专利名称：一种用于输血筛查联合检测的磁珠免疫层析试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型属于免疫层析检测技术领域，特别涉及一种用于输血筛查联合检测的磁珠免疫层析试剂盒。
背景技术：
こ型肝炎、丙型肝炎、梅毒和艾滋病是四种与血液安全相关的常见传染性疾病，此四种疾病在我国的发病率逐年上升，近年来已经占到传染病总发病数的近30%，给社会和人民生活带来了极大危害。为防止血液传染病给血液安全带来的威胁，我国卫生部规定，献血人员必须检查こ型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒抗体、艾滋病抗体及梅毒螺旋体抗体。世界卫生组织统计，全世界平均每年每人供血SmL才能满足临床用血需要，据此估计，我国姆年需有5200万人次献血方可满足我国的临床用血需要。而我国的现状是姆年约有1000万人次献血。所有用血都需检查上述血液传染病。因此我国的献血筛查具有巨大的市场空间。此外,各种形式的体检,如高考、征兵、招生体检及特殊从业人员体检都与要检查血液中的上述几种传染病。自从二十世纪八十年代，侧向免疫层析技术发展之初，这项技术就被广泛的接受。主要是因为其实验设计的简便性侧向免疫层析产品具有小而便于携帯的优势，而且大多数产品不需要额外的试剂去实现结果，还有液态样品直接可以用于测试，测试结果也能快速简便的读取，而且经常不需要任何仪器的辅助。其強大的功能在于可以将多个样品同时在同一个产品上測量。其容易和其他技术结合起来综合分析，如警察可以再路边上用ー个小型仪器同时测量药物和酒精超标情況。免疫层析试纸条的制作相对容易且成本低、材料成分的改进，加工仪器的改进，更加注意生产质量等都可以增加可信度，精确性。然而，不断涌现的对定量的结果和敏感性的要求对这项技术的提出了更大的挑战。磁性纳米颗粒的出现使得这ー技术得到了快速的发展，借助小型仪器对试纸条上免疫磁珠微量磁信号的检测从而对样品实行定量检测，大大提高了检测的灵敏度，使得这ー技术得到认可。纳米磁珠免疫层析检测试剂盒检测的基本原理如下利用纳米磁珠标记ー种抗原或抗体，成为免疫磁珠，在NC膜上包被相应的配对的抗原或抗体，检测时当样品中含有相应的抗体或抗原时，免疫磁珠会和样品中的抗原或抗体结合形成复合物，然后在NC膜上层祈，再被捕获线上的抗体或抗原捕获，聚集在检测线上，数分钟后，再通过MICT磁信号检测仪测定检测线上捕获磁珠的含量实现结果的判定。磁珠免疫层析试纸条的最大特点是可以通过MICT磁信号检测仪读取磁珠含量，定量检测样本中分析物的含量，而不只是像传统的胶体金一祥只能通过肉眼观察或评价其顔色深浅，因此使得结果更精确灵敏，数据客观，易于读取、保存记录
实用新型内容
[0007]本实用新型解决的技术问题在于提供ー种用于输血筛查联合检测的磁珠免疫层析试剂盒，将超顺磁性纳米颗粒作为标记物，既可以定性又可以定量；并将多种检测集中于ー个试纸条上，一次样就可以进行多项检测，具有简便快速、定量、实时检测的优势。本实用新型是通过以下技术方案来实现ー种用于输血筛查联合检测的磁珠免疫层析试剂盒，包括底板，底板上设有免疫层析分离垫，在免疫层析分离垫的一端顺次搭接有免疫磁珠结合垫和样品垫，在免疫层析分离垫的另一端设有吸水垫；所述的免疫磁珠结合垫是在玻璃纤维素膜或无纺布上附着与抗原或抗体相偶联的纳米磁珠，抗原或抗体包括抗HBsAg抗体、HCV抗原，HIV抗原和TP抗原，通过链亲和 素-生物素偶联在纳米磁珠的表面；所述的免疫层析分离垫是在硝酸纤维素膜上间隔2 5mm设置检测线T1、T2、T3、Τ4，以及质控线C线；Tl线上吸附有抗HBsAg抗体，Τ2线上吸附有HCV抗原，Τ3线上吸附有HIV抗原，Τ4线上吸附有TP抗原，C线上吸附有生物素化的牛血清白蛋白。所述的免疫层析分离垫上还覆盖有一层保护膜或标志膜。所述的免疫磁珠结合垫和样品垫搭接在靠近检测线的一端，吸水垫搭接在靠近质控线的一端。所述的偶联抗HBsAg抗体、HCV抗原，HIV抗原和TP抗原的纳米磁珠的数量比为
