专利名称：筛选方法
筛选方法交叉参考相关申请本申请要求2009年9月25日提交的第61/246，079号美国临时专利申请和2010 年2月19提交的第61/306，324号美国临时专利申请的优先权权益，所述临时专利申请的每一个通过弓I用整体并入本文。领域本发明涉及筛选多肽结合剂例如抗体的方法，所述多肽结合剂展示动力学调节生物信号复合物例如受体-配体复合物的结合和信号转导的能力。本发明还涉及特征在于期望的动力学调节性质的特异性多肽结合剂。附录的合并本申请包括随本申请一起提交的2009年9月25日创建的表，附录A，“41726_ SecretedProteins. txt” (大小255KB)。该ASCII文本文件中包含的材料由此根据37C. F. R. § I. 52(e) (5)通过引用整体并入本文。背景大多数抗体药物常规地通过筛选结合细胞表面受体或其同源配体的抗体，并且鉴定特异性阻断或刺激受体信号转导活性的抗体来进行鉴定。许多抗体药物通过结合配体或受体，从而消除配体结合以及激活受体的能力来阻断信号转导途径。此类阻断抗体通过阻止受体-配体复合物的形成来按化学计量介导它们的作用。相反地，某些抗体药物结合并且激活受体的信号转导。此类激动剂抗体可通过模拟配体的天然活性介导它们的作用，从而不需要配体的存在来激活信号转导。概述本发明提供了多肽结合剂(称为“动力学调节药物”或“动力学调节剂”)的新型种类，所述多肽结合剂具有正或负调节牵涉靶及其信号转导伴侣的细胞途径活性的期望的性质。靶和/或其信号转导伴侣可以是内源或外源化合物，性质上可以是蛋白质或非蛋白质，但其任选地可排除离子和盐。本发明还提供了鉴定此类动力学调节剂的新型方法，所述方法基于它们对于靶对其信号转导伴侣之间的结合动力学的影响，或基于所述动力学调节剂对以复合形式相对于以未复合形式存在的靶(和/或其信号转导伴侣)的差异结合。多肽结合剂可结合靶、其信号转导伴侣和/或包含靶及其信号转导伴侣的复合物。该发现使得能够设计可鉴定适合用于治疗用途的细胞途径活性的调节剂的生物物理筛选测定法。在某些方面，提供了鉴定调节靶与其信号转导伴侣之间的结合动力学的多肽结合剂的测定法。靶的非限定性实例包括例如附录A中所示的登录号(或SEQ ID NOS 1-88)中任一项的分泌性蛋白。此类分泌性蛋白包括许多分泌性膜结合受体。随同的附录 A 列出了由 Swissprot/EMBL 数据库(参见，例如，Boeckmann 等人“The SffISS-PROT protein knowledgebase and its supplement TrEMBL in 2003，，, Nucleic Acids Res. 31 365-370(2003)汇编的人分泌性蛋白。附录A显示了数据库中分泌性蛋白的氨基酸序列的 SwisspiOt登录号、所述蛋白的名称(和所有首字母缩写或相关名称)以及氨基酸序列的长度。如本文中所使用的，“信号转导伴侣”是靶的结合伴侣(当其与靶结合时，形成信号复合物)或为信号复合物的部分(其可激活或抑制细胞途径)。此类动力学调节剂多肽结合剂的存在改变(增强或减小)靶对于其信号转导伴侣的表观结合亲和力，从而改变靶对于激活细胞途径的剂量-反应。可选择地，改变(增加或减小)靶对于其信号转导伴侣的结合率或改变(增加或减小)靶对于其信号转导伴侣的解离速率的动力学调节剂多肽结合剂也可改变(增加或减小)与信号转导伴侣复合的靶的停留时间，改变受体内化率和/或改变被信号转导伴侣复合物激活或去活化的信号转导蛋白的磷酸化程度。此类改变可显著改变通过靶与信号转导伴侣的复合产生的不同信号转导途径的相对激活，从而改变靶对于激活细胞途径的剂量-反应。预期此类动力学调节剂具有优于常规治疗性药物的有利方面，包括提高的安全性(safety profile)、改变的清除率、更宽的治疗窗(therapeutic window) 和更低频率的给药。在靶是待给患者施用的外源化合物时，作为利用靶的辅助疗法的动力学调节剂的施用可改变(例如，减少)靶的给药的总量(每天、每周或每月)和/或频率。