专利名称：利用免疫色谱法的测定法、免疫色谱测试条和用于免疫色谱法的测定试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及通过免疫色谱法测量样品中分析物的测量方法，用于通过免疫色谱法测量样品中分析物的免疫色谱测试条，和用于免疫色谱法的测量试剂盒，其包括免疫色谱测试条和稀释溶液。本发明特别涉及通过使用免疫色谱法测量血红蛋白浓度和源自血液的同一样品中的第二分析物的浓度并使用获自血红蛋白测量值的血细胞比容校正所述第二分析物的测量值的技术。
背景技术：
在医学领域、医学研究领域等中，必须测量血液中的某些成分(诸如血清清蛋白、免疫球蛋白、肝炎病毒、类风湿因子和C反应蛋白)，且为了该目的已经开发和实施了多种测量方法。在这些方法中的常用方法中，免疫学测定成为主流且，在免疫学测定中，对由患者或受试者收集和获得的血液(下文中称为全血)进行离心，以获得上清(血清或血浆)，所述上清使用合适的缓冲溶液稀释，并且使用与分析物特异性反应的抗体来检测血清或血浆中的分析物。这样的测定包括作为定性测试的，使用多克隆抗体的，基于单一射线的免疫扩散方法。胶乳凝集免疫测定和免疫浊度法作为代表性的定量测试包括在其中。“在检查患者的过程中希望进行多种测试”的需要近期甚至在门诊部和小医院中越来越多，且测试日益作为即时检验(POCT),而非常规转包(subcontract)检验来进行。这样的POCT试剂的代表性实例包括免疫色谱法的侧向流动测试条。由于由血液中分离血浆和血清的操作很麻烦且需要POCT领域的技巧，使用全血的检验是理想的。通过使用免疫色谱法测量全血液样品中分析物的测定公开为，例如，使用装配有血细胞分离膜的测试条的方法以及试剂和试剂盒(专利文献I)。然而，当通过该程序分离的血浆直接用于通过基于夹心式免疫反应原则的免疫色谱法的测量时，如果分析物过量存在，则有问题，即“钩状现象”(也称为“前带现象”)发生并导致数值的明显减小，尽管样品中存在高度浓缩的分析物。因此，全血通常是溶解的和稀释的，以用于测量，由此保持在预定的测量范围内。然而，在这种情况下，分析物的浓度通过血细胞体积稀释并且测量值与血清或血浆样品相比降低，因此，测量值必须通过使用血细胞比容值(红细胞的体积百分比)来校正。利用血细胞比容值(红细胞的体积百分比)校正测量值在下文中也将简称为血细胞比容校正。数值明显减小的问题通常通过统一乘以获自健康个体的平均血细胞比容值的校正系数来进行校正。然而，血细胞比容值在个体之间变化并且其参考值范围在男性中为39-52%，在女性中为35-48%。因此，精确的分析物浓度不能通过利用乘以统一的系数的校正来获得。因此，为了进行精确血细胞比容校正，必须使用通过利用用于测量分析物浓度的同一样品分别测量的血细胞比容值进行校正。血细胞比容值常规通过基于离心法的微量血细胞比容法或通过利用自动化血细胞计数器通过由红细胞数量和平均红细胞体积进行计算来获得。另一方面，报告了另一种利用由全血测量结果转化为在测量血清或血浆情况下的测量值的方法作为转化血液测量结果的方法，在该方法中，测量全血的血红蛋白浓度(g/L);采用通过使获得的血红蛋白浓度乘以约3/10获得的数值作为血细胞比容值(％);并使用血细胞比容值将来自全血的测量结果转化为测量血清或血浆情况下的测量值(专利文献2)。然而，由于血红蛋白浓度和血细胞比容值必须通过与免疫色谱法测定不同的方法来获得，所以该方法很麻烦，需要时间和成本，并因此不能满足POCT领域中测试的需求。因此，需要基于免疫色谱法的同时测量分析物和血红蛋白的方法；然而，由于全血中的血红蛋白浓度正常为数十g/L至200g/L，这是非常高的浓度，需要进行10，000-至100，000-倍稀释，以用于基于正常夹心式免疫测定原理的测定。