专利名称：一种琼脂糖蛋白质芯片载体的活化方法
技术领域：
本发明涉及蛋白质芯片载体的制备方法，特别是针对琼脂糖蛋白质芯片载体的活
化方法。
背景技术：
蛋白质芯片是一种用于定量和定性分析的检测装置，由于其具有高通量、迅速和微量化的优点，目前广泛应用于食品安全的检测、药物的筛选，疾病的诊断和环境的检测等各个领域。在制备蛋白质芯片的过程中，通过一定的方法将蛋白质固定于合适的载体上，同时能够维持蛋白质天然构象是提高蛋白质芯片性能的主要方法。因此，寻找合适的载体和表面修饰方法提高蛋白质的固定效率及反应活性，已经成为制备高质量蛋白质芯片亟待解决的关键问题。 玻片以其性能稳定、荧光背景低、表面光滑、廉价等诸多优点，深受蛋白质芯片研究者的关注。通常，载体的表面的修饰方式主要有覆盖型和小分子修饰两种。小分子修饰的方法主要包括在玻片载体表面形成氨基、醛基、环氧基等，由于蛋白质为三维的结构，导致在固定的时候产生很大的不稳定性，特别是蛋白质的活性保持方面遇到了很大的挑战。为了更好的保护固定蛋白质的活性，研究者开发了很多以大分子骨架为覆盖载体的方式为蛋白质提供良好的保存环境。其中琼脂糖以其方便、实用、廉价等优点受到了大量研究者的青睐。 目前，琼脂糖蛋白质芯片的制备主要采用将一定浓度的琼脂糖覆盖在载体表面的方式，但是在使用过程中发现琼脂糖在玻璃表面易发生收縮变形，与玻璃表面相容性较差，在两相界面易产生微裂纹，结合强度低，导致其力学性能下降，进而对蛋白质芯片的稳定性产生很大的影响。硅烷类偶联剂在结构中带有一个或数个活性官能团，具有高的反应活性，能够有效地改善无机体与高分子材料的界面相容性。

发明内容
本发明的目的是提供一种具有高稳定性、易制备的用于琼脂糖蛋白质芯片的固相载体。本发明的技术方案主要是基于化学修饰，特别是在固相载体表面引入能够和琼脂糖结合的小分子功能基团使得琼脂糖能够稳定的和玻璃载体表面进行有效的结合，以弥补现有技术的不足。 本发明涉及一种琼脂糖蛋白质芯片的载体，其特征在于载体凹槽的表面耦联有小分子的基团，所述的基团能于琼脂糖产生化学交联。本发明的载体具有性质稳定、易于制备的特点。 本发明涉及的琼脂糖蛋白质芯片载体的制备方法，其包括1)将凹槽的表面清洗干净；2)将硅烷化试剂与凹槽表面孵育并发生反应；3)将残存在凹槽表面的硅烷化试剂清洗干净，并干燥。 本发明具有的积极效果主要表现在
3
1)能够使得琼脂糖和玻璃基片紧密的结合，提高琼脂糖蛋白质芯片的稳定性； 2)通过对玻璃基片表面的处理，降低不同玻璃基片之间的差异； 3)处理方法简单、性能稳定，将会在琼脂糖蛋白质芯片的制备中广泛应用。 以下通过实施例对本发明进行详细的说明。
具体实施例方式
本发明涉及一种琼脂糖蛋白质芯片活性载体的制备方法，该载体是一个表面带有 凹槽，而且凹槽的表面含有活性的氨基。在制备过程中，首先将带有凹槽的玻璃基片在洗液 中浸泡过夜，用超声波进行清洗后，将玻璃基片浸入硅烷化试剂中，浸泡10min，然后依此用 丙酮和乙醚对玻璃基片进行清洗，分别清洗三遍后，在6(TC条件下烘干，即可制得用于琼脂 糖蛋白质芯片的活性载体。 本发明述及的玻璃基片是指玻璃片，它能够为蛋白质芯片的反应提供支持。而活 性载体指的是经过硅烷化试剂处理的玻璃基片。 