本发明提供了鉴定作为多肽结合剂(不包括常规小分子药物例如具有约1000道尔顿或更低的分子量的非聚合有机化合物)的候选动力学调节药物的方法。特别地涉及的多肽结合剂的实例包括抗体，包括其抗原结合片段、肽体(peptibody)、多肽和肽(任选地缀合于其它肽部分或非肽部分)。抗体的实例包括单克隆抗体、包含两条重链和两条轻链的四聚体免疫球蛋白、单链抗体、单结构域抗体、抗体片段、scFv、Fab、CDR、啮齿类动物抗体、 哺乳动物抗体、人抗体、嵌合抗体和人源化抗体。本发明提供了鉴定候选多肽结合剂例如抗体的方法，所述多肽结合剂调节信号复合物的第一组分与第二组分(靶与信号转导伴侣，或反之亦然)之间的结合。这样的第一组分和/或第二组分的实例包括附录A的分泌性蛋白(或SEQ ID NOS :1_88)和此类分泌性蛋白的内源或外源信号转导伴侣的任一种，或本文中描述的配体或受体或跨膜蛋白的任一种。在某些实施方案中，第一组分和第二组分是多肽。在不例性具体实施方案中，第一组分和第二组分是内源的。在一个方面，鉴定候选动力学调节药物的方法包括(a)测量在测试多肽结合剂例如抗体存在的情况下，所述第一组分对于所述第二组分的结合亲和力或结合率参数，(b)测量在所述测试多肽结合剂不存在的情况下，所述第一组分对于所述第二组分的结合亲和力或结合率参数；和(c)当所述测试多肽结合剂在于步骤(a)和(b)中测量的结合亲和力或结合率参数上展示至少I. 5倍差异时，将所述测试多肽结合剂鉴定为候选动力学调节药物。图I显示举例说明某些示例性实施方案的示意图。在某些实施方案中，结合亲和力或结合率参数的差异在约I. 5倍(即，50% )至任选地约1000倍、或约I. 5倍至约100倍、或约2倍至25倍、或约2倍至50倍、或约I. 5倍至约25倍、或约I. 5倍至约50倍之间、例如约I. 5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、 16倍、17倍、18倍、19倍或20倍、或达到500倍、或达到200倍、或达到150倍、或达到100 倍、或达到90倍、或达到80倍、或达到70倍、或达到60倍、或达到50倍、或达到40倍、或达到30倍。在某些实施方案中，如果测试多肽结合剂增强所述第一组分与所述第二组分之间的结合亲和力或结合率参数(例如，减小的KD，或增加的KA，或减小的解离速率/结合速率比率，或增加的结合速率/解离速率比率，或增加的结合速率，或减小的解离速率)，那么所述测试多肽结合剂被鉴定为候选正调节剂。在其它实施方案中，如果所述测试多肽试剂减小所述第一组分与所述第二组分之间的结合亲和力或结合率参数(例如，增加的KD，或减小的Ka，或增加的解离速率/结合速率比率，或减小的结合速率/解离速率比率，或减小的结合速率，或增加的解离速率)，那么所述测试多肽试剂被定义为候选负调节剂。在某些可选择的实施方案中，当更强的结合率参数(例如，增加的缔合或停留时间，通过增加的结合速率或减小的解离速率)导致增加的所期望信号转导途径的相对激活时，甚至当结合亲和力未被可检测地改变时，通过确定期望倍数的结合率参数的增强，将测试多肽结合剂鉴定为候选正调节剂。当更小的结合率参数(例如，减弱的缔合或停留时间， 通过减小的结合速率或增加的解离速率)导致增加的所期望信号转导途径的相对激活，甚至当结合亲和力未被可检测地改变时，通过确定结合率参数的期望的倍数减小，将测试多肽结合剂鉴定为候选正调节剂。类似地，当更强的结合率参数(例如，增加的缔合或停留时间，通过增加的结合速率或减小的解离速率)导致减小的所期望信号转导途径的相对激活时，甚至当结合亲和力未被可检测地改变时，通过确定结合率参数的期望的倍数增强，将测试多肽结合剂鉴定为候选负调节剂。当更弱的结合率参数(例如，减少的缔合或停留时间， 通过减小的结合速率或增加的解离速率)导致减少的所期望信号转导途径的相对激活，甚至当结合亲和力未被可检测地改变时，通过确定结合率参数的期望的倍数减弱，将测试多肽结合剂鉴定为候选负调节剂。