专利名称：一种具有抗癌作用的中药组合物及其制备方法和检测方法
技术领域：
本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和检测方法，具体涉及ー种具有抗癌作用的中药组合物及其制备方法及质量检测方法，属中医药技术领域。
背景技术：
癌症是危及人类健康的重大疾病，其致死率呈逐年上升的趋势，它的发生和发展是多因素參与、多基因改变及多阶段发展的复杂病变过程。目前对于癌症的治疗大多采用手术治疗结合放、化疗方法，但是该方法对病人的创伤大，危险性高，且费用昂贵，但疗效却 并不理想。中药作为我国传统防病治病的武器，伴随着近年来逐步深入的研究与探索，在癌症治疗中越来越受到重视。研究表明，在肿瘤防治过程中，中药主要是从提高机体免疫功能、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞转移以及对化疗的减毒增效等方面发挥作用的。本发明所述中药组合物配伍合理，既能调节气血阴阳和脏腑功能，保护骨髓造血功能，又能启动自身防御系统，提高机体免疫力，对于肿瘤的辅助治疗很有益处。

发明内容
本发明的目的在于提供ー种具有抗癌作用的中药组合物。本发明的另ー个目的在于提供该组合物的制备方法。本发明的另ー个目的在于提供该组合物的ロ服液制备方法，该制备方法制备的ロ服液质量高、澄清、含量温度，药效好。本发明的另ー个目的在于提供该组合物的质量检测方法。本发明的目的是通过如下技术方案实现的本发明所述中药组合物由如下原料药制成(按重量份计)
益母草130-150重量份红花15-20重量份花椒15-20重量份
水虫至15-20重量份当归30-40重量份苏木15-20重量份
三棱15-20重量份两头尖15-20重量份川芎15-20重量份
降香15-20重量份香附15-20重量份人参50-55重量份
高良姜15-20重量份姜黄8-15重量份没药15-20重量份
苦杏仁20-30重量份大黄60-80重量份紫苏子15-20重量份
小茴香20-30重量份桃仁20-30重量份五灵脂15-20重量份 虻虫15-20重量份鳖曱130-150重量份丁香15-25重量份
延胡索15-20重量份白芍30-40重量份蒲黄15-20重量份 乳香15-20重量份干漆15-20重量份吴茱萸15-20重量份
阿魏15-20重量份肉桂15-20重量份艾叶15-20重量份
熟地黄30-40重量份。所述中药组合物的原料药优选为
益母草140重量份紅花17.5重量份花椒17.5重量份
水虫至17.5重量份当归35重量份苏木17.5重量份
三棱17.5重量份两头尖17.5重量份川芎17.5重量份 降香17.5重量份香附17.5重量份人参52.5重量份
高良姜17.5重量份姜黄10.5重量ィ分没药17.5重量份
苦杏仁26.25重量份大黄70重量份紫苏子17.5重量份
小茴香26.25重量份桃仁26.25重量五灵脂17.5重量份 虻虫17.5重量份鱉曱140重量份丁香21.25重量份
延胡索17.5重量份白爷35重量份蒲黄17.5重量份
乳香17.5重量份干漆17.5重量份吴茱萸17.5重量份 阿魏17.5重量份肉桂17.5重量份艾叶17.5重量份
熟地黄35重量份。所述花椒为炭花椒、水蛭为制水蛭、三棱为醋炙三棱、香附为醋炙香附、没药为醋炙、苦杏仁为炒苦杏仁、小茴香为盐炒小茴香、五灵脂为醋炙五灵脂、延胡索为醋炙延胡索、蒲黄为炭蒲黄、乳香为醋炙、干漆为煅干漆、吴茱萸为甘草水炙的吴茱萸、艾叶为炙艾叶。上述中药组合物可按常规エ艺加入常规辅料制成片剂、胶囊、ロ服液、丸剂、颗粒剂等临床可接受的剂型。上述本发明中药组合物原料药经提取后，加入下述辅料制备成ロ服液；所述辅料包括矫味剂、甜味剂、稳定化剂、增稠剂、溶解辅助剂、PH调节剂、着色剂、香精；所述矫味剂选自下述中的ー种或几种聚维酮、薄荷脑、甘草酸ニ钾、苹果酸、苹果酸钠、酒石酸、琥珀酸、琥珀酸钠、こ酸、谷氨酸、柠檬酸、柠檬酸钠、葡萄糖酸内酷、氯化钠。所述甜味剂选自下述中的ー种或几种蔗糖、果糖、葡萄糖、乳糖、山梨糖醇、麦芽糖醇、赤藓糖、三氯蔗糖、蜂蜜、糖精、甜菊糖苷提取物、阿巴斯甜、安赛蜜、甜味蛋白、甘草、甜蜜素。稳定剂可选自如下ー种或几种聚维酮、甘油、异抗坏血酸及其盐、依地酸、偏磷酸等。增稠剂可选自如下ー种或几种羧甲基纤维素钠、琼脂、聚维酮、聚こ烯醇、黄原胶。溶解辅助剂可选自如下ー种或几种聚山梨醇酯、聚こニ醇、聚氧こ烯硬化蓖麻油、聚维酮、氢氧化钠、聚山梨酯80。pH调节剂选自如下ー种或几种柠檬酸、柠檬酸钠、乳酸、氢氧化钠、盐酸、苹果酸、苹果酸钠、酒石酸、琥珀酸、こ酸、葡萄糖酸、磷酸等。ロ服液的辅料最优选为1_5重量份聚山梨酯80、1-5重量份甜蜜素。以生药材(原料药)量计算，相当于IOg生药的所述组合物制剂中大黄素、大黄酚的总量不得少于O. 28mg。人參皂苷Rgl、Re总量计不低于100 μ g、人參皂苷Rb1不低于50 μ g ;水苏碱不低于50 μ g ;吴茱萸碱、吴茱萸次碱总量计不低于100 μ g ;芍药苷50 μ g。 