在该方法中，需要大量稀释溶液来进行一步式稀释，这导致测量精确性的破坏。利用多步式稀释的方法存在缺乏用于POCT领域中测试方法的实用性的问题。为了解决这些问题，需要能够测量的免疫色谱法测定，其中具有至多50-400倍的全血的溶血稀释操作。引用列表专利文献专利文献1:公开的PCT申请WO 2010/001598专利文献2 :日本特开专利公开号2001-272403发明概述技术问题例如，C反应蛋白(以下也称为"CRP")的血液浓度在健康个体中等于或小于3mg/L，在手术后或在急性细菌感染的情形中至多约35mg/L，且在严重受伤个体中多至约1000mg/L。另一方面，血红蛋白的血液浓度正常为数十g/L至200g/L，这与CRP在浓度上相差约50-67000倍，并且对于进行免疫测定的分析物是非常高的浓度。因此，当企图在基于夹心式免疫色谱法原理的测定中测量CRP和血红蛋白二者时，样品的稀释比率必须根据分析物而进行相当大的改变并且，因此，样品(处于相同稀释比率的样品)中的测量非常困难。规定免疫测定测量范围的最重要因素包括抗原和抗体之间的亲合力(avidity)和影响其结合反应多种环境因子。这些环境因子包括温度、时间、pH、离子环境、和产生某些效果的试剂诸如表面活性剂和反应促进剂的添加。在同一样品中同时测量CRP和血红蛋白的浓度可以原则上通过以下过程来实现选择具有不同亲合力的抗体和获得合适环境因子从而弥补显著的浓度差距。然而，制备这样的抗体组合和获得所述合适的环境因子并不容易。实际上，当本发明人最初考虑通过夹心式免疫色谱法同时测量CRP和血红蛋白时，50-至200-倍稀释足以测量CRP，而需要2000-至100，000-倍稀释来测量血红蛋白。因此，不能通过利用同一稀释样品测量CRP和血红蛋白。本发明的目的是提供利用同一稀释样品，通过免疫色谱法测量同一样品中分析物和血红蛋白浓度的方法和通过利用血红蛋白的测量值进行分析物测量值血细胞比容校正的方法，以及提供用于在这些方法中使用的免疫色谱测试条和试剂盒。解决问题的方案本发明人已经发现血红蛋白的数量可以通过利用这样的现象通过免疫色谱测试条确定，所述现象是其中甚至在通过以约100倍稀释和溶血获得的样品中，即甚至在样品中血红蛋白浓度等于或大于获得血红蛋白测量最大信号值时的浓度的范围内(下文中也称为前带现象区)，在免疫色谱测试条的不溶性膜支持物上固定的一排抗血红蛋白抗体捕获的胶体金标记物中，反射光强度随着血红蛋白浓度的增加而减小；并且发现CRP可以在稀释样品中测量，由此导致本发明的完成。"免疫色谱测试条(用于免疫色谱法的测试条)"指至少包括免疫色谱法所需的不溶性膜支持物和在需要时，还包括试剂成分、另外的膜等的那些测试条。本发明包括以下内容。(I)通过免疫色谱法测量至少包含第一分析物的样品的方法，其包括以下步骤A，其中样品中第一分析物的浓度在等于或大于获得所述第一分析物的最大信号值时的浓度的范围(前带现象区)内测量，A.利用下述I)和2)，通过竞争性免疫色谱法测量样品中第一分析物的步骤I)缀合物，其中针对所述第一分析物的第一抗体固定于标记物；和2)不溶性膜支持物，针对所述第一分析物的第二抗体固定于所述不溶性膜支持物(如果针对所述第一分析物的第一抗体的表位是单价的，则所述第二抗体的表位与第一抗体不同，而如果所述第一抗体的表位是多价的，则所述第二抗体的表位可以与第一抗体相同或在一些情形中所述第一抗体可以与所述第二抗体相同)。(2)根据⑴的方法，其中步骤A还使用下述3)和4)并且其中I)的缀合物包含在垫中，以形成缀合物垫并置于2)的不溶性膜支持物的上游侧，3)样品垫，其位于缀合物垫的上游侧并供给以样品，和4)吸收垫，其位于2)的不溶性膜支持物的下游侧。