的生长周期较长，一般为5至6年，为了防止病虫和真菌毒素的侵害，许多农药，如杀虫剂，杀真菌剂，势必就较多的施用在人参植株上或土壤中。由于大部分的农药具有半衰期长，性质稳定，不易分解，毒害大等特性，所以能长期在水域、土壤和植株体内富集残存，从而造成人参及其产品中残留量不断被检出。这就严重降低了人参及其产品的品质，制约了出口贸易，损害了参农的利益，也对广大食用者的身体健康构成了威胁。因此，加强对人参及其提取物中农药残留检测就成为举足轻重的问题和必备的环节。目前，公开报道了一些关于人参及其提取物中残留农药测定的前处理方法，如索氏提取，液液萃取，固相萃取，超临界流体萃取等。但索氏提取和液液萃取存在自动化程度低、提取净化效率低、成本高、试剂消耗大、环境污染严重等缺点；由于人参提取物主要是皂甙类成分，黏度较大，易造成固相萃取柱的堵塞；超临界流体萃取存在仪器费用和分析成本高，萃取农药的范围窄等不足。故寻求一种用于人参及其提取物中农药残留测定的简单方便、费用低廉、快速准确、高通量和高选择性的样品前处理方法，是广大分析工作者面临的共同任务和难题。
发明内容本发明所要解决的技术问题是根据现有技术的现状提供一种简单方便、快速准确、费用低廉的人参及其制品中杀真菌剂含量的检测方法。本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为该测定人参及其制品中杀真菌剂含量的方法包括检测样品的制备和气相色谱检测步骤，其主要原理是将待测食品样品均匀化后，利用HS-SPME方法萃取，用GC-ECD进行分析测定。具体步骤如下①样品的制备准确称取事先均匀化的样品，加入水使其溶解转化为水溶液。②然后在15ml的带有孔盖和聚四氟乙烯隔垫的样品瓶中进行HS-SPME萃取，其过程为在样品瓶中，加入10iU杀真菌剂混合标准溶液，4ml超纯水或测定样品时为人参提取物水溶液和0.9-1.OgNaCl溶解于其中。③以进样针穿透样品瓶密封膜，并将纤维头浸于样品溶液上方的顶空中，在68-72。C下吸附萃取30-35min。④萃取结束后，迅速縮回SPME萃取头并将其置于气相色谱仪的进样口，在275-285°C°下进行热解吸2-4min，然后进行GC-ECD检测。⑤采用气相色谱P-ECD检测器测定杀真菌剂的峰面积，然后用标准曲线换算成杀真菌剂的浓度。较好的，所述的气相色谱法采用的色谱柱可以为HP-5，规格为30mX0.32mm，膜厚为0.25iim;气相色谱法采用的色谱条件可以是进样口温度为28(TC，ECD检测器温度为300°C;升温程序如下初始温度15(TC，保持2min，然后以15.(TC/min的速率升温至18(TC，保持lmin，再以10.(TC/min的速率升温至21(TC，保持lmin，最后以15.(TC/min的速率升温至25(TC，保持8min;载气和尾吹气均为氮气，载气和尾气的流速分别为1.5和60ml/min;不分流进样1P1;保留时间定性，外标法定量。较好的，所述的气相色谱法中，可以选用厚度为lOOym的聚二甲基硅烷(P匿S)作为固定相；可以采用磁力搅拌器进行搅拌，并且控制磁力搅拌速度为600r/min左右；可以采用将所述的人参提取物水溶液稀释8-16倍时的样品作为最终分析样品。与现有技术相比，本发明采用了顶空固相微萃取(HS-SPME)-GC-ECD联用技术，对人参及其制品中常见的五氯硝基苯(PCNB)、克菌丹(CAP)、异菌脲(IPR)、五氯苯胺(PCA)、甲基五氯苯基硫醚(MPCS)、腐霉利(PRO)等6种残留杀真菌剂进行测定，对影响SPME纤维涂层的吸附和解吸附的各个因素进行优化。整个取样过程仅用时30min，具有较高的测定灵敏度、样品回收率和较好的实验重复性，适合可推广应用于人参及其制品或其它中草药及其制品中农药的残留分析。