专利名称：一种测定制浆黑液还原糖含量的方法
技术领域：
本发明涉及造纸废水的处理及黑液资源综合利用技术领域，具体是利用双波长分 光光度法测定黑液中还原糖工艺，主要应用于造纸废水处理及黑液综合利用过程中碳水化 合物总量及降解后单糖的含量的测定。
背景技术：
分光光度法具有操作简便，快速，灵敏度高，耗时短等特点，因此在还原糖的分析 中占据相当重要的地位。其原理在于利用还原糖的还原末端与氧化剂发生反应产生高灵 敏性发色基团或消耗带有发色基团的氧化剂而达到检测目的。已报道的方法有传统的 Somogyi-Nelson法，DNS法，铁氰化物和BCA法，以及新涌现的MBTH法，甲胺法。DNS法是 目前采用较多的方法，它是利用DNS在高温条件下与还原糖的还原末端反应生成有色复合 物进行还原糖定量的。制浆蒸煮黑液中的固形物组成比较复杂，一般有机物含量占70%左右，无机物为 30 %左右。有机物中木素含量占40 %左右，挥发性有机酸占8 % 17 %，同时还含有一定量 的半纤维素、以及少量悬浮在溶液中的小纤维等。在研究中，常将半纤维素及小纤维降解成 还原性单糖，然后对其进行研究。而测定黑液中还原糖含量都很难排除其他物质的干扰，尤 其是黑液中的木素的干扰。双波长分光光度法具有准确度和精密度好，灵敏度高，多组分同时测定等优点，因 此，本研究对双波长分光光度法对黑液中还原糖进行测试方法进行探索。

发明内容
采用DNS (3，5-二硝基水杨酸)双波长分光光度法测定制浆黑液中还原糖的含量 是该发明的主要探讨内容。制浆黑液中由于木素的存在，对还原糖含量的测定产生一定干 扰。双波长分光光度法能排除黑液中木素对还原糖含量测定的影响。通过对木素DNS溶液 及葡萄糖DNS溶液紫外-可见特定波长区域吸收谱图的分析，结合木素和葡萄糖各波长处 吸光度值与浓度比例系数的对比值，确定了测试适宜波长为520nm和570nm。在作图分析及 计算基础得到黑液中还原糖含量测定计算公式。对酶解后黑液中还原糖含量测定，发现该 方法能反映酶解过程中黑液中还原糖含量变化；测定加入葡萄糖的酶解后黑液中还原糖含 量，发现该方法具有较好的稳定性，测定结果比较理想。具体操作方法如下第一步、DNS(3，5_ 二硝基水杨酸)溶液配制，称取6. 3g 3，5_ 二硝基水杨酸和 262ml 2mol · Γ1氢氧化钠溶液加入酒石酸钾钠热溶液中(182g酒石酸钾钠溶于500ml去 离子水)，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠搅拌溶解，冷却后定容至IOOOml，储存于棕色瓶，放 置72h后使用；第二步、木素的提取，取一定量的碱法蒸煮黑液，用稀硫酸调节溶液至pH6，离心分 离，取上层液体，再用稀硫酸调至PH 3，再离心分离，取出沉淀物，并用稀硫酸洗涤，然后离
3心，重复操作2 3次，取离心后沉淀物置于80°C真空干燥箱烘干，用研钵研碎，制得粗木 素；第三步、木素的提纯将粗木素溶于140ml吡啶-醋酸-水(体积比9 1 4)体系中，用180ml CHCl3萃 取，静置4h分层后摇荡，再次分层后，分出下层溶有木素的有机层。上层溶液中加入150ml CHCl3再次萃取，摇荡后静置，待分层后分离出下层的有机层。合并两次萃取液，在旋转真空 蒸发器中浓缩至大约100ml，移至IOOOml无水乙醚中，在搅动下沉淀出木素来，将沉淀出的 木素用乙醚洗涤，至无吡啶味为止。置于P2O5的真空干燥器中干燥，得到浅灰色精制木素；第四步、葡萄糖及木素标准溶液配制准确称取l.OOOOg分析纯葡萄糖，溶解于pH 4. 8的HAc-NaAc缓冲液中，然后用pH