(3)根据⑴或⑵的方法，其中所述第一分析物是血红蛋白，且其中所述样品通过对血液进行稀释和溶血以达到等于或大于获得血红蛋白测量的最大信号值时的浓度范围的浓度范围(前带现象区)内来获得。(4)通过免疫色谱法测量至少包含血红蛋白，即所述第一分析物和第二分析物的样品的方法，其包括以下步骤A至D :A.利用下述I)和2)，通过竞争性免疫色谱法测量样品中第一分析物的步骤I)缀合物，其中针对所述第一分析物的第一抗体固定于标记物；和2)不溶性膜支持物，针对所述第一分析物的第二抗体固定于所述不溶性膜支持物(如果针对所述第一分析物的第一抗体的表位是单价的，则所述第二抗体的表位与第一抗体不同，而如果所述第一抗体的表位是多价的，则所述第二抗体的表位可以与第一抗体相同或在一些情形中所述第一抗体可以与所述第二抗体相同)；B.利用下述5)和6)，通过免疫色谱法测量样品中第二分析物的步骤5)缀合物，其中针对所述第二分析物的第一抗体固定于标记物；和6)不溶性膜支持物，针对所述第二分析物的第二抗体固定于所述不溶性膜支持物(如果针对所述第二分析物的第一抗体的表位是单价的，则所述第二抗体的表位与第一抗体不同，而如果所述第一抗体的表位是多价的，则所述第二抗体的表位可以与第一抗体相同或在一些情形中所述第一抗体可以与所述第二抗体相同)；C.从步骤A获得的第一分析物的测量值获得样品的血细胞比容值的步骤；和D.通过利用步骤C获得的血细胞比容值校正步骤B获得的第二分析物的测量值的步骤。(5)根据(4)的方法，其中步骤A和B是使用相同不溶性膜支持物的步骤。(6)根据(5)的方法，其中步骤A和B在相同流动通道中进行。(7)根据(4)至(6)中任一项的方法，其中所述第二分析物是CRP。(8)用于通过免疫色谱法测量至少包含第一分析物和第二分析物的样品的免疫色谱测试条，所述免疫色谱测试条包括以下E和F :E.用于测量所述第一分析物的测试条，其包括下述I)和2)，I)缀合物，其中针对所述第一分析物的第一抗体固定于标记物；和2)不溶性膜支持物，针对所述第一分析物的第二抗体固定于所述不溶性膜支持物(如果针对所述第一分析物的第一抗体的表位是单价的，则所述第二抗体的表位与第一抗体不同，而如果所述第一抗体的表位是多价的，则所述第二抗体的表位可以与第一抗体相同或在一些情形中所述第一抗体可以与所述第二抗体相同)；和F.用于测量第二分析物的测试条，其包括下述5)和6)，5)缀合物，其中针对所述第二分析物的第一抗体固定于标记物；和6)不溶性膜支持物，针对所述第二分析物的第二抗体固定于所述不溶性膜支持物(如果针对所述第二分析物的第一抗体的表位是单价的，则所述第二抗体的表位与第一抗体不同，而如果所述第一抗体的表位是多价的，则所述第二抗体的表位可以与第一抗体相同或在一些情形中所述第一抗体可以与所述第二抗体相同)。(9)根据⑶的免疫色谱测试条，其中E中I)和F中5)的缀合物包含在相同垫中，以形成缀合物垫，并且其中E中2)的不溶性膜支持物与F中5)不溶性膜支持物相同。(10)根据(9)的免疫色谱测试条，其中E和F置于相同流动通道内。(11)根据⑶至(10)中任一项的免疫色谱测试条，还包括以下G和H，其中E中I)和F中5)的缀合物包含在垫中以形成缀合物垫并置于E中2)和F中6)的不溶性膜支持物的上游侧，G.样品垫，其位于缀合物垫的上游侧并供给以样品，和H.吸收垫，其位于E中2)和F中6)的不溶性膜支持物的下游侧。(12)根据(8)至(11)中任一项的免疫色谱测试条，其中所述第一分析物是血红蛋白。(13)根据(12)的免疫色谱测试条，其中所述第二分析物是CRP。(14)用于免疫色谱法的测定试剂盒，其包括根据(12)或(13)的免疫色谱测试条；和用于血红蛋白溶血和稀释的稀释溶液。