固相微萃取(SPME)技术是在固相萃取(SPE)基础上提出并发展起来的，是采用特殊纤维涂层的萃取头来特异吸附并浓縮待测物的样品前处理方法。SPME几乎克服了以往一些传统样品前处理方法的所有缺点，能够与色谱(GC)或高效液相色谱法(HPLC)联用，使得样品前处理技术及分析操作简单省时。目前，SPME已被成功应用于环境水样中污染物，土壤，葡萄酒，水果，蜂蜜，茶叶，牛奶等不同材料基质中有机氯农药和其它类型农药残留的分析检测。SPME的萃取方式主要有直接固相微萃取(Direct-SPME)和顶空固相微萃取(HS-SPME)两种。其中Direct-SPME是把纤维插入到样品溶液中，待测物从含基体成分的样品溶液直接迁移到萃取纤维上，适用于分析气体样品和较干净的液体样品中的有机化合物，尤其是挥发性差的化合物，但不利于复杂基体样品的分析。而HS-SPME是将纤维暴露在密封样品上方的气相中，萃取挥发到固体或液体样品顶空中的待测物，适合于分析复杂基体的液态和固态样品中的挥发性、半挥发性有机化合物。由于不直接接触样品，HS-SPME避免了基体的干扰，方法的重现性也优于Direct-SPME方法。目前，已有学者采用HS-SPME分析测定了部分果蔬、蜂产品、中草药、油料等基质材料中的农药残留，效果显著。本发明测定食品样品中杀真菌剂含量的方法无需有机溶剂、简单方便、测定快速、费用低廉。该方法线形范围宽，相关系数在0.996以上；检出限在1.0ng/Kg-50ng/Kg之间；平行测定5次的相对标准偏差在13.5%以内；平均加标回收率在86.7%-113.2%之间。图1为本发明实施例中空白人参提取物水溶液的HS-SPME-GC-ECD色谱图4图2为本发明实施例中加标的人参提取物水溶液的HS-SPME-GC-ECD色谱图其中1为PCNB吸收峰、2为PCA吸收峰、3为MPCS吸收峰、4为PRO吸收峰、5为CAP吸收峰、6为IPR吸收峰；图3为本发明实施例中的HS-SPME吸附-温度曲线图；图4为本发明实施例中的HS-SPME吸附_时间曲线图，其中，萃取温度为7(TC、解吸附温度为28(TC、解吸附时间为2min、不加盐；图5为本发明实施例中的HS-SPME解吸附_温度曲线图，其中萃取温度为70°C、萃取时间为30min、解吸附时间为2min、不加盐；图6为本发明实施例中的HS-SPME解吸附_时间曲线图，其中萃取温度为70°C、萃取时间为30min、解吸附温度为28(TC、不加盐；具体实施例方式以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。本实施例是对人参提取物样品的检测人参提取物以吉林人参根或人参茎叶为原料，经过提取、浓縮、干燥等工艺过程制备而成，为淡黄色干燥粉末。为防止病虫和真菌毒素的侵害，许多农药，如杀真菌剂五氯硝基苯属、腐霉利较多的施用在人参植株上或土壤中，同时人参为多年生宿根类药材，种植期较长，也容易受到环境介质中其他有机氯类农药的污染，从而造成人参及其产品中农药残留量的超标。所采用的仪器Agilent6890N型气相色谱仪，ii-ECD检领lj器，EPC模式，AgilentChemStationG2070AA化学工作站软件；分析纯丙酮，经过全玻璃蒸馏装置重蒸馏，经气相色谱法确认符合农药残留分析的要求；五氯硝基苯(PCNB)、克菌丹(CAP)、异菌脲(IPR)、五氯苯胺(PCA)、甲基五氯苯基硫醚(MPCS)、腐霉利(PRO)标准品(纯度为98.8599.8%，德国Riedel-deHa纽公司)。SPME装置以及PDMS纤维涂层萃取头，100ym(SupelcoCo.