4.8的HAc-NaAc缓冲液定容至1L，即得lg/Ι葡萄糖标准溶液(Glc标准溶液)；准确称取
5.OOOOg提纯后木素，溶解于100ml DNS溶液中，然后用去离子水定容至500ml，得木素标准 溶液；第五步、放大系数的确定在该实验中，木素作为干扰相，在双波长测试中要消除其干扰，就要确定差示信 号计算公式中K2 K1 = ε 52Q木素ε 57Q木素。测定不同木素含量DNS溶液在波长520nm和 570nm处吸光度值，得到木素标准液用量与两波长处吸光度关系曲线。木素520nm处吸光度 标准曲线与木素570nm处吸光度标准曲线线性关系方程可近似取Α52(ι*κ= ε
木素，八570木素 =ε 570木素c木素+N2木素，(N1木素、N2木素为常数)，同时可以近^(以取两方程系数为木素 吸光度值与木素含量的比例系数，则有K2 K1= ε 570 ^κ 同时测得不同葡萄糖
含量DNS溶液在波长520nm和570nm处吸光度值，得到葡萄糖准液用量与两波长处吸光度 关系曲线图。由标准曲线图及线性关系公式可以看出，葡萄糖含量与其在两波长下的吸光 度值也有较好的线性相关性；由两线性方程可近似取A52tl葡萄糖=ε 52(|葡碰c葡萄糖+&葡萄糖，A570 葡萄糖=ε 570葡萄糖c葡萄糖+N2葡萄糖，(N1葡萄糖、N2葡萄糖戈J胃。贝丨I S0 = K2 (A520木素+A520葡 萄糖)_Ki (A570木素+A570葡萄糖)=(ε 570木素￡ 520葡萄糖_ ε 570葡萄糖ε 520木素)c葡萄糖+N0 (N0力胃■)；第六步、双波长测定黑液中还原糖含量计算公式确定通过计算得到各编号葡萄糖溶液差示信号值S1，作图得到差示信号S1与葡萄糖浓 度关系标准曲线。由标准曲线线性计算公式可以近似得到差示信号与葡萄糖含量关系式 S1 = ε lCfl}萄糖+N1 (N1为常数)。测试一组即含葡萄糖又含木素的DNS溶液520nm和570nm 处吸光度值，并计算出各编号溶液差示信号值S2，得到混合液差示信号与葡萄糖标准溶液 关系曲线，得计算公式S2=、(^胃^+队汎为常数)。所以取校正系数k= ε2/￡ι，则经 校正后差示信号与葡糖关系式为S = k · S2 = ε Cflms+N(N为常数)。则可计算得到还原 糖含量与差示信号间计算公式；第七步、黑液中还原糖含量测定将黑液调pH值至5左右，加入适量pH4. 8HAC-NaAC缓冲液，离心去除其中不溶物， 取离心清液，稀释适当倍数，取其中5ml于预先加入5ml pH4. 8HAc-NaAc缓冲液，3mlDNS溶 液的比色管中，煮沸5min后迅速冷却后用去离子水定容至25ml。以3mlDNS溶液定容至 25ml溶液为参比，测定溶液520nm及570nm处吸光度值，根据计算公式得到黑液中还原糖含量。