(15)通过免疫色谱法测量至少包含第一分析物和第二分析物的样品的方法，其包括以下步骤A和B:A.利用下述I)和2)，通过竞争性免疫色谱法测量样品中第一分析物的步骤I)缀合物，其中针对所述第一分析物的第一抗体固定于标记物；和2)不溶性膜支持物，针对所述第一分析物的第二抗体固定于所述不溶性膜支持物(如果针对所述第一分析物的第一抗体的表位是单价的，则所述第二抗体的表位与第一抗体不同，而如果所述第一抗体的表位是多价的，则所述第二抗体的表位可以与第一抗体相同或在一些情形中所述第一抗体可以与所述第二抗体相同)；和
B.利用下述5)和6)，通过免疫色谱法测量样品中第二分析物的步骤，5)缀合物，其中针对所述第二分析物的第一抗体固定于标记物；和6)不溶性膜支持物，针对所述第二分析物的第二抗体固定于所述不溶性膜支持物(如果针对所述第二分析物的第一抗体的表位是单价的，则所述第二抗体的表位与第一抗体不同，而如果所述第一抗体的表位是多价的，则所述第二抗体的表位可以与第一抗体相同或在一些情形中所述第一抗体可以与所述第二抗体相同)。(16)根据(15)的方法，其中所述第二分析物是CRP。对于能够在常规认为不适合于量化的前带现象区内进行测量的原因，本发明人推测如下。血红蛋白浓度在以约100倍稀释和溶血的血液样品中太高，由此导致不能与抗血红蛋白抗体固定的胶体金(缀合物)结合的游离血红蛋白。因此，发生上述现象，其归因于当游离血红蛋白与不溶性膜支持物上固定的抗血红蛋白抗体结合时，它与抗血红蛋白抗体固定的胶体金和血红蛋白的复合物相竞争。发明有利效果根据本发明，即使在包含高度浓缩的分析物的样品中，分析物的浓度可以在等于或大于在该分析物测量系统中获得最大信号值的浓度的浓度范围(前带现象区)内来测量，由此相当大地减少稀释样品所需的努力和成本。应用本发明测量血红蛋白容许规定免疫色谱测试条和用于免疫色谱法的测定试剂盒能够通过同一免疫色谱法测量同一样品中分析物和血红蛋白的浓度和由血红蛋白的测量值进行分析物测量值的血细胞比容校正并且，因此，与常规方式相比，分析物的精确血液浓度测量可以以简单操作短时间内进行，由此满足POCT领域中的社会需要。附图简述

图1显示免疫色谱测试条的示意性结构。图2显示实施例1的血红蛋白测量的结果。图3显示实施例1的CRP测量中的校准曲线。图4是实施例1的来自血红蛋白测量线的反射光强度和血细胞比容值之间关系的图表。图5是实施例1中在无血细胞比容校正条件下利用本发明的免疫色谱测试条获得的CRP浓度与利用商购CRP测量试剂盒(由SekisuiMedical Co.，Ltd.(积水医疗株式会社)制造的"Nanopia CRP")获得的CRP浓度之间相关性的图表。图6是实施例1中使用血细胞比容校正获得的CRP浓度与利用商购CRP测量试剂盒(由Sekisui Medical Co. ,Ltd.(积水医疗株式会社)制造的"Nanopia CRP")获得的CRP浓度之间相关性的图表。图7是当通过实施例1的免疫色谱测试条获得的CRP浓度使用平均血细胞比容值44%统一校正时的CRP浓度与利用商购CRP测量试剂盒(由Sekisui Medical Co.，Ltd.(积水医疗株式会社)制造的"Nanopia CRP")获得的CRP浓度之间相关性的图表。图8是实施例2的来自血红蛋白测量线的反射光强度和血细胞比容值之间关系的图表。图9显示实施例2的CRP测量中的校准曲线。图10是当实施例2中不进行HCT校正时，商购CRP测量试剂盒(Nanopia CRP)和本发明方法之间相关性的图表。图11是当实施例2中进行HCT校正时，商购CRP测量试剂盒(Nanopia CRP)和本发明方法之间相关性的图表。图12是膜的毛细流动时间对Hb测量影响图表。