中药组合物的ロ服液制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤步骤I :鳖甲加水煎煮2-4次，毎次2-4小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩为鳖甲煎液；步骤2 :当归、川；、姜黄、高良姜、肉桂、丁香、阿魏、降香水蒸气蒸馏提取5-7小时，收集挥发油与蒸馏液，步骤3 :步骤2水蒸气蒸馏提取剩余的药渣与其余原药材加水煎煮2-4次，毎次1-3小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至清膏I,步骤4 :步骤3的清膏I加こ醇至含醇量达60-80%，调节pH值为7. 5 8. 0，静置，滤过,滤液回收こ醇,加水得清膏2，步骤5 :步骤4中的清膏2步骤I的鳖甲煎液，煮沸，放冷，加步骤2的挥发油与蒸馏液及ロ服液的常规辅料，加水搅拌使溶解，静置，滤过，滤液经常规エ艺制成ロ服液；所述步骤2和/或4的静置为0 5°C静置；所述步骤5中加入ロ服液的辅料为1_5重量份聚山梨酯80、1_5重量份甜蜜素。所述制备方法还包括步骤6 :大黄素、大黄酚的总量的含量測定；和/或下述鉴别A、B、C任——种或几种。本发明还提供该组合物ロ服液的制备方法，该方法包括如下步骤鳖甲加水煎煮2-4次，每次2-4小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量；当归、川芎、姜黄、高良姜、肉桂、丁香、阿魏、降香水蒸气蒸馏提取5-7小时，收集挥发油与蒸馏液适量，药渣及其余二十五味加水煎煮2-4次，毎次1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度约I. 15 (50 60°C)的清膏，加こ醇使含醇量达60-80%，调节pH值为7. 5 8.0，静置(O 5°C) 10-40小时，滤过，滤液回收こ醇，加水至相对密度约I. 06 (50 60°C )的清膏，再加入鳖甲煎液，煮沸10-30分钟，放冷，加挥发油与蒸馏液及1-5重量分聚山梨酯80、1-5重量分甜蜜素,加水搅拌使溶解,静置(O 5°C) 24 48小时,滤过,滤液加水至1000体积份，灌封，灭菌，即得；所述体积份与重量份的关系为g/ml。所述中药ロ服液的制备方法优选为
以上三十四味，鳖甲加水煎煮3次，毎次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量；当归、川芎、姜黄、高良姜、肉桂、丁香、阿魏、降香水蒸气蒸馏提取6小时，收集挥发油与蒸馏液适量，药渣及其余二十五味加水煎煮3次，毎次2小吋，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度约I. 15 (50 60°C)的清膏，加こ醇使含醇量达60-80%，调节pH值为7. 5 8. 0，静置24小时，滤过，滤液回收こ醇，加水至相对密度约I. 06 (50 60°C)的清膏，再加入鳖甲煎液，煮沸20分钟，放冷，加挥发油与蒸馏液及2重量分聚山梨酯80、甜蜜素2重量分，カロ水搅拌使溶解，静置24 48小时，滤过，滤液加水至1000体积份，灌封，灭菌，即得。本发明所述组合物ロ服液的制备方法，该方法包括如下步骤选取如下原料药
益母草I40g红花17.5g花椒(炭)17.5g 水蛭(制)17.5g当归35g苏木17.5g 三棱(醋炙)17 5g 两头尖17.5g 川芎17.5g 降香17.5g香附(醋炙)l7.5g 人参52.5g
高良姜17.5g姜黄10.5g没药(醋炙)17.5g
苦杏仁(炒)26.25g 大黄70g紫苏子17.5g
小茴香(盐炒)26.25g 桃仁26.25g五灵脂(醋炙)17.5g
虻虫 17.5g鳖曱 140g丁香 21.25g
延胡索(醋炙)17.5g 白芍35g蒲黄(炭)17.5g 乳香(醋炙)17.5g 干漆(缎)17.5g 吴茱萸(甘草水炙)17.5g 阿魏17.5g肉桂17.5g艾叶(炙)17.5g
熟地黄35g;鳖甲加加9倍水煎煮3次，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至160_200ml ;当归、川；、姜黄、高良姜、肉桂、丁香、阿魏、降香加12倍水，水蒸气蒸馏提取6小时，收集挥发油与蒸馏液40-60ml，药渣及其余二十五味加水煎煮三次，第一次加水12倍量煎煮2小吋，第二、三次分别加水10倍、8倍，煎煮各I. 5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至50 60°C相对密度为I. 15的清膏，加こ醇使含醇量达70%，调节pH值为7. 5 8. 0，O 5°C静置20-30小时,滤过,滤液回收こ醇,加水至50 60°C相对密度为1.06的清膏，再加入鳖甲煎液，煮沸20分钟，放冷，加挥发油与蒸馏液及聚山梨酯80、甜蜜素，加水搅拌使溶解，O 5°C静置24 48小时,滤过,滤液加水,灌封，105°C灭菌60min。