，USA)农药混合标准溶液配制准确称取一定量的农药纯品，用丙酮溶解稀释成浓度为40iig/mL的标准储备液，使用时用丙酮逐级稀释。样品制备及SPME萃取考虑到粉状的人参提取物易溶解于水中，所以将其溶解转化为水溶液。取lg粉状的人参茎叶或人参根提取物，用超纯水将其溶解定容至lOml。SPME萃取过程在15ml的带有孔盖和聚四氟乙烯隔垫的样品瓶中进行。在样品瓶中，加入10杀真菌剂混合标准溶液，4ml超纯水，lgNaCl溶解于其中，得到淡黄色人参茎叶或人参根提取物水溶液。以进样针穿透样品瓶密封膜，并将纤维头浸于样品溶液上方的顶空中，在7(TC下吸附萃取30min。萃取结束后，迅速縮回SPME萃取头并将其置于GC进样口28(TC下进行热解吸2min。供GC-ECD检测。GC-ECD测定条件如下色谱柱HP-5，规格为30mXO.32mm，膜厚0.25iim;进样口温度28(TC;5检测器温度30(TC;升温程序如下初始温度15(TC，保持2min，然后以15.0°C/min的速度升温至18(TC，保持lmin，再以10.0°C/min的速度升温至21(TC，保持lmin，最后以15.0°C/min的温度升温至250°C，保持8min;载气和尾吹气均为氮气，流速分别为1.5和60ml/min;不分流进样1y1;保留时间定性，外标法定量。实验结果①GC-ECD色谱图如图1和图2所示。其中萃取温度，70°C;萃取时间，30min;解吸附温度，28(TC;解吸附时间，2min;人参提取物水溶液稀释8倍；加入lgNaCl。杀真菌剂名称同表l。分析图谱可以看出，HS-SPME-GC-ECD对人参提取物水溶液中添加的杀真菌剂萃取效果好，分离的峰形对称尖锐，杂质干扰峰较少。②线性关系、检出限与精密度表1线性、检出限和精密度实验<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>由表1可知，HS-SPME-GC-ECD的线性范围宽，线形关系较好(r2>0.9964)，检出限在1.0ng/Kg-50ng/Kg之间；平行测定5次的相对标准偏差在13.5%以内。③回收率实验向人参提取物水溶液样品中分别添加浓度为50iig/L-100iig/L的杀真菌剂混合标准溶液，HS-SPME-GC-ECD重复测定5次。杀真菌剂添加的种类和用量以及测试结果见表2。表2回收率测定结果序号杀真菌剂添加量Og/L)测定结果0ig/L)回收率(o/o)(mean±RSD,n=5)1PCNB5048.697.2±6.32PCA5053.7107.4±4.53MCPS5046.893.6±8.74PRO100113.2113.2±10.65CAP10092.392.3±7.46IPR10086.786.7±11.2由表2可知，本实施例中的平均回收率较高，为86.7%-113.2%。样品分析采用该方法对来自吉林的6份人参根和人参茎叶提取物进行了检测，发现PCNB、PCA、MPCS、CAP和IPR在所检测的样品中均未检出。人参根提取物中不含有PRO农药，3份人参茎叶提取物中含有0.5iig/g-2.0iig/g的PRO。由以上分析可知，本发明的分析方法无需有机溶剂、简单方便、测定快速、费用低廉，可用于人参提取物中常用杀真菌剂残留量的测定。而现有技术均存在提取净化的效率低、成本高、试剂消耗大、环境污染或分析成本高等不足之处。下述是本发明中较优测试条件的选择实验1、萃取温度对萃取效果的影响HS-SPME吸附-温度曲线见图3。其中，萃取时间为30min，解吸附温度为280°C，解吸附时间为2min，不加盐。结果表明，除PCNB夕卜，杀真菌剂在萃取温度为7(TC左右时可取得较好的萃取效率，因此较好的萃取温度为68-72°C。继续升高温度，萃取效率有下降趋势。