图1、木素吸光度标准曲线，可以根据此标准曲线得到双波长计算的比例系数，其 中横坐标为木素标准溶液用量(单位ml)，纵坐标为吸光度值。图2、葡萄糖吸光度标准曲线，可以根据该标准曲线，计算出双波长计算公式所用 差示信号值，其中横坐标为葡萄糖标准溶液用量(单位ml)，纵坐标为吸光度值。图3、葡萄糖溶液差示信号标准曲线。图4、混合溶液差示信号标准曲线，根据两曲线对比可以确定计算公式中校正系 数，其中，纵坐标为差示信号值，横坐标为葡萄糖标准溶液用量(单位ml)。图5、不同用量复合酶酶解后黑液中还原糖含量。横坐标为酶用量(单位ml)； 纵坐标为酶解后还原糖量(单位:g · Γ1)。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施案例1.用本方法对酶解后黑液中还原糖进行测定。具体操作方法如下第一步、DNS (3，5- 二硝基水杨酸)溶液配制称取6. 3g DNS和262ml 2mol · F1NaOH溶液加入酒石酸钾钠热溶液中(182g酒 石酸钾钠溶于500ml去离子水)，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠搅拌溶解。冷却后定容至 1000ml，储存于棕色瓶，放置72h后使用；第二步、木素的提取取一定量的碱法蒸煮黑液，用稀硫酸调节溶液至pH 6，离心分离，取上层液体，再 用稀硫酸调至PH 3，再离心分离，取出沉淀物，并用稀硫酸洗涤，然后离心，重复操作2 3 次，取离心后沉淀物置于80°C真空干燥箱烘干，用研钵研碎，制得粗木素；第三步、木素的提纯将粗木素溶于140ml吡啶-醋酸-水(体积比9 1 4)体系中，用180ml CHCl3萃 取，静置4h分层后摇荡，再次分层后，分出下层溶有木素的有机层。上层溶液中加入150ml CHCl3再次萃取，摇荡后静置，待分层后分离出下层的有机层。合并两次萃取液，在旋转真空 蒸发器中浓缩至大约100ml，移至IOOOml无水乙醚中，在搅动下沉淀出木素来，将沉淀出的 木素用乙醚洗涤，至无吡啶味为止。置于P2O5的真空干燥器中干燥，得到浅灰色精制木素；第四步、葡萄糖及木素标准溶液配制准确称取1. OOOOg分析纯葡萄糖，溶解于pH 4. 8的HAc-NaAc缓冲液中，然后用pH
4.8的HAc-NaAc缓冲液定容至1L，即得lg/Ι葡萄糖标准溶液(Glc标准溶液)；准确称取
5.OOOOg提纯后木素，溶解于100ml DNS溶液中，然后用去离子水定容至500ml，得木素标准 溶液；第五步、放大系数的确定在该实验中，木素作为干扰相，在双波长测试中要消除其干扰，就要确定差示信号 计算公式中K2 K1= ε52(1木素ε57。木素。测定不同木素含量DNS溶液在波长520nm和
5570nm处吸光度值，得到木素标准液用量与两波长处吸光度关系曲线如图1所示。图1中两曲线为木素520nm处吸光度标准曲线与木素570nm处吸光度标准曲线。 由图1两标准曲线及线性关系公式可以看出，木素含量与其在两波长下的吸光度值有较好 的线性相关性；由两线性方程可近似取A52c^k= 0. 53380^+^^,A570 ^k= 0. 3288c木素+N2 木K，(&木素、N2木素为常数)，同时可以近似取两方程系数为木素吸光度值与木素含量的比例 系数，则有 K2 K1= ε 520 木素ε 570 木素=0. 5338 0. 3288，故取 K2 = 5. 338，K1 = 3. 288。为确放大系数可用性，测得不同葡萄糖含量DNS溶液在波长520nm和570nm处吸 光度值，得到葡萄糖准液用量与两波长处吸光度关系曲线如图2所示。由图2中两标准曲线及线性关系公式可以看出，葡萄糖含量与其在两波长下的吸 光度值也有较好的线性相关性；由两线性方程可近似取A52tliffiiw= 0. 2674c +Nliffi萄糖，