实施方案描述将通过以当第二分析物是CRP的测量法作为实例，详细描述作为本发明实施方案之一的具有血细胞比容校正的测量法。在该情形中，第一分析物是血红蛋白且第二分析物是 CRP。当使用本发明的测量法测量CRP时，血液在同时溶血和稀释至所需浓度后用作样品，以使得CRP和血红蛋白可以通过基于免疫色谱法原理的免疫测定同时测量。本发明测量法中样品中的血红蛋白浓度必须在等于或大于获得血红蛋白测量的最大信号值时浓度的浓度范围(前带现象区)内。换言之，样品中的血红蛋白浓度必须被设定为在等于或大于获得血红蛋白测量的最大信号值时浓度的浓度范围(前带现象区)内。特别地，适合时通过改变稀释倍数，将样品稀释至等于或大于获得血红蛋白测量的最大信号值时浓度的范围内。因此，样品中的血红蛋白浓度被设定为等于或大于获得血红蛋白测量的最大信号值时的浓度，且血红蛋白浓度可以由与血红蛋白浓度成反比的检测强度减小程度而获得。可以进行初步测试，以预先获得这样的浓度，即获得血红蛋白测量的最大信号值时的浓度。备选地，这样的浓度可以通过由样品类型(患者特征)和过去的测试结果预测的血红蛋白浓度来预先预测。特别地，以50至200倍稀释和溶血的血液样品可以用于通过免疫色谱法同时测量同一样品中的CRP和血红蛋白。理想地，优选设定稀释比率为100倍，因为CRP测量范围应该设定为O. 2-20mg/mL。使用本发明测量法的CRP测量包括以下步骤将稀释和溶血血液样品滴在免疫色谱测试条的样品垫上，在具有抗血红蛋白抗体，即固定于不溶性膜支持物的针对血红蛋白的抗体(针对血红蛋白的第二抗体)的测量部分(下文中也称为"血红蛋白测量线")上测量血红蛋白浓度，和由血红蛋白的测量值获得血液样品的血细胞比容值。特别地，血红蛋白浓度通过使用其中针对血红蛋白的第一抗体固定于标记物的缀合物和其上固定有针对血红蛋白的第二抗体的不溶性膜支持物(如果针对血红蛋白的第一抗体的表位是单价的，则所述第二抗体的表位与第一抗体不同，而如果所述第一抗体的表位是多价的，则所述第二抗体的表位可以与第一抗体相同或在一些情形中所述第一抗体可以与所述第二抗体相同)来测量。血红蛋白浓度可以作为测量值，由来自具有固定的针对血红蛋白的第二抗体的不溶性膜支持物上的血红蛋白测量线的信号差直接获得或可以是由该信号差计算的血红蛋白浓度。根据本发明的测量法，由于样品中的血红蛋白浓度在等于或大于获得血红蛋白测量的最大信号值时浓度的浓度范围(前带现象区)内测量，血红蛋白浓度由与血红蛋白浓度成反比的吸光度或反射光强度的减小程度来获得。血细胞比容值可以由测量的信号或血红蛋白浓度值差异和由权威方法诸如离心法提供的血细胞比容值之间的相关性表述来计算。尽管免疫色谱测试条可以是仅用于测量血红蛋白的测试条，但是如果该测试条是制备的容许同时测量CRP和血红蛋白的单免疫色谱测试条则更理想。理想的形式是本发明以上(9)或(10)中所述的免疫色谱测试条。
使用本发明的测量法的CRP的测量包括以下步骤将稀释和溶血血液样品滴在免疫色谱测试条的样品垫上，和在具有抗CRP抗体，即固定于不溶性膜支持物的针对CRP的抗体(针对CRP的第二抗体)的测量部分(下文中也称为"CRP测量线")上测量CRP浓度。特别地，CRP浓度通过使用其中针对CRP的第一抗体固定于标记物的缀合物和其上固定有针对CRP的第二抗体的不溶性膜支持物(如果针对CRP的第一抗体的表位是单价的，则所述第二抗体的表位与第一抗体不同，而如果所述第一抗体的表位是多价的，则所述第二抗体的表位可以与第一抗体相同或在一些情形中所述第一抗体可以与所述第二抗体相同)来测量。CRP浓度可以作为测量值，由来自具有固定的针对CRP的第二抗体的不溶性膜支持物上的CRP测量线的信号差直接获得，或可以是由该信号差计算的CRP浓度。