专利名称：一种新的硫酸依替米星有关物质的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种新的氨基糖苷类抗生素硫酸依替米星有关物质的检测方法。具体的讲是一种新的采用HPLC-ELSD仪器、采用梯度洗脱的方法检测硫酸依替米星有关物质的方法。
背景技术：
硫酸依替米星(Etimicin sulfate)是我国科研人员自行研制的，拥有自主知识产权的高效、低毒、抗耐药菌的新一代半合成氨基糖苷类抗生素，是唯一获得国家一类新药证书的抗感染药物。硫酸依替米星注射液适用于对其敏感的大肠杆菌、克雷伯氏肺炎杆菌、沙雷氏杆菌属、枸橼酸杆菌、肠杆菌属、不动杆菌属、变形杆菌属、嗜血流感杆菌、绿脓杆菌和葡萄球菌等引起的各种感染。临床研究显示本品对以下感染有较好的疗效呼吸道感染如急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作、社区肺部感染等。肾脏和泌尿生殖系统感染如急性肾盂肾炎、膀胱炎、慢性肾盂肾炎或慢性膀胱炎急性发作等。皮肤软组织和其它感染如皮肤及软组织感染，外伤、创伤和手术产后的感染及其他敏感菌感染。目前，生产硫酸依替米星使用的工艺均为专利报道的工艺(申请号 93112412. 3)。其主要步骤为庆大霉素Cla碱在溶剂中加入醋酸钴、乙酸酐，生成3，2，， 6，-三-N-乙酰基庆大霉素Cla (Pl)，经过提取浓缩，浓缩液通入硫化氢气体除去钴离子， 得到纯度为90% -95%的Pl，然后加入乙醛，在0-5°C冰水浴中用还原剂氢化，得到3，2，， 6，-三-N-乙酰基-I-N乙基庆大霉素Cla (P2)，经吸附型大孔树脂分离后得到纯度较高的 P2，纯度较高的P2加入IN的氢氧化钠溶液，水解回流48小时，水解液经吸附型大孔树脂分离得到纯度为90%以上的I-N-乙基庆大霉素Cla (依替米星)溶液，加酸成盐，活性炭脱色，冷冻干燥，即得依替米星盐。硫酸依替米星是一种多结构产品，生产中难于提纯，主要杂质为ETM-10，ETM-7， ETM-12, ETM-6，ETM-5，ETM-3，它们的结构分别为ETM-10 结构式
权利要求
1. 一种硫酸依替米星杂质含量检测方法，其特征在于，经过以下步骤精密称取氨基糖苷有关物质ETM-10，ETM-7，ETM-12, ETM-6，ETM-5，ETM-3对照品各适量，分别加水制成每Iml分别含相关杂质约0. OOl-IOmg的对照品储备溶液；精密吸取以上各有关物质对照品储备溶液适量，转移至同一容量瓶中，加水稀释至刻度，制备成有关物质混合对照品溶液， 其中各有关物质浓度为1-1000 μ g/ml，色谱柱=Gemini NX C18(4. 6mmX 150mm, 5 μ m)；流动相A相水-氨水-冰醋酸(98 75 2.0 5.0 0. 1 1. 0)，B相甲醇，采用梯度洗脱的方法，用HPLC-ELSD进行测定，面积归一化法计算其含量。 流动相梯度
2.如权利要求1所述的检测方法，有关物质对照品储备溶液的浓度为0.001-10mg。
3.如权利要求1所述的检测方法，有关物质混合对照品溶液的浓度为1-1000μg/ml。
4.如权利要求1所述的检测方法，检测用流动相由A相和B相组成，其中A相水-氨水-冰醋酸(98 75 2. 0 5. 0 0. 1 1. 0)，B相甲醇。
5.如权利要求1所述的检测方法，采用梯度洗脱的方法，流动相梯度为 流动相梯度
6.如权利要求1所述的检测方法，采用HPLC-ELSD进行测定，面积归一化法计算其含量。
7.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，经过以下步骤精密称取氨基糖苷有关物质对照品(ETM-10，ETM-7，ETM-12, ETM-6，ETM-5，ETM-3 ；均从原料药硫酸依替米星中分离得到，纯度均> 95% )各适量，分别加水制成每Iml分别含相关杂质约0. OOl-IOmg的对照品储备溶液；精密吸取以上各氨基糖苷有关物质对照品储备液各适量，转移至同一容量瓶中，加水稀释至刻度，制备成氨基糖苷类有关物质混合对照品溶液，其中各有关物质浓度为1-500 μ g/ml)。色谱柱Gemini NX C18(4. 6mmX 150mm, 5 μ m)。流动相A相水-氨水-冰醋酸(98 85 2. 0 4. 0 0. 1 0. 5)，B相甲醇。采用梯度洗脱的方法，用HPLC-ELSD进行测定，面积归一化法计算其含量。
8.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，经过以下步骤 精密称取氨基糖苷有关物质对照品(ETM-10，ETM-7，ETM-12, ETM-6，ETM-5，ETM-3 ；均从原料药硫酸依替米星中分离得到，纯度均> 95% )各适量，分别加水制成每Iml分别含相关杂质约0. OOl-IOmg的对照品储备溶液；精密吸取以上各氨基糖苷有关物质对照品储备液各适量，转移至同一容量瓶中，加水稀释至刻度，制备成氨基糖苷类有关物质混合对照品溶液，其中各有关物质浓度为10-300 μ g/ml)。色谱柱Gemini NX C18(4. 6mmX 150mm, 5ym)。流动相A相水-氨水-冰醋酸(96 3. 6 0.4)，B相甲醇。采用梯度洗脱的方法，用HPLC-ELSD进行测定，面积归一化法计算其含量。 流动相梯度
全文摘要
本发明涉及一种新的氨基糖苷类抗生素硫酸依替米星有关物质的检测方法，该方法包括以下步骤精密称取硫酸依替米星有关物质对照品各适量，分别加水制成一定浓度的对照品储备溶液；精密吸取以上各氨基糖苷有关物质对照品储备液各适量，转移至同一容量瓶中，加水稀释至刻度，制备成氨基糖苷杂质混合对照品溶液，流动相A相水-氨水-冰醋酸(96∶3.6∶0.4)，B相甲醇。采用梯度洗脱的方法，用HPLC-ELSD进行测定，面积归一化法计算其含量。
文档编号G01N30/26GK102435679SQ201010297029
公开日2012年5月2日 申请日期2010年9月29日 优先权日2010年9月29日
发明者俞婷, 吴凌云, 夏冰, 张智杰, 易斌, 汪豪 申请人:无锡济民可信山禾药业股份有限公司, 江西济民可信集团有限公司