一种肠炎宁制剂的检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种肠炎宁制剂的检测方法，该方法包括采用高效液相色谱法测定烟花苷含量的方法。
【专利说明】一种肠炎宁制剂的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药领域，特别涉及一种肠炎宁制剂的检测方法。
【背景技术】
[0002]收载于2010年版《中华人民共和国药典》的肠炎宁糖浆和肠炎宁片具有清热利湿、行气的功效，用于急、慢性胃肠炎，腹湾，细菌性痢疾，小儿消化不良等，临床应用广泛、疗效确切。近几年，国家食品药品监督管理局又新批准了肠炎宁丸、肠炎宁颗粒、肠炎宁胶囊、肠炎宁咀嚼片等剂型。目前已有报道中，肠炎宁制剂质量检测指标成分为东莨菪内酯、没食子酸和鸡屎藤苷甲酯，而肠炎宁制剂中含量较高的黄酮类成分没有明确的检测指标成分。现代药理研究表明黄酮类成分具有很强的包括抗炎等生理活性，对肠炎宁制剂中的黄酮类成分进行检测，有助于进一步提高肠炎宁制剂的质量和疗效。

【发明内容】

[0003]本发明的目的在于提供一种肠炎宁制剂的检测方法，本发明提供的检测方法有助于进一步提闻肠炎宁制剂的质量和疗效。
[0004]本发明提供的检测方法包括采用高效液相色谱法测定烟花苷含量的方法。
[0005]本发明采用高效液相色谱法测定肠炎宁制剂中烟花苷含量所选用的色谱条件为:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈一用酸调PH值至2-4的水溶液或甲醇一用酸调PH值至2-4的水溶液为流动相；柱温为20?40°C ;检测波长为260?275nm或330?360nmo
[0006]本发明采用高效液相色谱法测定肠炎宁制剂中烟花苷含量优选的色谱条件为:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比例为81:19?79:21的乙腈一0.3%冰醋酸水溶液为流动相；柱温为20?40°C ;检测波长为260?275nm或330?360nm。
[0007]本发明所述的肠炎宁制剂为肠炎宁口服液、肠炎宁糖浆、肠炎宁胶囊、肠炎宁颗粒、肠炎宁片、肠炎宁咀嚼片或肠炎宁丸中的任意一种。
[0008]本发明创新之处在于:通过对肠炎宁制剂黄酮类成分的研究，从中分离得到并鉴定其中I个黄酮类化合物为烟花苷；在此基础上，建立了专属性强的采用高效液相色谱法测定肠炎宁制剂中烟花苷含量的方法，能够更好的控制制剂的质量，有助于提高其临床疗效。
[0009]下面将通过一些实验例对本发明作进一步说明。
[0010]实验例I肠炎宁制剂黄酮类成分的研究
[0011] 申请人:前期采用HPLC法，以槲皮素、山奈酚和芦丁等3种常见的黄酮类成分作为对照品，对肠炎宁制剂进行了色谱分析，发现由于药材是采用水提，所以肠炎宁制剂中槲皮素和山奈酚的含量较低；肠炎宁制剂色谱图中与芦丁对照品色谱峰保留时间相同的地方有色谱峰，但分离度较差，而且峰纯度检测显示该色谱峰中包含了其它成分。因此，槲皮素、山奈酚和芦丁都不适宜作为肠炎宁制剂的检测指标成分，需要寻找其它的黄酮类成分作为检测成分。
[0012]1、肠炎宁制剂中黄酮类检测成分的筛选
[0013](I)色谱条件:DikmaC18色谱柱(250mmX4.6mm, 5 μ m);流动相:0.3%冰醋酸水溶液一乙腈(梯度洗脱，Omin比例为85:15,60min比例为65:35);检测波长为350nm。
[0014](2)供试品溶液的制备:取肠炎宁颗粒粉末约4.0g，加入60%甲醇100ml，超声(功率250W，频率33KHz)处理30分钟，放冷，过滤，滤液浓缩至约30ml，过滤，经聚酰胺柱吸附，依次用水和60%乙醇洗脱，收集60%乙醇洗脱液，浓缩至适量，滤过，取续滤液，即得。
[0015](3)检测及结果:取供试品溶液20μ 1，按⑴项下色谱条件进样分析，经过对峰高较高且分离度较好的色谱峰进行光谱分析和峰纯度检测，初步确定出峰时间为18分钟左右的黄酮类成分为检测成分。
[0016]2、提取分离
[0017]取生产上用于生产肠炎宁颗粒的稠膏1kg，加30%乙醇10L，超声，静置，过滤，滤液浓缩至5L，过滤，经聚酰胺柱吸附，依次用水、30%乙醇和60%乙醇洗脱，经HPLC分析，待分离成分主要存在于30%乙醇洗脱部分，30%乙醇洗脱部分回收乙醇并减压浓缩至1L，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，经HPLC分析，待分离成分主要存在于正丁醇萃取液中，正丁醇萃取液浓缩至500ml，用5 %碳酸钠溶液萃取，经HPLC分析，待分离成分主要存在于水层部分，水层部分用酸调PH值至4?5，适当浓缩，经聚酰胺柱吸附，依次用水和30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱部分，浓缩至乙醇含量少于10%，经自制YMGC18H3柱吸附，依次用10%甲醇、30%甲醇和50%甲醇洗脱，经HPLC分析，待分离成分主要存在于30%甲醇洗脱部分，30%甲醇洗脱部分减压浓缩后，用少量35%甲醇溶解，再经制备HPLC，甲醇-水(35:65)洗脱，得目标成分。
[0018]3、结构鉴定