故选取7(TC为最佳萃取温度。2萃取时间对萃取效果的影响由图4可知，30min时PDMS对大部分物质的吸附已接近平衡，较好的萃取时间段为30-35min;3解吸附温度和解吸附时间的影响HS-SPME解吸附-温度曲线见图4和图5。结果表明，在275-285t:条件下，杀真菌剂全部解吸附完毕，故选取275_285°〇为较好的解吸附温度，选取280°C作为最佳解吸附温度。由图6可知，杀真菌剂在解吸附2min后，基本解吸附完毕，故选取2min作为最佳解吸附的时间。权利要求一种人参及其制品中杀真菌剂含量的检测方法，其特征在于包括下述步骤①向已均匀化的待测人参或其制品的样品中加入水，使样品溶解转化为水溶液；②向带有孔盖和聚四氟乙烯隔垫的样品瓶中加入10μl杀真菌剂混合标准溶液、4ml超纯水或人参提取物水溶液和0.9-1.0gNaCl溶解于其中；③以进样针穿透样品瓶密封膜，将纤维头浸于样品溶液上方的顶空中，在68℃-72℃下吸附萃取30-35min；④萃取结束后，迅速缩回SPME萃取头并将其置于气相色谱仪的进样口，在275-285℃下进行热解吸2-4min，用气相色谱法检测样品中杀真菌剂的含量；⑤采用气相色谱μ-ECD检测器测定杀真菌剂的峰面积，然后用标准曲线换算成杀真菌剂的浓度。2.根据权利要求1所述的人参及其制品中杀真菌剂含量的测定方法，其特征在于所述气相色谱中采用HP-5色谱柱，其规格为30mX0.32mm，膜厚为0.25ym。3.根据权利要求1所述的人参及其制品中杀真菌剂含量的测定方法，其特征在于所述的气相色谱法所采用的色谱条件为进样口温度为28(TC，检测器温度为300°C;升温程序如下初始温度15(TC，保持2min，然后以15.0°C/min的速率升温至18(TC，保持lmin，再以10.0°C/min的速率升温至21(TC，保持lmin，最后以15.0°C/min的速率升温至25(TC，保持8min;载气和尾吹气均为氮气，两者的流速分别为1.5和60ml/min;不分流进样1yl;保留时间定性，外标法定量。4.根据权利要求1所述的人参及其制品中杀真菌剂含量的测定方法，其特征在于所述的气相色谱法中，选用厚度为lOOym的聚二甲基硅烷(P匿S)作为固定相。5.根据权利要求1所述的人参及其制品中杀真菌剂含量的测定方法，其特征在于所述的气相色谱法中，采用磁力搅拌器进行搅拌，并且控制磁力搅拌速度为600r/min左右。6.根据权利要求1至5任一权利要求所述的人参及其制品中杀真菌剂含量的测定方法，其特征在于所述的人参提取物水溶液稀释8-16倍时的样品为最终分析样品。7.根据权利要求6所述的人参及其制品中杀真菌剂含量的测定方法，其特征在于所述的最终分析样品中按4ml添加0.9-1.OgNaCl。全文摘要本发明涉及到一种人参及其制品中杀真菌剂含量的检测方法，其特征在于包括下述步骤①将已均匀化的待测样品溶解转化为水溶液；②向带有孔盖和聚四氟乙烯隔垫的样品瓶中加入10μl杀真菌剂混合标准溶液、4ml超纯水或人参提取物水溶液和0.9-1.0gNaCl溶解于其中；③以进样针穿透样品瓶密封膜，将纤维头浸于样品溶液上方的顶空中，在68℃-72℃下吸附萃取30-35min；④萃取结束后，迅速缩回SPME萃取头并将其置于气相色谱仪的进样口，在275-285℃下进行热解吸2-4min，用气相色谱法检测样品中杀真菌剂的含量；⑤采用气相色谱μ-ECD检测器测定杀真菌剂的峰面积，然后用标准曲线换算成杀真菌剂的浓度。该检测方法具有简单方便、快速准确、费用低廉的特点。文档编号G01N30/06GK101776657SQ201010100820公开日2010年7月14日申请日期2010年1月20日优先权日2010年1月20日发明者戚向阳申请人:戚向阳