I I I Io所述的底板为PVC板，样品垫为玻璃纤维素膜或无纺布，纳米磁珠为超顺磁性纳米磁珠。与现有技术相比，本实用新型具有以下有益的技术效果I)本实用新型通过对免疫层析试剂盒的改进，尤其是对免疫磁珠结合垫和免疫层析分离垫的改进，将四种检测物引入到同一个试纸条，实现了一次加样ー个试纸条显色，一次检测四种疾病，大大提高了检测效率，并降低了检测成本。2)本实用新型通过对免疫层析试剂盒的纳米磁珠及其与抗原或抗体的结合方式进行改迸，所使用的超顺磁性纳米磁珠不受其他有色杂质干扰，通过高灵敏度磁性检测仪测量结合在免疫磁性复合物上的微粒所产生的局部磁场效应，进而得出所测分析物的定量結果，并使检测下限高于同类目測法10 1000倍；而链亲和素-生物素系统是ー种具有亲和力高、灵敏度高、特异性强、稳定性好的成熟的生物信号放大标记技木。3)本实用新型提供的免疫层析试剂盒的检测结果，克服了主观观察顔色的缺点，使得判断结果具有客观，准确，更值得信赖；而且其检测结果稳定，实验结果可以保存数月至数年，有利于提供复检的机会并易于保存原始数据。4)本实用新型提供的免疫层析试剂盒其成本低，操作简单，检测仪器也容易携帯，检测灵敏度高，因此可以推广于医院，血站及边远地区卫生条件较差的単位。既可以单人份检测，也可批量检測，对于输血筛查及各种重大疾病的检测都具有重要而远大的意义。

图I为磁珠免疫层析试剂盒的侧视图；图2为磁珠免疫层析试剂盒的俯视图。[0023]其中I为样品垫；2为免疫磁珠结合垫；3为免疫层析分离垫；4为检测线Tl ;5为检测线T2 ；6为检测线T3 ；7为检测线T4 ；8为质控线C ；9为吸水垫；10为底板。
具体实施方式
以下结合附图对本实用新型做进ー步详细描述，所述是对本实用新型的解释而不是限定。參见图I、图2,—种用于输血筛查联合检测的磁珠免疫层析试剂盒,包括底板10,底板10上设有免疫层析分离垫3，在免疫层析分离垫3的一端顺次搭接有免疫磁珠结合垫2和样品垫1，在免疫层析分离垫3的另一端设有吸水垫9 ;并且免疫磁珠结合垫2和样品垫I搭接在靠近检测线的一端，吸水垫9搭接在靠近质控线的一端。免疫层析分离垫3上还覆盖有一层保护膜或标志膜，以起到保护作用；·所述的免疫磁珠结合垫2是在玻璃纤维素膜或无纺布上附着与抗原或抗体相偶联的纳米磁珠，抗原或抗体包括抗HBsAg抗体、HCV抗原，HIV抗原和TP抗原，通过链亲和素-生物素偶联在纳米磁珠的表面；所偶联抗HBsAg抗体、HCV抗原，HIV抗原和TP抗原的纳米磁珠的数量比为1:1:1:1;所述的免疫层析分离垫3是在硝酸纤维素膜上间隔2 5mm设置检测线Tl、T2、T3、T4 (4 7)，以及质控线C线8 ;T1线上吸附有抗HBsAg抗体，T2线上吸附有HCV抗原，T3线上吸附有HIV抗原，T4线上吸附有TP抗原，C线上吸附有生物素化的牛血清白蛋白；其中T1、T2、T3、T4所吸附的四种抗体或抗原，与免疫磁珠结合垫上所吸附的抗体或抗原的结构并不相同。下面说明各个组件部分的制备及磁珠免疫层析试剂盒的组装I、样品垫的处理将玻璃纤维膜用作样品垫，在样品垫处理液中浸泡30min后取出在室温下干燥后放入自封袋里保存备用。样品垫处理液1%-5%的triton X100,O. 1-1 %的PVP，O. 02M、PH7-9的磷酸盐缓冲液。2、以超顺磁性纳米磁珠作为纳米磁珠，其表面偶联有链亲和素的修饰，通过与生物素化的抗体或抗原混合反应后，使得抗体或抗原牢固地偶连到磁珠的表面。生物素化抗原或抗体的制备将抗原或抗体与预活化的生物素以I : 10的比例混合，室温下反应I小时，并用O. 02M，pH7. O 7. 4的PBS于4°C透析过夜，加入等体积甘油后-20°C保存备用。生物素化抗原与链亲和素化磁纳米颗粒的偶联方法为2mg链亲和素化纳米颗粒溶液中加入生物素化抗原150 μ g，在垂直旋转混合仪上反应30min，然后用500 μ I保存缓冲液保存。