[0019]目标成分:黄色针状结晶，盐酸镁粉反应及Molish反应均呈阳性。UV(MeOH)nm:329，268。1H-Mffi(DMSO-Cl6JOOMHz)S:7.97 (2H, d, J = 8.7Hz，H_2 '，6 ')，
6.87(2H, d, J = 8.7Hz，H-3 ' ,5' ),6.40(1H, brs, H_8)，6.19(1H, brs, H_6)，5.30(1H,d，J = 7.4Hz，H — I ' ' ),5.24(1H, brs, H-1 ; ' ' )。13C-NMR(100MHzDMS0_d6) δ:177.9 (C-4)，164.2 (C_7) , 161.3 (C_5)，159.9 (C_4 ' )，156.9 (C-2,9)，133.3 (C_3)，131.0(02'，6' )，120.9(C-r ),115.2(03' ,5' ), 104.0(C-1O), 101.4(C-1;')，100.8 (C-1 ' ' ' ) ,98.8(C-6) ,93.8(C-8) ,76.4(C-5 ' ' ), 75.8 (C_3 ''),74.2(C-2' ' ) ,71.4(C-4; ' ' ),70.6(03' ' ' ),70.4(02' ' ' ),70.0(04'')，68.3(C-5' ' ' )，66.9(C-6' ' )，17.8(C_6''')。根据以上数据确定目标成分为烟花苷。
[0020]实验例2肠炎宁颗粒中烟花苷含量测定研究
[0021]1、仪器与试药
[0022]安捷伦1200液相色谱仪(美国安捷伦公司)。烟花苷对照品(自制，纯度大于98% );肠炎宁颗粒(江西天施康中药股份有限公司，批号:20140301、20140302、20140303);乙腈为色谱纯；水为超纯水，其它试剂均为分析纯。
[0023]2、色谱条件
[0024]DikmaC18色谱柱(250_X 4.6mm, 5 μ m);流动相:0.3 %冰醋酸水溶液一乙腈(80:20);流速:1.0ml/min ;检测波长:350nm;柱温:25°C ;理论板数按烟花苷计不低于3000。
[0025]3、对照品溶液的制备取烟花苷对照品适量，精密称定，加60%甲醇制成每1ml含
0.01mg的溶液，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0026]4、供试品溶液的制备取肠炎宁颗粒，研细，取约4.0g，精密称定，加入60%甲醇100ml，超声(功率250W，频率33KHz)处理30分钟，放冷，过滤，滤液浓缩至适量，放冷，转移至IOml量瓶中，加60%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0027]5、系统适应性试验
[0028]烟花苷在波长260nm和350nm附近均有较强的紫外吸收，本方法选择350nm作为检测波长。按2项下色谱条件测定，比较烟花苷对照品溶液、供试品溶液的色谱图，结果烟花苷色谱峰无拖尾，分离度良好。
[0029]6、线性关系考察
[0030]精密称取烟花苷对照品10.23mg,置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，取上述母液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液，按2项下色谱条件，分别注入高效液相色谱仪I μ 1，3 μ 1，5 μ 1，10 μ 1，20 μ 1，测定峰面积。以进样量(Ug)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归分析，结果见表1。
[0031 ] 表1烟花苷线性关系考察结果
[0032]
【权利要求】
1.一种肠炎宁制剂的检测方法，所述肠炎宁制剂是由下列重量份的原料制成的:地锦草660份、黄毛耳草900份、樟树根660份、香薷330份、枫树叶330份，其特征在于该方法包括采用高效液相色谱法测定烟花苷含量的方法。
2.如权利要求1所述的一种肠炎宁制剂的检测方法，其特征在于采用高效液相色谱法测定烟花苷含量的色谱条件为:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈一用酸调PH值至2-4的水溶液或甲醇一用酸调PH值至2-4的水溶液为流动相；柱温为2(T40°C ;检测波长为 260?275nm 或 330?360nm。
3.如权利要求1所述的一种肠炎宁制剂的检测方法，其特征在于采用高效液相色谱法测定烟花苷含量的色谱条件为:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比例为81:19?79:21的乙腈一 0.3%冰醋酸水溶液为流动相；柱温为2(T40°C ;检测波长为260?275nm 或 330?360nm。
4.如权利要求1-3任一所述的一种肠炎宁制剂的检测方法，其特征在于所述的肠炎宁制剂为肠炎宁口服液、肠炎宁糖浆、肠炎宁胶囊、肠炎宁颗粒、肠炎宁片、肠炎宁咀嚼片或肠炎宁丸中的一种。
【文档编号】G01N30/88GK103940942SQ201410191776
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2014年5月8日 优先权日:2014年5月8日
【发明者】吴孔松, 吴朝阳, 吴安明, 支永英 申请人:江西天施康中药股份有限公司