现用玻璃片制备含有1个凹槽的琼脂糖蛋白质芯片活性载体，具体制备过程包括 如下步骤 1)选取面积为75. 6mmX25. 2mmX2. 5mm的载玻片，该载玻片含有1个 50mmX 18mmX 1. 5mm凹槽，凹槽底部处于同一水平面上。 2)将玻璃基片浸入洗液中浸泡过夜，取出后双蒸水冲洗干净，特别是使凹槽表面清洁。 3)将洗净的玻璃基片浸入超声波清洗器中，清洗10min，取出后用双蒸水冲洗干净。 4)将清洗好的载玻片浸入含有0. 2mg/mL硅烷化试剂的溶液中，浸泡15min，取出 后用丙酮清洗三次，然后再用乙醚清洗三次，在60°C的条件下烘干，得到凹槽表面活化的琼 脂糖蛋白质芯片的活性载体。
权利要求
一种玻璃基片，是表面有一个凹槽，凹槽的表面带有氨基的活性玻璃基片。
2. 根据权利要求1所述的玻璃基片，其特征在于厚度在0. 5-5mm，左右边缘在同一水 平线上。
3. 根据权利要求l所述的凹槽，其特征在于凹槽的深度在0.01-lmm，凹槽的底部处于 同一水平线上，凹槽表面的氨基采用硅烷化试剂处理制备。
4. 根据权利要求4所述的凹槽表面硅烷化试剂处理方法，包括以下步骤1) 将玻璃基片在洗液中浸泡过夜2) 从洗液中取出玻璃基片后，用超声波清洗后，用去离子水冲洗；3) 将玻璃基片浸入硅烷化试剂中，孵育；4) 将孵育后的玻璃基片依此用丙酮、乙醚清洗，干燥，得到活化的玻璃基片。
5. 根据权利要求4所述的处理方法，其特征在于所述步骤1)中的玻璃基片厚度为 0. 5-5mm，凹槽的深度在0. Ol-lmm。
6. 根据权利要求4所述的处理方法，其特征在于所述步骤1)中的洗液为0.01mol/L的重铬酸钾溶液。
7. 根据权利要求5所述的处理方法，其特征在于所述步骤1)中超声波清洗时间为 lmin-20min，所述去离子水冲洗为三次。
8. 根据权利要求5所述的处理方法，其特征在于所述步骤2)中的硅烷化试剂为氨基 硅烷的丙酮溶液，浓度在0. 01-2mg/ml。
9. 根据权利要求5所述的处理方法，其特征在于所述步骤2)中的浸泡的时间为 0.5min-20min。
10. 根据权利要求5所述的处理方法，其特征在于所述步骤3)中用丙酮清洗1-5次， 每次O. 5-5min，等离子水清洗的时间为20-200s。
11. 根据权利要求5所述的处理方法，其特征在于所述步骤3)中干燥的方法为6(TC 烘干。
12. 权利要求1所述的玻璃基片在制备琼脂糖蛋白质芯片中应用。
全文摘要
本发明公开了一种琼脂糖蛋白质芯片活性载体的制备方法，其目的是提供一种表面设有凹槽的琼脂糖蛋白质芯片的活性载体的制备方法。该琼脂糖蛋白质芯片的载体是表面设有一个凹槽的玻璃基片，所述凹槽底部表面存在活性基团。其制备方法主要包括以下步骤1)将含有一个凹槽的玻璃基片在洗液中浸泡过夜，然后用超声波清洗干净；2)将玻璃基片浸入硅烷化试剂中，浸泡；3)将玻璃基片依此用丙酮、乙醚清洗，干燥，得到活化的玻璃基片载体。本发明将在琼脂糖蛋白质芯片领域具有广泛的应用前景。
文档编号G01N33/50GK101738464SQ200810159240
公开日2010年6月16日 申请日期2008年11月19日 优先权日2008年11月19日
发明者张轶群, 李小燕, 李振兴, 林洪 申请人:中国海洋大学