本发明药物组合物ロ服液的检测方法包括如下鉴别方法和/或含量測定中的一种或几种鉴别鉴别A :取相当生药材量20_40g的中药组合物ロ服液，加盐酸调pH值至I 2，离心，取上清液，通过强酸性阳离子交换树脂柱上，先用水洗脱，再用l-3mol/L氨溶液洗脱，收集氨溶液洗脱液，蒸干得残渣，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取盐酸水苏碱对照品，加甲醇制成每Iml含O. 5-2mg盐酸水苏碱的对照品溶液；吸取等量的上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇ー盐酸一こ酸こ酯以3-12 :1-5 :0. 5-2的比例为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；鉴 别B :称取相当生药材量20_40g的中药组合物ロ服液，用水饱和的正丁醇提取1-3次，合并正丁醇提取液，蒸干得残渣，残渣加氨试液使溶解，加于大孔吸附树脂柱上，先后分别用氨试液、水、20-40%こ醇洗脱，分别弃去洗脱液；继用60-80%こ醇洗脱，收集洗脱液，蒸干得残渣，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取人參皂苷Re对照品，加甲醇制成姆Iml含O. 2-lmg的对照品溶液；等量吸取上述两种溶液，分别点于同一娃胶G薄层板上，以8-20 2-12 1-5为比例的氯仿ー甲醇一水在10°C以下放置过夜的下层溶液为展开齐U，展开，取出，晾干，喷以硫酸こ醇溶液，加热至斑点显色清晰，置紫外灯下检视；鉴别C :称取含相当于生药材量20_40g ロ服液，用水饱和的正丁醇提取1-3次，合并正丁醇提取液，蒸干得残渣，残渣加甲醇使溶解，加中性氧化铝l_3g，拌匀，蒸干，加于中性氧化铝柱上，用甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每Iml含O. 2-lmg的溶液，作为对照品溶液；吸取等量的两种溶液各 ο μ 1，分别点于同一娃胶G薄层板上,以5-10 :0. 5-2 :1_8 :0. 5-2比例的氯仿ーこ酸こ酷一甲醇ー浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；含量测定方法色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以60^80 40 20甲醇-0.07%磷酸溶液为流动相；检测波长为250 26011111。理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取大黄素对照品、大黄酚对照品加甲醇制成混合溶液；供试品溶液的制备包括如下步骤步骤I :所述组合物ロ服液用水、盐酸、氯仿加热回流提取；步骤2 :回流提取液冷却、静置后得氯仿液和水液；步骤3 :水液再用氯仿提取；步骤4 :合并步骤2、3的氯仿提取液，回收溶剂至干，得残渣，残渣加甲醇使溶解；所述供试品溶液制备步骤I中盐酸的摩尔浓度为2. 5mol/L ;所述供试品溶液制备步骤2中加热回流O. 5-2小时；所述对照品溶液制备步骤3中氯仿提取2-4次；氯仿为分析纯。本发明药物组合物ロ服液的检测方法包括如下方法鉴别鉴别A :称取相当生药材量20_40g的中药组合物ロ服液，加稀盐酸调pH值至I 2，离心，取上清液，通过强酸性阳离子交换树脂柱上，用水洗脱至流出液近无色，弃去水液，再用l-3mol/L氨溶液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸水苏碱对照品，加甲醇制成每Iml含O. 5-2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各IOy 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇ー盐酸一こ酸こ酯(3-12 :1-5 O. 5-2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同顔色的荧光斑点。鉴别B :称取相当生药材量20_40g的中药组合物ロ服液，用水饱和的正丁醇提取1-3次，毎次30ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加氨试液5ml使溶解，加于大孔吸附树脂柱上，用氨试液IOOml洗涤，弃去氨洗脱液，再用水洗脱至中性，弃去水洗脱液，再用20-40%こ醇50ml洗脱，弃去こ醇洗脱液，继用60-80%こ醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取人參皂苷Re对照品，加甲醇制成每Iml含O. 