在另一个方面，鉴定候选动力学调节药物的方法包括(a) (i)测量在所述第二组分存在的情况下，测试多肽结合剂例如抗体对所述第一组分的结合亲和力或结合率参数， 或(ii)测量在所述第一组分存在的情况下，测试多肽结合剂对所述第二组分的结合亲和力或结合率参数；和(b) (i)测量在所述第二组分不存在的情况下，所述测试多肽结合剂对所述第一组分的结合亲和力或结合率参数，或(ii)测量在所述第一组分不存在的情况下， 所述测试多肽结合剂对所述第二组分的结合亲和力或结合率参数；和(C)当所述测试多肽结合剂在步骤(a)和(b)中测量的结合亲和力或结合率参数上展示I. 5倍至100倍差异时， 将所述测试多肽结合剂鉴定为候选动力学调节药物。图2显示举例说明某些示例性实施方案的示意图，其中在第二组分存在或不存在的情况下测量相互作用。在某些实施方案中，步骤(a)和(b)中测量的结合亲和力或结合率参数的差异在约I. 5倍(S卩，50 % )，至任选地约1000倍，或约I. 5倍至约100倍，或约2倍至25倍，或约 2倍至约50倍，或约I. 5倍至约25倍，或约I. 5倍至约50倍之间，例如至少I. 5倍、2倍、 3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18 倍、19倍或20倍，或达到500倍，或达到200倍，或达到150倍，或达到100倍，或达到90 倍，或达到80倍，或达到70倍，或达到60倍，或达到50倍，或达到40倍，或达到30倍。在某些实施方案中，如果步骤(a)中测量的结合亲和力或结合率参数大于步骤(b)中测量的结合亲和力或结合率参数，则所述测试多肽结合剂被鉴定为候选正调节剂。在其它实施方案中，如果步骤(b)中测量的结合亲和力或结合率参数大于步骤(a)中测量的结合亲和力或结合率参数，则所述测试多肽结合剂被鉴定为候选负调节剂。可以以其中同时或相继地筛选多种多肽结合剂(例如，至少5、10、15、20、25、30、 35、40、50、100、150、200、500、1，000、10，000或25, 000种)的高通量测定法的形式进行上
述方法中的任何方法。在某些实施方案中，所述方法还包括任选地在测量结合亲和力或结合率参数的差异之前，测定多种测试多肽结合剂(例如抗体)对(a)所述第一组分、(b)所述第二组分或(C)包含所述第一组分和第二组分的复合物的任一种的结合亲合力。还可以以其中同时或相继地筛选多种多肽结合剂(例如，至少5、10、15、20、25、30、35、40、50、100、
150、200、500或1000种)的高通量测定法的方式进行文库的此种预筛选。在某些实施方案中，多种筛选的测试多肽结合剂是通过将一个或多个不同突变引入亲代多肽结合剂来制备的亲代多肽结合剂的变体。在其它实施方案中，可筛选多肽结合剂与不同结合伴侣(例如诱饵受体、清除作用受体或备选信号途径组分)相比较对第一组分或第二组分作用的选择性。此类方法可包括鉴定不显著改变第一组分或第二组分对于不同结合伴侣(此类结合伴侣既不是第一组分也不是第二组分)的结合亲和力或结合率参数的多肽结合剂。可在其中第一组分、第二组分和多肽结合剂的一种或多种存在于溶液中的测定中，或在其中第一组分、第二组分和多肽结合剂的一种或多种连接于固相(共价或非共价地)的测定中，或在其中第一组分、第二组分以及多肽结合剂的一种或多种在细胞表面上表达的测定中进行结合亲和力或结合率参数的上述测量中的任一测量。第一组分和/或第二组分各自本身可以是多种化合物的复合物。第一组分和/或第二组分(例如，靶或信号转导伴侣或反之亦然)可以是可溶性的或膜结合的配体或受体，包括但不限于7-跨膜受体、G-蛋白偶联受体(GPCR)、肾上腺素能受体、神经递质受体、嗅觉受体、阿片样物质受体、 趋化因子受体、视紫质、受体酪氨酸激酶、生长因子受体、整联蛋白以及toll-样受体、酶或底物。