将样品滴在免疫色谱测试条的样品垫上可以使用能够滴落一定量的样品如临床检查领域中常用的那些样品的任何程序来进行，并可以使用能够滴落一定量小滴的测量吸管或滴管进行。滴落可以手工进行或可以使用自动操作装置。测量源自标记物的信号的方法可以根据已知技术执行并且，例如，如果标记物是胶体金，则可以测量吸光度和反射光强度。CRP和血红蛋白的浓度可以通过将吸光度或反射光强度的差异外推至具有已知浓度的样品的标准曲线中来同时计算。使用本发明的测量法的CRP的测量包括以下步骤使用由在测试条的血红蛋白测量线中测量的血红蛋白值计算的血细胞比容值来校正在CRP测量线中测量的CRP浓度。在通过血细胞比容校正计算CRP的方法中，计算如通过通常使用下述另一种方法获得的血细胞比容值进行校正的情形来进行。
权利要求
1.通过免疫色谱法测量至少包含第一分析物的样品的方法，其包括以下步骤A，其中 样品中第一分析物的浓度在等于或大于获得所述第一分析物最大信号值时的浓度的浓度范围(前带现象区)内测量， A.利用下述I)和2)，通过竞争性免疫色谱法测量样品中第一分析物的步骤 1)缀合物，其中针对所述第一分析物的第一抗体固定于标记物；和 2)不溶性膜支持物，针对所述第一分析物的第二抗体固定于所述不溶性膜支持物(如果针对所述第一分析物的第一抗体的表位是单价的，则所述第二抗体的表位与第一抗体不同，而如果所述第一抗体的表位是多价的，则所述第二抗体的表位可与第一抗体相同或在一些情形中所述第一抗体可与所述第二抗体相同)。
2.权利要求1的方法，其中步骤A还使用下述3)和4)并且其中I)的缀合物包含在垫中，以形成缀合物垫并置于2)的不溶性膜支持物的上游侧， 3)样品垫，其位于缀合物垫的上游侧并供给以样品，和 4)吸收垫，其位于2)的不溶性膜支持物的下游侧。
3.权利要求1或2的方法，其中所述第一分析物是血红蛋白，且其中所述样品通过对血液进行稀释和溶血以达到等于或大于获得血红蛋白测量最大信号值时的浓度的浓度范围(前带现象区)来获得。
4.通过免疫色谱法测量至少包含作为第一分析物的血红蛋白和第二分析物的样品的方法，其包括以下步骤A至D : A.利用下述I)和2)，通过竞争性免疫色谱法测量样品中第一分析物的步骤 1)缀合物，其中针对所述第一分析物的第一抗体固定于标记物，和 2)不溶性膜支持物，针对所述第一分析物的第二抗体固定于所述不溶性膜支持物(如果针对所述第一分析物的第一抗体的表位是单价的，则所述第二抗体的表位与第一抗体不同，而如果所述第一抗体的表位是多价的，则所述第二抗体的表位可与第一抗体相同或在一些情形中所述第一抗体可与所述第二抗体相同)； B.利用下述5)和6)，通过免疫色谱法测量样品中第二分析物的步骤 5)缀合物，其中针对所述第二分析物的第一抗体固定于标记物，和 6)不溶性膜支持物，针对所述第二分析物的第二抗体固定于所述不溶性膜支持物(如果针对所述第二分析物的第一抗体的表位是单价的，则所述第二抗体的表位与第一抗体不同，而如果所述第一抗体的表位是多价的，则所述第二抗体的表位可与第一抗体相同或在一些情形中所述第一抗体可与所述第二抗体相同)； C.从步骤A获得的第一分析物的测量值获得样品的血细胞比容值的步骤；和 D.通过利用步骤C获得的血细胞比容值校正步骤B获得的第二分析物的测量值的步骤。
5.权利要求4的方法，其中步骤A和B是使用相同不溶性膜支持物的步骤。
6.权利要求5的方法，其中步骤A和B在相同流动通道中进行。
7.权利要求4至6中任一项的方法，其中所述第二分析物是C反应蛋白(CRP)。
