一种同时测定酒花中七种黄酮类物质的方法
【专利摘要】本发明公开了一种同时检测酒花中七种黄酮类物质的方法，属于化学分析检测领域。本发明利用反相高效液相色谱同时检测酒花中黄腐酚、异黄腐酚、6-异戊二烯基黄酮、8-异戊二烯基黄酮、六甲氧基黄酮、山奈酚3-O-芸香糖苷、槲皮素共7种物质。本发明的方法尤其适用于检测酒花中黄酮类物质含量的变化关系、检测啤酒生产过程中黄酮类物质的变化，以及考察啤酒的抗氧化功效及营养价值。本发明方法稳定性和重现性好，操作简单、准确可靠。
【专利说明】一种同时测定酒花中七种黄酮类物质的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种同时检测酒花中七种黄酮类物质的方法，尤其是一种采用反相高效液相色谱同时检测酒花中黄腐酚、异黄腐酚等七种黄酮类物质的方法，属于化学分析检测领域。
【背景技术】
[0002]酒花同酿造用水、麦芽、酵母并称为啤酒酿造的四大原料。相比之下，尽管酒花在啤酒中的添加量很少，但其对于啤酒最终的品质却有着很大的影响，主要体现在改善啤酒风味、提闻啤酒的非生物稳定性、提闻营养价值二个方面。
[0003]相关研究显示，与添加酒花的啤酒相比，未添加酒花的啤酒带有明显的不愉快麦芽风味，同时甜味、乙醇味过于浓厚，整体感官风味质量较差。更值得关注的是，酒花是很多天然产物的重要来源，黄酮即为其中重要的一种。黄酮隶属于植物多酚物质，具有重要的抗氧化性和金属螯合性质，药理学和生物学特性显著，对提高啤酒的非生物稳定性和营养价值方面有着很大的研究意义和价值。除酒花外，水果、蔬菜、茶叶、可可粉等也是黄酮类物质的重要来源，至今，已有4000种黄酮类物质被发现和鉴定，但是研究表明，酒花是目前发现的天然含异戊二烯基黄酮的唯一来源。在人类的饮食中，主要通过饮用啤酒来摄取这类黄酮物质。
[0004]为进一步研究酒花中的黄酮类物质，首先要建立准确的含量检测方法。酒花中的重要功能成分，例如苦味酸、单酚等已经建立了较为成熟的液相检测方法，而对于多种黄酮类物质的同时检测，并没有高效且精确的方法。因此为便于监测啤酒的发酵过程，通过该类黄酮物质的含量来考察啤酒的抗氧化功效及营养价值，急需建立高效精确的液相检测方法。

【发明内容】

[0005]本发明的目的是提供一种同时检测酒花中七种黄酮类物质的方法，尤其是一种采用反相高效液相色谱同时检测酒花中黄腐酚、异黄腐酚等七种黄酮类物质的方法。
[0006]所述七种黄酮类物质是黄腐酚、异黄腐酚、6-异戊二烯基黄酮、8-异戊二烯基黄酮、六甲氧基黄酮、山奈酚3-0-芸香糖苷和槲皮素。
[0007]所述方法包括如下步骤:
[0008]a.酒花样品制备:酒花颗粒样品经粉碎磨成粉末状后，精确称量Ig酒花粉末加入7mL无水乙醚摇动15min后超声波5min, 1500 Xg离心IOmin,去除上清液,再加入20mL50%(v/v)甲醇溶液摇动15min后超声60min, 1500 X g离心IOmin,上清液经0.45 μ m微孔滤膜过滤，存于样品瓶中准备进样。
[0009]b.标样制备:精确称取黄酮标准品0.0OlOg用色谱级甲醇充分溶解，定容到10mL，按照需要稀释成不同浓度，充分混匀，用0.45 μ m有机滤膜过滤，冷冻保存备用，准备进样。
[0010]C.色谱条件如下:[0011]色谱柱:ZorbaxEclipseXDB-C18(4.6 X 250mm, 5m)；
[0012]流动相:有机B相为乙腈；无机A相为含有甲酸0.1% (v/v)的水溶液；
[0013]进样体积10 μ L，流速 0.8mL/min，柱温 30°C ；
[0014]检测波长:280nm及 370nm ；
[0015]采用梯度洗脱方法，洗脱程序为:0-20min，25%B-80%B；20-25min,80%B-100%B ；25-28min,100%B-100%B ;28_30min,100%B_25%B。
[0016]本发明提供的检测方法可将酒花中的黄腐酚、异黄腐酚、6-异戊二烯基黄酮、8-异戊二烯基黄酮、六甲氧基黄酮、山奈酚3-0-芸香糖苷和槲皮素这7种物质一次性分离开，操作简单、准确可靠，节省时间。此外，由于黄酮类物质种类繁多、在酒花中含量较低，本方法相比其他黄酮检测方法，对七种化合物都能获得较好的分离效果。
【专利附图】