上述方法中的任一方法还可包括重新克隆和表达，或合成和表达，或合成候选动力学调节多肽结合剂；纯化所述动力学调节剂和/或测定其序列；添加或替换Fe区域或其片段；利用无菌的药学上可接受的稀释剂将动力学调节剂或变体(例如包含亲代抗体的相同CDR的至少3个或6个CDR的抗体)配制于无菌组合物中；和/或给动物施用所述动力学调节剂或变体。上述方法中的任一方法还可包括测量在所述测试多肽结合剂存在和不存在的情况下，由信号复合物介导的信号转导的水平，和确定所述测试多肽结合剂是否额外地是激动剂、部分激动剂、拮抗剂或部分拮抗剂。在某些实施方案中，所述激动剂或部分激动剂是变构激动剂。在相关方面，本发明提供了通过上述方法的任一方法或本文中其它地方描述的方法的任一方法鉴定的多肽结合剂例如抗体。在分开的方面，本发明还提供了具有期望的特征的多肽结合剂。在某些实施方案中，本发明提供了正调节剂，所述正调节剂以约10_5M或更小，例如，10_6M或更小，或10_7M或更小，或IO-8M或更小(其中更小的数表示更大的结合亲和力)的平衡离解常数Kd结合靶， 例如附录A(或SEQ ID NOS :1-88)中任一项的分泌性蛋白，和(b)能够使所述靶与其信号转导伴侣之间的结合亲和力Kd增加至约I. 5倍(即，50% )至任选地约1000倍，或约I. 5 倍至约100倍，或约2倍至25倍，或约2倍至约50倍，或约I. 5倍至约25倍，或约I. 5倍至约50倍，例如至少I. 5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13 倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19倍或20倍，或达到500倍，或达到200倍，或达到150 倍，或达到100倍，或达到90倍，或达到80倍，或达到70倍，或达到60倍，或达到50倍，或达到40倍，或达到30倍。在其它实施方案中，本发明提供了负调节剂，所述负调节剂(a)以约10_5M或更小，例如10_6M或更小，或10_7M或更小，或10_8M或更小的平衡离解常数Kd结合靶，例如附录A(或SEQ ID NOS :1-88)中任一项的分泌性蛋白，和(b)能够使所述靶与其信号转导伴侣之间的结合亲和力Kd减小至2/3 (即，50% )至任选地约1/1000，或约2/3至约 1/100，或约1/2至1/25倍，或约1/2至约1/50，或约2/3至约1/25，或约2/3至约1/50，例如至少 2/3、1/2、1/3、1/4、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9、1/10、1/11、1/12、1/13、1/14、1/15、1/16、 1/17、1/18、1/19 或 1/20，或 1/500，或 1/200，或 1/150，或 1/100，或 1/90，或 1/80，或 1/70， 或 1/60，或 1/50，或 1/40，或 1/30。还可将此类多肽结合剂中的任何多肽结合剂经历纯化，以获得大体上均质的组合物，例如具有至少约90%、95%、97%、98%、99%或99. 5%的纯度。本发明还提供了制备无菌药物组合物的方法(所述方法包括以例如治疗有效量向此类多肽结合剂、此类多肽结合剂的无菌组合物中加入无菌的药学上可接受的稀释剂) 和施用此类无菌组合物例如以调节(增强或减弱)包含分泌性蛋白的复合物的信号转导的方法。应理解，本文中描述的每一个特征或实施方案或组合是本发明的任何方面的非限定性的说明性实例，这样其意指可与本文中描述的任何其它特征或实施方案或组合组合。 例如，当用语言例如“一个实施方案”、“某些实施方案”、“其它实施方案”、“特定的示例性实施方案”和/或“另一个实施方案”描述特征时，这些类型的实施方案的每一个是意欲与本文中描述的任何其它特征或组合特征组合而不必列出每一个可能的组合的特征的非限定性实例。此类特征或特征的组合用于本发明的任何方面。类似地，当方法描述鉴定特征在于某些特征的多肽结合剂例如抗体时，本发明也涉及特征在于那些特征的多肽结合剂。