2-lmg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿一甲醇一水(8-20 :2-12 :1-5) 10°C以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸こ醇溶液,在105°C加热至斑点显色清晰，置紫外灯下(365nm)检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。鉴别C :称取含相当于生药材量20_40g ロ服液，用水饱和的正丁醇提取1-3次，每次30ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，加中性氧化铝l-3g，拌匀，蒸干，加于中性氧化铝柱上，用甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每Iml含O. 2-lmg的溶液，作为对照品溶液。吸取上
述两种溶液各10 μ I，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿一こ酸こ酯一甲醇ー浓氨试液(5-10 :0. 5-2 :1-8 :0. 5-2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同顔色的斑点。含量测定方法色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以60^80 40 20甲醇-0.07%磷酸溶液为流动相；检测波长为250 260鹽。理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3000 ；对照品溶液的制备取大黄素对照品、大黄酚对照品加甲醇制成混合溶液；供试品溶液的制备包括如下步骤步骤I :所述组合物ロ服液用水、盐酸、氯仿加热回流提取；步骤2 :回流提取液冷却、静置后得氯仿液和水液；步骤3 :水液再用氯仿提取；步骤4:合并步骤2、3的氯仿提取液，回收溶剂至干，得残渣，残渣加甲醇使溶解。所述供试品溶液制备步骤I中盐酸的摩尔浓度为2. 5mol/L ;氯仿为分析纯。所述供试品溶液制备步骤2中加热回流O. 5-2小时；所述对照品溶液制备步骤3中氯仿提取2-4次。本发明所述中药组合物的检测方法优选包括如下ー种或几种方法鉴别A :称取相当生药材量30g的中药组合物，加稀盐酸调pH值至I 2，离心，取上清液，通过001X7型(732) Na —型强酸性阳离子交换树脂柱(内径2cm，柱高15cm)上，用水洗脱至流出液近无色，弃去水液，再用2mol/L氨溶液120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐酸水苏碱对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇ー盐酸一こ酸こ酯(8 3 :1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同顔色的荧光斑点；鉴别B :称取相当生药材量30g的中药组合物ロ服液，用水饱和的正丁醇提取2次，毎次30ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加氨试液5ml使溶解，加于DlOl型大孔吸附树脂柱(内径I. 5cm，柱高12cm)上，用氨试液IOOml洗涤，弃去氨洗脱液，再用水洗脱至中性，弃去水洗脱液，再用30%こ醇50ml洗脱，弃去30%こ醇洗脱液，继用70%こ醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取人參皂苷Re对照品，加甲醇制成姆Iml含O. 5mg的溶液,作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各 ομ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿一甲醇一水(13 7 :2)10°C以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸こ醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，置紫外灯下(365nm)检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同顔色的荧光斑点；鉴别C :称取含相当于生药材量30g的中药组合物ロ服液，用水饱和的正丁醇提取2次，毎次30ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，加中性氧化铝2g，拌匀，蒸干，加于中性氧化铝柱(100 200目，3g，内径Icm)上，用甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每Iml含O. 