【附图说明】
[0017]图1是黄酮标准样品色谱图；1，山奈酚3-0芸香糖苷；2，槲皮素；3，异黄腐酚；4，六甲氧基黄酮；5，8-异戊二烯基黄酮；6，6-异戊二烯基黄酮；7，黄腐酚。
[0018]图2是酒花颗粒样品色谱图；1，山奈酚3-0芸香糖苷；2，槲皮素；3，异黄腐酚；4，六甲氧基黄酮；5，8-异戊二烯基黄酮；6，6-异戊二烯基黄酮；7，黄腐酚。
【具体实施方式】
[0019]实施例17种黄酮类物质的标样检测
[0020]精确称取黄酮标准品0.0OlOg用色谱级甲醇充分溶解，定容到10mL，按照需要稀释成不同浓度，准备进样存于样品瓶中，进样分析。
[0021 ] 反相液相色谱分析条件:
[0022]色谱柱:ZorbaxEclipse XDB-C18 (4.6 X 250mm, 5m);
[0023]进样体积10 μ L,流速 0.8mL/min,柱温 30°C ；
[0024]检测波长:280nm及 370nm ；
[0025]流动相:有机B相为乙腈，无机A相为含有0.1% (v/v)甲酸的水溶液；采用梯度洗脱方法，洗脱程序为:0-20min,25%B-80%B ;20_25min,80%B_100%B ;25_28min，100%B-100%B ；28-30min,100%B_25%B。
[0026]所得标样色谱图如图1所示，峰I为山奈酚3-0芸香糖苷，峰2为槲皮素，峰3为异黄腐酚，峰4为六甲氧基黄酮，峰5为8-异戊二烯基黄酮，峰6为6-异戊二烯基黄酮，峰7为黄腐酚。
[0027]所得7种标准样品的标准曲线及检测线范围如表I所示。
[0028]表1.本检测方法检测七种黄酮类物质的线性方程及检测范围
[0029]
【权利要求】
1.一种同时测定酒花中七种黄酮类物质的方法，其特征在于，所述七种黄酮类物质是黄腐酚、异黄腐酚、6-异戊二烯基黄酮、8-异戊二烯基黄酮、六甲氧基黄酮、山奈酚3-0-芸香糖苷和槲皮素；所述方法包括以下步骤: 1)样品制备:酒花颗粒样品经粉碎磨成粉末状后，称量Ig酒花粉末加入7mL无水乙醚摇动15min后，超声处理5min，1500 Xg离心lOmin，去除上清液，再加入20mL50%甲醇溶液摇动15min后,超声处理60min, 1500 Xg离心IOmin,上清液经0.45 μ m微孔滤膜过滤,存于样品瓶中准备进样； 2)将步骤I)制备好的样品用反相高效液相色谱分析，分析条件如下: 色谱柱:ZorbaxEclipseXDB_C18 ； 进样体积10 μ L,流速0.8mL/min,柱温30°C ； 检测波长:280nm及370nm; 流动相:有机B相为乙腈；无机A相为含有体积分数为0.1%的甲酸的水溶液； 采用梯度洗脱，洗脱程序为:0-20min，25%B-80%B ；20-25min,80%B-100%B ;25_28min，100%B-100%B ；28-30min,100%B_25%B。
【文档编号】G01N30/89GK103852552SQ201410089061
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2014年3月12日 优先权日:2014年3月12日
【发明者】刘春凤, 李佳, 李崎, 王金晶, 李永仙, 郑飞云 申请人:江南大学