当公开落在范围内的值的实例时，设想这些实例中的任一实例作为范围的可能端点，设想这样的端点之间的任何和所有数值，并且可预期上端点与下端点的任何和所有组合。在考虑下列本发明的详细说明后，本发明的许多另外方面和有利方面对于本领域技术人员将变得很显然，所述详细说明描述了其目前优选的实施方案。本申请中提及的所有美国专利、美国专利申请公布、美国专利申请、外国专利、外国专利申请以及非专利公布通过引用整体并入本文。附图简述图I是举例说明在测试多肽结合剂存在或不存在的情况下进行的结合的测量的示意图。图2是举例说明在第二复合物组分存在或不存在的情况下进行的结合的测量的示意图。图3显示预测的动力学调节抗体在(A)不同配体浓度；(B)不同调节剂浓度(非激动剂抗体)；和(C)不同调节剂浓度(激动剂抗体)上对信号转导活性的作用。图4显示来自检测蛋白质-蛋白质相互作用的调节的平衡溶液亲和力测量的模拟数据。图5显示XOMA 052对IL-I β与IL-IsRI (A)以及与IL-IsRII (B)结合的亲和力的影响。图6显示(A)XOMA 052以IL-I β对于细胞测定的EC5tl来中和IL-I β活性，和(B， C) IL-I β与IL-IsRI的相互作用的负亲和力调节导致改变的对IL-I β的细胞剂量-反应， 从而导致IC5tl的增加。
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图7显示注射抗体/IL-I β复合物后48小时保留在循环中的总IL-I β的量。图8是T2D中不同药物类型调节IL-I β活性的图示。图9显示来自如实施例2中所述，鉴定调节GCSF-GCSFR结合相互作用的抗体的固相亲和力测量测定的结果。

图10显示AlO (Β6)抗体对GCSFR-转染的BAF3细胞的GCSF依赖性结合。图11显示来自鉴定调节hINS-INSR结合相互作用的抗体的基于细胞的亲和力测量测定的样本结果。图12显示来自测量测试抗体对hINS-INSR结合相互作用的调节的基于细胞的亲和力测量测定的样本结果。图13显示来自测量测试抗-INSR抗体刺激pIRS_l磷酸化的能力的测定的示例性结果。图14是显示在固定浓度的不同测试抗体存在或不存在的情况下来自pIRS-Ι测定的胰岛素ECSO值的表。图15显示饲喂高脂饮食并且用部分激动剂抗-INSR抗体处理的20周龄DIO小鼠的血糖水平A.葡萄糖水平的线形图。B.显示在部分激动剂抗-INSR抗体注射后血糖的统计上显著降低的葡萄糖水平的条形图。图16举例说明部分激动剂抗-INSR抗体的施用改善DIO小鼠的血糖控制-X葡萄糖耐量测试时间过程空腹血糖水平；C.葡萄糖耐量测试；曲线下面积(AUC)。图17显示正调节剂抗-INSR抗体增强DIO小鼠的胰岛素敏感性A.胰岛素耐量测试时间过程；B.空腹血糖水平；C.胰岛素耐量测试；曲线下面积(AUC)。图18显示正调节剂抗-INSR抗体改善DIO小鼠的血糖控制A.葡萄糖耐量测试时间过程；B.空腹血糖水平；C.胰岛素耐量测试；曲线下面积(AUC)。图19举例说明与对内源配体的剂量反应相比较的来自部分变构激动剂的剂量反应(A)或在变构激动剂存在或不存在的情况下由配体产生的激活(B)。图20显示与对内源配体的剂量反应相比较的来自正变构调节剂抗体的剂量反应 (A)或在正变构调节剂抗体存在和不存在的情况下内源配体的剂量反应(B)。图21举例说明一组单独的部分变构激动剂相对于内源配体胰岛素的激活参数。 数据获自Akt在Ser473上的磷酸化％的测量。图22举例说明在lOug/ml部分变构激动剂抗体存在的情况下，相对于在阴性对照抗体存在的情况下对内源配体的最大反应的胰岛素的激活性质。数据获自Akt在Ser473 上的磷酸化％的测量。详述本发明提供了作为多肽结合剂的动力学调节药物、其用途以及鉴定所述动力学调节药物的多种方法。