5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿一こ酸こ酯ー甲醇ー浓氨试液(8 1 4 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同顔色的斑点； 含量测定方法照高效液相色谱法測定，色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-O. 07%磷酸溶液(70 30)为流动相；检测波长为254nm ;理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3000 ;对照品溶液的制备取大黄素对照品、大黄酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml分别含4μ g、8y g的混合溶液，即得；供试品溶液的制备量取相当于生药材2g的所述组合物ロ服液,加水7ml与盐酸Iml,再加氯仿IOml,加热回流I小时，立即冷却，转移分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，静置，分取氯仿液，水液再用氯仿提取3次，毎次IOml，合并氯仿提取液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，測定，即得。本发明组合物用于治疗原发性肝癌、肺癌、胃肠道癌、乳腺癌、妇科癌；本发明组合物含量測定方法具有专属性強、快速、简便。本发明含量測定方法中，在水解时加入了有机溶剂，使水解后的大黄素、大黄酚溶解更加完全，从而克服了现有技术由于被测成分粘贴瓶壁和沉淀结块导致提取不完全的缺点，使含量測定结果更加准确、科学，具有明显的效果。实验例I :含量测定实验(一)样品水解方法的考察I样品与试剂样品实施例I制备的ロ服液，批号060502、060503、060504 ;由成都地奥集団天府
药业股分有限公司提供。大黄素、大黄酚对照品批号大黄素110756-200110、大黄酚110796-200311，由中国药品生物制品检定所提供，供含量測定用。试剂除甲醇为色谱纯外，其余试剂均为分析纯。2试验方法2. I色谱条件及系统适应性实验高效液相色谱仪Alltech426，UVIS200紫外检测器；色谱柱迪马C18柱，5μ，150*4. 6mm ;柱温35°C ;流动相甲醇-O. 07%磷酸溶液(70 30);检测波长为254nm ;流速lml/min ;理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。
2. 2对照品溶液的制备精密称取在硅胶干燥器中干燥至恒重的大黄素、大黄酚对照品3. 83mg、8. 72mg,置IOOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。(每Iml中含大黄素3. 83 μ g、大黄酚8. 72 μ g)。2. 3供试品溶液制备方法I :精密量取本品2ml，加2. 5mol/L硫酸溶液8ml，加热回流2小时，放冷，用こ醚振摇提取4次(30ml、15ml、15ml、15ml),合并こ醚液,用无水硫酸钠脱水,滤过,滤器用少量こ醚洗漆，洗液并入滤液中，低温缓慢蒸干こ醚，残渣用甲醇-丙酮(1:1)溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇-丙酮(1:1)至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。方法2 :精密量取本品2ml，置于25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2. 5mol/L硫酸溶液10ml，超声处理5min,再加氯仿IOml,加热回流Ih,放冷,分取氯仿层，酸液用氯仿提取两次,姆次IOml,合 并氯仿液，以无水硫酸钠脱水，氯仿液置水浴上蒸干，残渣加甲醇适量微热使溶解，移至5ml量瓶中，并加甲醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。方法3 :精密量取本品2ml，加水7ml和盐酸1ml，水浴回流Ih,放冷，用こ醚振摇提取3次(20、15、15ml)，合并提取液，用少量无水硫酸钠脱水，滤过，滤器用少量こ醚洗涤，洗液并入滤液中，低温蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇定容，摇匀，离心，即得供试品溶液。方法4 :精密量取本品2ml，加水7ml与盐酸1ml，再加氯仿10ml，加热回流I小时，立即冷却，转移分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，静置，分取氯仿液，水液再用氯仿提取3次，毎次IOml，合并氯仿提取液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2. 4測定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。3 结果按照方法4制得的供试品溶液所测得的大黄素和大黄酚的含量明显高于其他三组，故采用该方法作为含量測定供试品溶液制备的方法。见表I表I水解方法的比较