A570葡萄糖=0· 1280c葡萄糖+N2葡萄糖，(N1葡萄糖、N2葡萄糖为常■)。贝U差[苜号S0 = K2 (A520木素+A520 葡萄糖)_Ki (A570木素+A570葡萄糖)=0. 1959c葡萄糖+N0 (N0 为常数)。通过计算得到各编号葡萄糖溶液差示信号值S1,图3为差示信号S1与葡萄糖浓度 关系标准曲线。由图3中线性计算公式可以近似得到差示信号与葡萄糖含量关系式=S1 = 0. 1958c +N1 (N1为常数)。比较两差示信号S。与S1，可以看出，二者与葡萄糖浓度比例 系数相差很小，所以取K2 = 5. 338,1 = 3. 288为放大系数比较合适。第六步、双波长测定黑液中还原糖含量计算公式确定通过计算得到各编号葡萄糖溶液差示信号值S1,图3为差示信号S1与葡萄糖浓度 关系标准曲线。由图3中线性计算公式可以近似得到差示信号与葡萄糖含量关系式=S1 = 0. 1958c +N1 (N1为常数)。比较两差示信号S。与S1，可以看出，二者与葡萄糖浓度比例 系数相差很小，所以取K2 = 5. 338,1 = 3. 288为放大系数比较合适。由图4可以看出，在混合体系中，差示信号与葡萄糖用量的线性相关系数仍能大 于0. 9900，所以双波长测定黑液中还原糖还是比较准确的。由图4中方程可以近似得到差 示信号与葡萄糖含量关系式S2 = 0. 1642c+N2 (N2为常数)。与纯葡萄糖溶液差示信号 方程S1 = O. 1958(€1 +&比较，有一定差别，所以应予以校正。由于两方程比例系数比 值约为1. 2，所以取校正系数k = 1. 2，则经校正后差示信号与葡糖关系式为S = k · S2 = 0. I97Oc葡碰+N(N为常数)。若某溶液在520nm处吸光度值为A，在570nm处吸光度值为B，则结合 图4中差示信号与葡萄糖用量关系式，可以得到混合液中葡萄糖含量计算公式
5/A:-0.0165 1 5/Α:-0.0165 ,,
C=—-X —XM =—-XM
0.1642 50.821其中c为待测溶液中还原糖浓度，g/L ；S为520nm与570nm处吸光度值经计算得到差示信号，s = K2XA-K1XB ；K2, K1为差示信号放大系数，分别K2 = 5. 338，K1 = 3. 288 ；k为校正系数，1. 2 ；M为溶液稀释倍数，M应取适当值，是A、B介于0. 3 0. 7。第七步、酶解后黑液中还原糖含量测定将蒸煮黑液用硫酸调pH至5左右，然后加入含复合酶pH4. SHAc-NaAc缓冲液 50mL，于50°C恒温水浴摇床中6h，取出后进行沸水浴灭酶处理，离心去除其中不溶物，取离
6心清液，稀释适当倍数，取其中5ml于预先加入5ml pH4. 8HAc-NaAc缓冲液，3mlDNS溶液的 比色管中，煮沸5min后迅速冷却后用去离子水定容至25ml。以3mlDNS溶液定容至25ml溶 液为参比，测定溶液520nm及570nm处吸光度值，根据计算公式得到黑液中还原糖含量。酶 解后黑液中还原糖含量与酶用量关系图，如图5所示。从图5可以看出，用双波长法测得黑 液中还原糖含量基本反映了酶解过程中还原糖含量变化趋势，有一定的可靠性。实施案例2.用本方法对酶解后黑液平行样进行测试。具体操作方法如下第一步、DNS (3，5- 二硝基水杨酸)溶液配制称取6. 3g DNS和262ml 2mol · F1NaOH溶液加入酒石酸钾钠热溶液中(182g酒 石酸钾钠溶于500ml去离子水)，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠搅拌溶解。