此类动力学调节剂可通过改变信号复合物组分的装配和解离的动力学速率常数(kinetic rate constant)或通过其它机制(包括改变信号复合物的结构状态 (例如通过结合过渡态(transition state))和加速信号转导的激活)诱导对细胞反应的正或负作用。信号复合物的调节可导致对信号输入的敏感性的增强或减弱以及信号转导的伴随增强或减弱。此类动力学调节剂的施用增强或减弱细胞途径的敏感性和/或细胞反应的绝对水平。本发明的动力学调节剂，取决于它们的性质，可用作调节剂、增强剂 (potentiator)、调控剂(regulator)、效应物或敏化物(sensitizer)。许多抗体药物通过结合细胞表面受体或其同源配体并且消除配体结合及激活受体的能力来阻断信号转导途径。此类阻断药物通过阻止受体-配体复合物的形成来化学计量地介导它们的作用。然而，大当被异常激活时与疾病相关的多数途径，在正常生物学中也具有正常的发育或内环境稳定(homeostatic)作用。该观察对于免疫系统尤其如此，在所述免疫系统中高效力细胞因子例如TNF- α和IL-6在病理背景中驱动炎症但在感染的控制中也具有重要的有益作用。某些疾病的成功治疗因而可能需要减弱而非完全抑制信号途径来恢复正常生理状态，从而具有可接受的副作用特征。预期由本发明提供的动力学调节剂提供此类有利方面。其它治疗性药物通过结合细胞表面受体和改变受体的活性影响细胞信号转导途径。此类直接激动剂药物可通过模拟配体的天然活性来介导它们的作用，从而具有固有活性，即它们不需要配体的存在来介导它们的作用。其它治疗性药物通过结合配体来影响细胞信号转导途径。此类间接激动剂药物可通过改变配体稳定性或效价来介导它们的作用。生物过程通常以连续而非二分(binary)方式被调控，从而在许多情况下，途径活性的调节可以是比完全途径阻断或刺激更适当的治疗策略。对途径活性的调节而非对完全途径阻断或刺激进行功能性的基于细胞的筛选是很费力的并且可能不容易以高通量方式来容易地进行，因为此类筛选通常需要已知浓度的测试化合物并且可能对测试化合物制剂中的任何杂质敏感。特别地，对途径活性的调节进行高通量功能性的基于细胞的筛选的能力因不能透过细胞的分子(其不能进入细胞内环境)，特别地因在所使用的产生系统中可具有不同的表达水平、纯度和稳定性的程度的重组生物分子而受到限制。此外，某些结合相互作用可能对功能性筛选的测量不具有信号转导输出(例如，在诱饵受体、诱饵底物或靶的无活性形式的情况下)，这使得难以鉴定干扰这些相互作用的试剂。本发明克服了这些不利方面并且提供了以高通量方式鉴定期望的活性和期望的潜能的正和负动力学调节剂的方法。定义术语"化合物"是指任何化合物，有机的或无机的，内源或外源的，包括但不限于多肽、蛋白质、肽、小分子、核酸(例如，DNA和RNA)、碳水化合物、脂质、脂肪酸、类固醇、嘌呤、喃唳、肽模拟物、聚酮(polyketides)及其衍生物、结构类似物或组合。“内源的”意指天然存在于哺乳动物中的，然而“外源的”意指非天然存在于哺乳动物中的，例如施用的外源化合物。术语“多肽结合剂”是指能够特异性结合抗原例如靶或其信号转导伴侣，或能够以可测量的结合亲和力结合抗原的多肽。多肽结合剂的实例包括抗体、肽体、多肽和肽(任选地缀合于其它肽部分或非肽部分)。多肽结合剂可结合的抗原可包括任何蛋白质或非蛋白质分子，所述分子能够引起抗体反应，或能够以大于非特异性结合的可检测的结合亲和力结合多肽结合剂。动力学调节多肽结合剂结合的抗原可包括靶、靶的信号转导伴侣和/或包含靶和其信号转导伴侣的复合物。术语“抗体”以最广义使用，包括完全装配的抗体、四聚体抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、可结合抗原的抗体片段(例如，Fab’、F’(ab)2、Fv、单链抗体、双链抗体)以及包含前述抗体的重组肽(只要它们展示期望的生物活性)。“免疫球蛋白”或“四聚体抗体”是由两条重链和两条轻链组成的四聚体糖蛋白， 所述重链和轻链各自包含可变区和恒定区。