8.用于通过免疫色谱法测量至少包含第一分析物和第二分析物的样品的免疫色谱测试条，所述免疫色谱测试条包括以下E和F : E.用于测量所述第一分析物的测试条，其包括下述I)和2)，1)缀合物，其中针对所述第一分析物的第一抗体固定于标记物；和 2)不溶性膜支持物，针对所述第一分析物的第二抗体固定于所述不溶性膜支持物(如果针对所述第一分析物的第一抗体的表位是单价的，则所述第二抗体的表位与第一抗体不同，而如果所述第一抗体的表位是多价的，则所述第二抗体的表位可与第一抗体相同或在一些情形中所述第一抗体可与所述第二抗体相同)；和 F.用于测量第二分析物的测试条，其包括下述5)和6)， 5)缀合物，其中针对所述第二分析物的第一抗体固定于标记物；和 6)不溶性膜支持物，针对所述第二分析物的第二抗体固定于所述不溶性膜支持物(如果针对所述第二分析物的第一抗体的表位是单价的，则所述第二抗体的表位与第一抗体不同，而如果所述第一抗体的表位是多价的，则所述第二抗体的表位可与第一抗体相同或在一些情形中所述第一抗体可与所述第二抗体相同)。
9.权利要求8的免疫色谱测试条，其中E中I)和F中5)的缀合物包含在相同垫中，以形成缀合物垫，并且其中E中2)的不溶性膜支持物与F中6)的不溶性膜支持物相同。
10.权利要求9的免疫色谱测试条，其中E和F置于相同流动通道内。
11.权利要求8至10中任一项的免疫色谱测试条，还包括以下G和H，其中E中I)和F中5)的缀合物包含在垫中以形成缀合物垫并且置于E中2)和F中6)的不溶性膜支持物的上游侧， G.样品垫，其位于缀合物垫的上游侧并供给以样品，和 H.吸收垫，其位于E中2)和F中6)的不溶性膜支持物的下游侧。
12.权利要求8至11中任一项的免疫色谱测试条，其中所述第一分析物是血红蛋白。
13.权利要求12的免疫色谱测试条，其中所述第二分析物是C反应蛋白(CRP)。
14.用于免疫色谱法的测定试剂盒，其包括权利要求12或13的免疫色谱测试条；和用于溶血和稀释的稀释溶液。
15.通过免疫色谱法测量至少包含第一分析物和第二分析物的样品的方法，其包括以下步骤A和B : A.利用下述I)和2)，通过竞争性免疫色谱法测量样品中第一分析物的步骤 1)缀合物，其中针对所述第一分析物的第一抗体固定于标记物；和 2)不溶性膜支持物，针对所述第一分析物的第二抗体固定于所述不溶性膜支持物(如果针对所述第一分析物的第一抗体的表位是单价的，则所述第二抗体的表位与第一抗体不同，而如果所述第一抗体的表位是多价的，则所述第二抗体的表位可与第一抗体相同或在一些情形中所述第一抗体可与所述第二抗体相同)；和 B.利用下述5)和6)，通过免疫色谱法测量样品中第二分析物的步骤， 5)缀合物，其中针对所述第二分析物的第一抗体固定于标记物；和 6)与A中2)相同的不溶性膜支持物，针对所述第二分析物的第二抗体固定于所述不溶性膜支持物(如果针对所述第二分析物的第一抗体的表位是单价的，则所述第二抗体的表位与第一抗体不同，而如果所述第一抗体的表位是多价的，则所述第二抗体的表位可与第一抗体相同或在一些情形中所述第一抗体可与所述第二抗体相同)。
16.权利要求15的方法，其中所述第二分析物是C反应蛋白(CRP)。
全文摘要
本发明提供利用免疫色谱法的测量方法、免疫色谱测试条和免疫色谱法试剂盒，所述免疫色谱法、免疫色谱测试条和免疫色谱法试剂盒能够以与常规方法相比简单的操作精确短期测量血液中的分析物。本发明提供通过免疫色谱法的测量方法，在所述免疫色谱法中，同一样品中的分析物和血红蛋白的浓度通过免疫色谱法来测量，从而利用血红蛋白的测量值对分析物的测量值进行血细胞比容校正，以及提供用于免疫色谱法的测试条和试剂盒。
文档编号G01N33/53GK103069277SQ201180026969
公开日2013年4月24日 申请日期2011年3月31日 优先权日2010年3月31日
发明者小林幸司, 森田元喜, 伊藤佐智子 申请人:积水医疗株式会社