冷却后定容至 1000ml，储存于棕色瓶，放置72h后使用；第二步、木素的提取取一定量的碱法蒸煮黑液，用稀硫酸调节溶液至PH 6，离心分离，取上层液体，再 用稀硫酸调至PH 3，再离心分离，取出沉淀物，并用稀硫酸洗涤，然后离心，重复操作2 3 次，取离心后沉淀物置于80°C真空干燥箱烘干，用研钵研碎，制得粗木素；第三步、木素的提纯将粗木素溶于140ml吡啶-醋酸-水(体积比9 1 4)体系中，用180ml CHCl3萃 取，静置4h分层后摇荡，再次分层后，分出下层溶有木素的有机层。上层溶液中加入150ml CHCl3再次萃取，摇荡后静置，待分层后分离出下层的有机层。合并两次萃取液，在旋转真空 蒸发器中浓缩至大约100ml，移至IOOOml无水乙醚中，在搅动下沉淀出木素来，将沉淀出的 木素用乙醚洗涤，至无吡啶味为止。置于P2O5的真空干燥器中干燥，得到浅灰色精制木素；第四步、葡萄糖及木素标准溶液配制准确称取1. OOOOg分析纯葡萄糖，溶解于pH 4. 8的HAc-NaAc缓冲液中，然后用pH
4.8的HAc-NaAc缓冲液定容至1L，即得lg/Ι葡萄糖标准溶液(Glc标准溶液)；准确称取
5.OOOOg提纯后木素，溶解于100ml DNS溶液中，然后用去离子水定容至500ml，得木素标准 溶液；第五步、放大系数的确定在该实验中，木素作为干扰相，在双波长测试中要消除其干扰，就要确定差示信号 计算公式中K2 K1 =
ε 520木素· ε 570木素0 测定不同木素含量DNS溶液在波长520nm和570nm
处吸光度值，得到木素标准液用量与两波长处吸光度关系曲线如图1所示。图1中两曲线为木素520nm处吸光度标准曲线与木素570nm处吸光度标准曲线。 由图1两标准曲线及线性关系公式可以看出，木素含量与其在两波长下的吸光度值有较好 的线性相关性；由两线性方程可近似取A52c^k= 0. 53380^+^^,A570 ^k= 0. 3288c木素+N2 木K，(&木素、N2木素为常数)，同时可以近似取两方程系数为木素吸光度值与木素含量的比例 系数，则有 K2 K1= ε 520 木素ε 570 木素=0. 5338 0. 3288，故取 K2 = 5. 338，K1 = 3. 288。为确放大系数可用性，测得不同葡萄糖含量DNS溶液在波长520nm和570nm处吸 光度值，得到葡萄糖准液用量与两波长处吸光度关系曲线如图2所示。由图2中两标准曲线及线性关系公式可以看出，葡萄糖含量与其在两波长下的吸
7光度值也有较好的线性相关性；由两线性方程可近似取A52tliffiiw= 0. 2674c +Nliffi萄糖，
A570葡萄糖=0· 1280c葡萄糖+N2葡萄糖，(N1葡萄糖、N2葡萄糖为常■)。贝IjH^fe号S0 = K2 (A520木素+A520 葡萄糖)_Ki (A570木素+A570葡萄糖)=0. 1959c葡萄糖+N0 (N0 为常数)。通过计算得到各编号葡萄糖溶液差示信号值S1,图3为差示信号S1与葡萄糖浓度 关系标准曲线。由图3中线性计算公式可以近似得到差示信号与葡萄糖含量关系式=S1 = 0. 1958c +N1 (N1为常数)。比较两差示信号S。与S1，可以看出，二者与葡萄糖浓度比例 系数相差很小，所以取K2 = 5. 338,1 = 3. 288为放大系数比较合适。