3、免疫结合垫的制备将制备好的四种免疫磁珠等体积混合，用喷点仪均匀喷于玻璃纤维膜或无纺布上，在20 25°C干燥条件下干燥2 5小时，制成免疫结合垫。4、免疫层析分离垫的制备以O. 01M、pH 7. 4的磷酸盐缓冲液(PBS)分别将抗HBsAg抗体、HCV抗原，HIV抗原、TP抗原和生物素化牛血清白蛋白(BSA)配置成2mg/mL的溶液，并用喷膜仪在NC膜上以2 μ 1/cm的量分别划线作为Tl、T2、T3、T4和C线，两条线间距为2-3mm，划线后在37°C干燥30min。5、磁珠免疫层析试剂盒的组装[0037]在干燥的室内，温度20-25 V，湿度小于30 %，将已包被好的NC膜放在PVC板的中部粘贴，在NC膜T线ー侧搭接免疫磁珠垫(2mm)粘贴，在免疫磁珠垫另ー侧搭接样品垫(3_)，在NC膜的另ー侧搭接吸水垫(2_);最上面可贴ー层标志膜，用来保护试纸条。样品的检测及结果的显示将被检血清平衡至室温，将磁珠免疫层析试剂盒平放，在样品垫上加入80 100 μ I被检样品，将溶解结合垫上的标记好的磁珠，并在NC膜上发生层析，然后在5 IOmin内用磁力检测仪(MICT)检测试纸条特定位置上的磁信号，根据磁信号得出待测样品中各种病毒蛋白的含量，或直接用肉眼观测条带颜色的深浅，从而判断是否感染了其中的ー种或者几种传染性疾病。
权利要求1.ー种用于输血筛查联合检测的磁珠免疫层析试剂盒，其特征在于，包括底板(10)，底板(10)上设有免疫层析分离垫(3)，在免疫层析分离垫(3)的一端顺次搭接有免疫磁珠结合垫(2)和样品垫(I)，在免疫层析分离垫(3)的另一端设有吸水垫(9)； 所述的免疫磁珠结合垫(2)是在玻璃纤维素膜或无纺布上附着与抗原或抗体相偶联的纳米磁珠，抗原或抗体包括抗HBsAg抗体、HCV抗原，HIV抗原和TP抗原，通过链亲和素-生物素偶联在纳米磁珠的表面； 所述的免疫层析分离垫(3)是在硝酸纤维素膜上间隔2 5mm设置检测线Tl、T2、T3和T4(4 7)，以及质控线C线⑶；T1线(4)上吸附有抗HBsAg抗体，T2线(5)上吸附有HCV抗原，T3线(6)上吸附有HIV抗原，T4线(7)上吸附有TP抗原，C线⑶上吸附有生物素化的牛血清白蛋白。
2.如权利要求I所述的用于输血筛查联合检测的磁珠免疫层析试剂盒，其特征在干，所述的免疫层析分离垫(3)上还覆盖有一层保护膜或标志膜。
3.如权利要求I所述的用于输血筛查联合检测的磁珠免疫层析试剂盒，其特征在干，所述的免疫磁珠结合垫(2)和样品垫(I)搭接在靠近检测线的一端，吸水垫(9)搭接在靠近质控线的一端。
4.如权利要求I所述的用于输血筛查联合检测的磁珠免疫层析试剂盒，其特征在于，所述的偶联抗HBsAg抗体、HCV抗原，HIV抗原和TP抗原的纳米磁珠的数量比为I I I I0
5.如权利要求I所述的用于输血筛查联合检测的磁珠免疫层析试剂盒，其特征在干，所述的底板为PVC板，样品垫为玻璃纤维素膜或无纺布，纳米磁珠为超顺磁性纳米磁珠。
专利摘要本实用新型公开了一种用于输血筛查联合检测的磁珠免疫层析试剂盒，包括底板，底板上设有免疫层析分离垫，在免疫层析分离垫的一端顺次搭接有免疫磁珠结合垫和样品垫，在免疫层析分离垫的另一端设有吸水垫；所述的免疫磁珠结合垫是在玻璃纤维素膜或无纺布上附着与抗原或抗体相偶联的纳米磁珠，抗原或抗体包括抗HBsAg抗体、HCV抗原，HIV抗原和TP抗原，通过链亲和素-生物素偶联在纳米磁珠的表面；所述的免疫层析分离垫是在硝酸纤维素膜上间隔2～5mm设置检测线及质控线C线。将四种检测物引入到同一个试纸条，实现了一次加样一个试纸条显色，一次检测四种疾病，大大提高了检测效率，并降低了检测成本。
文档编号G01N33/576GK202453358SQ20112002857
公开日2012年9月26日 申请日期2011年1月29日 优先权日2011年1月29日
发明者刘永兰, 包晗, 孙建斌, 梁平, 海春旭, 郭晏海, 雷小英, 颜真 申请人:中国人民解放军第四军医大学