水解 'へ法大黄素和大黄酚总含量(mg/
__文)_
方法 I0.3328
_1] 方法 20.5326
方法 30.5003
方法 40.5816(ニ)方法学考察I线性考察分别精密量取大黄素(38. 3 μ g/ml)、大黄酚(87. 2 μ g/ml)对照品溶液I. 0,2. O、3.0、4. 0、5. 0、6. Ομ 1，进样，记录色谱图，测定其峰面积，结果见表4。并以峰面积值(Y)对进样量(X)进行回归，得大黄素标准曲线方程为Υ=2865509. 1Χ+7066. 3，r=0. 9998 ;大黄酚标准曲线方程为Y=3891218. 2X+265424. 9，r=0. 9998。并以峰面积值(A)对进样量(C)作图，得一直线，结果表明大黄素在O. 0383、. 2298 μ g范围内线性良好，大黄酚在O. 0872、. 5232 μ g范围内线性良好。表2大黄素、大黄酚的线性考察

权利要求
1.一种具有抗癌作用的中药组合物，其特征在于该中药组合物是由如下原料药制成 益母草130-150重量份红花15-20重量份花椒15-20重量份 水蛭15-20重量份当归30-40重量份苏木15-20重量份 三棱15-20重量份两头尖15-20重量份川芎15-20重量份 降香15-20重量份香附15-20重量份人参50-55重量份 高良姜15-20重量份姜黄8-15重量份没药15-20重量份 苦杏仁20-30重量份大黄60-80重量份紫苏子15-20重量份 小茴香20-30重量份桃仁20-30重量份五灵脂15-20重量份 虻虫15-20重量份鳖曱130-150重量份丁香15-25重量份 延胡索15-20重量份白芍30-40重量份蒲黄15-20重量份 乳香15-20重量份干漆15-20重量份吴茱萸15-20重量份 阿魏15-20重量份肉桂15-20重量份艾叶15-20重量份 熟地黄30-40重量份。
2.如权利要求I所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物是由如下原料药制成 益母草140重量份红花17.5重量份炭制花椒17.5重量份 制水蛭17.5重量份当归35重量份苏木17.5重量份 醋炙三棱17.5重量份两头尖17.5重量份川芎17.5重量份 降香17.5重量份醋炙香附17.5重量份人参52.5重量份 高良姜17.5重量份姜黄10.5重量份醋炙没药17.5重量份 炒苦杏仁26.25重量份大黄70重量份紫苏子17.5重量份 盐炒小茴香26.25重量份桃仁26.25重量份 醋炙五灵脂17.5重量份 虻虫17.5重量份鳖甲140重量份丁香21.25重量份 醋炙延胡索17.5重量份白芍35重量份炭蒲黄17.5重量份 醋炙乳香17.5重量份煅干漆17.5重量份 甘草水炙吴茱萸17.5重量份 阿魏17.5重量份肉桂17.5重量份炙艾叶17.5重量份 熟地黄35重量份； 以原料药量计算，相当于IOg原料药的所述组合物中大黄素、大黄酚的总量不少于0. 28mg0
3.如权利要求I或2所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物原料药经提取后，加入下述辅料制备成口服液；所述辅料包括矫味剂、甜味剂、稳定化剂、增稠剂、溶解辅助齐U、PH调节剂、着色剂、香精中的一种或几种；所述矫味剂选自下述中的一种或几种聚维酮、薄荷脑、甘草酸二钾、苹果酸、苹果酸钠、酒石酸、琥珀酸、琥珀酸钠、乙酸、谷氨酸、柠檬酸、柠檬酸钠、葡萄糖酸内酯、氯化钠；所述甜味剂选自下述中的一种或几种蔗糖、果糖、葡萄糖、乳糖、山梨糖醇、麦芽糖醇、赤藓糖、三氯蔗糖、蜂蜜、糖精、甜菊糖苷提取物、阿巴斯甜、安赛蜜、甜味蛋白、甘草、甜蜜素；稳定剂可选自如下一种或几种聚维酮、甘油、异抗坏血酸及其盐、依地酸、偏磷酸；增稠剂选自如下一种或几种羧甲基纤维素钠、琼脂、聚维酮、聚乙烯醇、黄原胶；溶解辅助剂选自如下一种或几种聚山梨醇酯、聚乙二醇、聚氧乙烯硬化蓖麻油、聚维酮、氢氧化钠、聚山梨酯80 ;pH调节剂选自如下一种或几种柠檬酸、柠檬酸钠、乳酸、氢氧化钠、盐酸、苹果酸、苹果酸钠、酒石酸、琥珀酸、乙酸、葡萄糖酸、磷酸。
4.如权利要求I或2所述的中药组合物的口服液制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤 步骤I :鳖甲加水煎煮2-4次，每次2-4小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩为鳖甲煎液； 步骤2 :当归、川弯、姜黄、高良姜、肉桂、丁香、阿魏、降香水蒸气蒸馏提取5-7小时，收集挥发油与蒸馏液， 步骤3 :步骤2水蒸气蒸馏提取剩余的药渣与其余原药材加水煎煮2-4次，每次1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至清膏1， 步骤4 :步骤3的清膏I加乙醇至含醇量达60-80%，调节pH值为7. 