第六步、双波长测定黑液中还原糖含量计算公式确定通过计算得到各编号葡萄糖溶液差示信号值S1,图3为差示信号S1与葡萄糖浓度 关系标准曲线。由图3中线性计算公式可以近似得到差示信号与葡萄糖含量关系式=S1 = 0. 1958c +N1 (N1为常数)。比较两差示信号S。与S1，可以看出，二者与葡萄糖浓度比例 系数相差很小，所以取K2 = 5. 338,1 = 3. 288为放大系数比较合适。由图4可以看出，在混合体系中，差示信号与葡萄糖用量的线性相关系数仍能大 于0. 9900，所以双波长测定黑液中还原糖还是比较准确的。由图4中方程可以近似得到差 示信号与葡萄糖含量关系式S2 = 0. 1642c+N2 (N2为常数)。与纯葡萄糖溶液差示信 号方程S1 = 0. 19580^ +^比较，有一定差别，所以应予以校正。由于两方程比例系数比 值约为1. 2，所以取校正系数k = 1. 2，则经校正后差示信号与葡糖关系式为S = k · S2 = 0. I97Oc葡碰+N(N为常数)。若某溶液在520nm处吸光度值为A，在570nm处吸光度值为B，则结合
图4中差示信号与葡萄糖用量关系式，可以得到混合液中葡萄糖含量计算公式
5/^-0.0165 1 ,, —0.0165 ,,
c = —-χ—χΜ = —-χΜ
0.1642 50.821其中c为待测溶液中还原糖浓度，g/L ；S为520nm与570nm处吸光度值经计算得到差示信号，s = K2XA-K1XB ；K2, K1为差示信号放大系数，分别K2 = 5. 338，K1 = 3. 288 ；k为校正系数，1. 2 ；M为溶液稀释倍数，M应取适当值，是A、B介于0. 3 0. 7。第七步、酶解黑液平行样还原糖含量测定为了检测该方法的可靠性，选择一组复合酶用量为8ml离心清液，向各试样中分 别加入相同量葡萄糖，稀释适当倍数，取其中5ml于预先加入5ml pH4. SHAc-NaAc缓冲液， 3mlDNS溶液的比色管中，煮沸5min后迅速冷却后用去离子水定容至25ml。以3mlDNS溶 液定容至25ml溶液为参比，测定溶液520nm及570nm处吸光度值，根据计算公式得到黑液 中还原糖含量。所得结果见表1。表1、不同试样还原糖含量
8
权利要求
一种测定制浆黑液还原糖含量的方法，其特征在于按以下步骤进行操作第一步、3，5 二硝基水杨酸溶液配制，称取6.3g 3，5 二硝基水杨酸和262ml2mol·l 1氢氧化钠溶液加入酒石酸钾钠热溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠搅拌溶解，冷却后定容至1000ml，储存于棕色瓶，放置72h后使用；第二步、木素的提取，取一定量的碱法蒸煮黑液，用稀硫酸调节溶液至pH6，离心分离，取上层液体，再用稀硫酸调至pH 3，再离心分离，取出沉淀物，并用稀硫酸洗涤，然后离心，重复操作2～3次，取离心后沉淀物置于80℃真空干燥箱烘干，用研钵研碎，制得粗木素；第三步、木素的提纯，将粗木素溶于140ml吡啶 醋酸 水体系中，用180ml氯仿萃取，静置4h分层后摇荡，再次分层后，分出下层溶有木素的有机层；上层溶液中加入150ml氯仿再次萃取，摇荡后静置，待分层后分离出下层的有机层；合并两次有机层萃取液，在旋转真空蒸发器中浓缩至95～105ml，移至1000ml无水乙醚中，搅拌使析出沉淀，将沉淀用乙醚洗涤，至无吡啶味为止，置于P2O5的真空干燥器中干燥，得到浅灰色精制木素；第四步、葡萄糖及木素标准溶液配制，定量称取分析纯葡萄糖，用pH 