5 8. 0，静置，滤过，滤液回收乙醇，加水得清膏2， 步骤5 :步骤4中的清膏2步骤I的鳖甲煎液，煮沸，放冷，加步骤2的挥发油与蒸馏液及口服液的常规辅料，加水搅拌使溶解，静置，滤过，滤液经常规工艺制成口服液； 所述步骤4和/或步骤5的静置温度为0 5°C。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述步骤5中加入口服液的辅料为1-5重量份聚山梨酯80、1-5重量份甜蜜素。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于该方法还包括步骤6:大黄素、大黄酚的总量的含量测定； 所述大黄素、大黄酚的总量的含量测定方法为 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以6(T80 4(T20甲醇-0. 07%磷酸溶液为流动相；检测波长为25(T260nm。理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3000 ； 对照品溶液的制备取大黄素对照品、大黄酚对照品加甲醇制成混合溶液； 供试品溶液的制备包括如下步骤步骤a :所述组合物制剂用水、盐酸、氯仿加热回流提取；步骤b :回流提取液冷却、静置后得氯仿液和水液；步骤c :水液再用氯仿提取；步骤d :合并步骤b、c的氯仿提取液，回收溶剂至干，得残渣，残渣加甲醇使溶解。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于所述大黄素、大黄酚的总量的含量测定方法中，所述供试品溶液制备中步骤a中盐酸的摩尔浓度为2-3mol/L ;所述供试品溶液制备步骤b中加热回流0. 5-2小时；所述对照品溶液制备步骤c中氯仿提取2-4次。
8.如权利要求4所述方法制备的中药组合物口服液的检测方法，其特征在于该方法主要包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种鉴别方法 鉴别A :取相当生药材量20-40g的中药组合物口服液，加盐酸调pH值至I 2，离心，取上清液，通过强酸性阳离子交换树脂柱上，先用水洗脱，再用l-3mol/L氨溶液洗脱，收集氨溶液洗脱液，蒸干得残渣，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取盐酸水苏碱对照品，加甲醇制成每Iml含0. 5-2mg盐酸水苏碱的对照品溶液；吸取等量的上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇一盐酸一乙酸乙酯以3-12 :1-5 :0. 5-2的比例为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液； 鉴别B :称取相当生药材量20-40g的中药组合物口服液，用水饱和的正丁醇提取1-3次，合并正丁醇提取液，蒸干得残渣，残渣加氨试液使溶解，加于大孔吸附树脂柱上，先后分别用氨试液、水、20-40%乙醇洗脱，分别弃去洗脱液；继用60-80%乙醇洗脱，收集该洗脱液，蒸干得残渣，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每Iml含0. 2-lmg的对照品溶液；等量吸取上述两种溶液，分别点于同一娃胶G薄层板上，以8-20 :2-12 :1-5为比例的氯仿一甲醇一水在10°C以下放置过夜的下层溶液为展开齐U，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置紫外灯下检视； 鉴别C :称取含相当于生药材量20-40g 口服液，用水饱和的正丁醇提取1-3次，合并正丁醇提取液，蒸干得残渣，残渣加甲醇使溶解，加中性氧化铝l_3g，拌匀，蒸干，加于中性氧化铝柱上，用甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每Iml含0. 2-lmg的溶液，作为对照品溶液；吸取等量的两种溶液各10 ii I,分别点于同一娃胶G薄层板上，以5-10 :0. 5-2 :1-8 :0. 5-2比例的氯仿一乙酸乙酯一甲醇一浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰； 含量测定方法 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以6(T80 4(T20甲醇-0. 07%磷酸溶液为流动相；检测波长为25(T260nm ;理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3000 ； 对照品溶液的制备取大黄素对照品、大黄酚对照品加甲醇制成混合溶液； 供试品溶液的制备包括如下步骤步骤I :所述组合物口服液用水、盐酸、氯仿加热回流提取；步骤2 :回流提取液冷却、静置后得氯仿液和水液；步骤3 :水液再用氯仿提取；步骤4 :合并步骤2、3的氯仿提取液，回收溶剂至干，得残渣，残渣加甲醇使溶解；所述供试品溶液制备步骤I中盐酸的摩尔浓度为2. 5mol/L ;所述供试品溶液制备步骤2中加热回流.0.5-2小时；所述对照品溶液制备步骤3中氯仿提取2-4次。