4.8的醋酸 醋酸钠缓冲液配制成1g/L葡萄糖标准溶液；准确称取精制木素，配制成0.05g/ml木素的3，5 二硝基水杨酸溶液，然后用去离子水定容，得0.01g/ml木素标准溶液；第五步、放大系数的确定，通过测定不同木素含量3，5 二硝基水杨酸溶液在波长520nm和570nm处吸光度值，得到木素标准液用量与两波长处吸光度关系曲线，其线性关系方程分别为A520木素＝ε520木素c木素+N1木素，A570木素＝ε570木素c木素+N2木素；通过测定不同葡萄糖含量3，5 二硝基水杨酸溶液在波长520nm和570nm处吸光度值，得到葡萄糖标准液用量与两波长处吸光度关系曲线图，其线性方程分别为A520葡萄糖＝ε520葡萄糖c葡萄糖+N1葡萄糖，A570葡萄糖＝ε570葡萄糖c葡萄糖+N2葡萄糖，得到差示信号S0＝K2(A520木素+A520葡萄糖) K1(A570木素+A570葡萄糖)＝(ε570木素ε520葡萄糖 ε570葡萄糖ε520木素)c葡萄糖+N0；第六步、双波长测定黑液中还原糖含量计算公式的确定，通过计算得到各编号葡萄糖溶液差示信号值S1，作图得到差示信号S1与葡萄糖浓度关系标准曲线，由标准曲线线性计算公式可以近似得到差示信号与葡萄糖含量关系式S1＝ε1c葡萄糖+N1，测定一组即含葡萄糖又含木素的DNS溶液520nm和570nm处吸光度值，并计算出各编号溶液差示信号值S2，得到混合液差示信号与葡萄糖标准溶液关系曲线，得计算公式S2＝ε2c葡萄糖+N2，取校正系数k＝ε2/ε1，经校正后差示信号与葡萄糖关系式为S＝k·S2＝εc葡萄糖+N，则可计算得到还原糖含量与差示信号间计算公式；第七步、黑液中还原糖含量测定，将黑液调pH值至5，加入适量pH4.8醋酸 醋酸钠缓冲液，离心去除其中不溶物，取离心清液，稀释适当倍数，取其中5ml于预先加入5ml pH4.8醋酸 醋酸钠缓冲液，3ml3，5 二硝基水杨酸溶液的比色管中，煮沸5min后迅速冷却后用去离子水定容至25ml。以3ml3，5 二硝基水杨酸溶液定容至25ml溶液为参比，测定溶液520nm及570nm处吸光度值，根据计算公式得到黑液中还原糖含量；其中，酒石酸钾钠溶液是由182g酒石酸钾钠溶于500ml去离子水配制而成的；吡啶 醋酸 水的体系组成为吡啶∶醋酸∶水的体积比为9∶1∶4；N为常数，分别为N、N0、N1、N2、N1木素、N2木素、N1葡萄糖、N2葡萄糖。
全文摘要
本发明提供一种采用3，5-二硝基水杨酸双波长分光光度法测定制浆黑液中还原糖含量的方法。本发明能排除黑液中木素对还原糖含量测定的影响。通过对木素与葡萄糖在3，5-二硝基水杨酸溶液中紫外-可见特定波长区域吸收谱图的分析，结合木素和葡萄糖各波长处吸光度值与浓度比例系数的对比值，确定了测试适宜波长。通过对木素DNS溶液在520nm和570nm吸光度值与木素浓度关系曲线，确定双波长差示信号放大系数。木素葡萄糖溶液差示信号与浓度之间比例系数与未加木素的葡萄糖溶液比例系数之间校正系数为k＝1.2。本发明能反映酶解过程中黑液中还原糖含量变化；测定加入葡萄糖的酶解后黑液中还原糖含量，具有较好的稳定性，测定结果较理想。
文档编号G01N1/34GK101963578SQ20101027998
公开日2011年2月2日 申请日期2010年9月11日 优先权日2010年9月11日
发明者卜令习, 杨瑞丰, 鲁杰 申请人:大连工业大学