9.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于该方法主要包括如下步骤 鉴别 鉴别A :称取相当生药材量20-40g的中药组合物口服液，加稀盐酸调pH值至I 2，离心，取上清液，通过强酸性阳离子交换树脂柱上，用水洗脱至流出液近无色，弃去水液，再用.l-3mol/L氨溶液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐酸水苏碱对照品，加甲醇制成每Iml含0. 5-2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述两种溶液各10 V- 1，分别点于同一娃胶G薄层板上，以3-12 :1-5 :0. 5-2的比例的正丁醇一盐酸一乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； 鉴别B :称取相当生药材量20-40g的中药组合物口服液，用水饱和的正丁醇提取1-3次，每次30ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加氨试液5ml使溶解，加于大孔吸附树脂柱上，用氨试液IOOml洗涤,弃去氨洗脱液,再用水洗脱至中性,弃去水洗脱液,再用20-40%乙醇50ml洗脱，弃去乙醇洗脱液，继用60-80%乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每Iml含0. 2-lmg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述两种溶液各10 yl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以8-20 :2-12 :1-5比例的氯仿一甲醇一水在10°C以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的突光斑点； 鉴别C :称取含相当于生药材量20-40g 口服液，用水饱和的正丁醇提取1-3次，每次30ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，加中性氧化铝l_3g，拌匀，蒸干，加于中性氧化铝柱上，用甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每Iml含0. 2-lmg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述两种溶液各10 V- 1，分别点于同一娃胶G薄层板上，以5-10 :0. 5-2 :1-8 :0. 5-2比例的氯仿一乙酸乙酯一甲醇一浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 含量测定方法 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以6(T80 4(T20甲醇-0. 07%磷酸溶液为流动相；检测波长为25(T260nm。理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3000 ； 对照品溶液的制备取大黄素对照品、大黄酚对照品加甲醇制成混合溶液； 供试品溶液的制备包括如下步骤步骤I :所述组合物口服液用水、盐酸、氯仿加热回流提取；步骤2 :回流提取液冷却、静置后得氯仿液和水液；步骤3 :水液再用氯仿提取；步骤4 :合并步骤2、3的氯仿提取液，回收溶剂至干，得残渣，残渣加甲醇使溶解；所述供试品溶液制备步骤I中盐酸的摩尔浓度为2. 5mol/L ;氯仿为分析纯；所述供试品溶液制备步骤2中加热回流0. 5-2小时；所述对照品溶液制备步骤3中氯仿提取2-4次； 测定法分别等量吸取对照品溶液与供试品溶液1，注入液相色谱仪，测定，即得。
10.如权利要求I所述的中药组合物，其特征在于制备口服液的辅料选用1-5重量份聚山梨酯80、1-5重量份甜蜜素。
全文摘要
本发明公开了一种具有抗癌作用的药物组合物及其制备工艺和质量检测方法，该药物组合物由益母草、人参、白芍等三十四味中药组成，通过煎煮、水蒸气蒸馏、醇沉等方法，使其有效成分充分发挥。同时本发明还提供了该药物组合物的含量测定方法，该方法专属性强，精密度、稳定性、重复性良好。
文档编号G01N30/88GK102657823SQ20121017232
公开日2012年9月12日 申请日期2012年5月30日 优先权日2011年12月1日
发明者杨胜玉, 汤美健, 罗海龙, 钟强, 陈勇 申请人:成都地奥集团天府药业股份有限公司