抗原结合部分可通过重组DNA技术或通过酶促或化学切割完整抗体来产生。抗体片段或抗原结合部分包括，除其它以外，Fab、Fab'、 F(ab/ )2、Fv、结构域抗体(dAb)、互补决定区(CTR)片段、单链抗体(scFv)、单链抗体片段、嵌合抗体、双链抗体、三链抗体、四链抗体、微小抗体(minibody)、线性抗体；螯合重组抗体、三抗体或双抗体、内抗体(intrabody)、纳米抗体、小模块免疫药物(SMIP)、抗原-结合-结构域免疫球蛋白融合蛋白、骆驼化抗体、含VHH抗体或其变体或衍生物，以及包含免疫球蛋白的至少一部分的多肽，所述部分足以赋予所述多肽特异性抗原结合，例如1、2、3、
4、5或6个⑶R序列，只要所述抗体保持期望的生物活性即可。“单克隆抗体”是指获自大体上同源的抗体群体的抗体，S卩，除了可以以少量存在的可能天然发生的突变外，包括所述群体的单一抗体是相同的。如本文中所使用的“抗体变体”是指在天然抗体可变区结构域中包含至少一个氨基酸置换、缺失或插入的抗体多肽序列。变体可与未修饰的抗体大体上同源或大体上同一。如本文中所使用的，“嵌合抗体”是指包含来源于通常源自不同物种的两种不同的抗体(参见，美国专利No. 4，816，567)的序列的抗体。最常见地，嵌合抗体包含人和啮齿类动物的抗体片段，通常是人恒定区和小鼠可变区。“中和抗体”是能够消除或显著减弱其结合的抗原的生物功能的抗体分子。因此， “中和”抗体能够消除或显著减弱生物功能，例如酶活性、配体结合或细胞内信号转导。“分离的”抗体是已被鉴定并且与其天然环境的组分分离和从其回收的抗体。其天然环境的污染组分是可干扰所述抗体的诊断或治疗用途的物质，并且可包括酶、激素和其它蛋白质或非蛋白质溶质。在优选实施方案中，抗体将被纯化为(I)如通过Lowry法测定的，按抗体重量计高于95%，最优选按重量计高于99%，(2)足以通过使用旋杯式序列分析仪(spinning cup sequenator)获得N末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度, 或(3)通过在还原或非还原条件下使用考马斯蓝或优选银染法进行的SDS-PAGE纯化为均质)。分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体，因为抗体的天然环境的至少一个组分可以不存在。然而，通常地分离的抗体将通过至少一个纯化步骤来制备。如本文中所使用的，“特异性结合”是“抗原特异性的”，是“特异于”抗原的或与抗原“免疫反应的”的抗体是指以大于对于相似序列的其它抗原的亲和力的亲和力结合抗原的本发明的抗体或多肽结合剂。在一个方面，本发明的多肽结合剂或其片段、变体或衍生物将以与其对其它物种(即非人物种)的相似抗原的结合亲和力相比较更大的亲和力结合人抗原，但识别并且结合靶的直系同源物的多肽结合剂在本发明的范围内。例如，作为“特异于”其同源抗原的抗体或其片段的多肽结合剂显示抗体的可变区识别并且以可检测的偏爱性结合期望的抗原(例如，当期望的抗原是多肽时，抗体的可变区能够通过结合亲和力的可测量的差异区别抗原多肽与相同家族的其它已知多肽，尽管在家族成员之间可能存在局部序列同一性、同源性或相似性)。应理解，特异性抗体也可通过与抗体的可变区外的序列，特别地分子的恒定区中的序列的相互作用与其它蛋白质(例如，在ELISA技术中，金黄色葡萄球菌(S. aureus)蛋白A或其它抗体)相互作用。用于本发明的方法的测定多肽结合剂例如抗体的结合特异性的筛选测定法在本领域是公知的并且在本领域中进行常规地实施。关于此类测定法的综述，参见Harlow等人(编)，Antibodies A Laboratory Manual ；Cold Spring Harbor Laboratory ；Cold Spring Harbor,NY(1988), 第6章。用于本发明的抗体可使用本领域已知的任何方法来产生。术语“表位”是指任何分子的能够被选择性结合剂在一个或多个抗原结合区上识别和结合的部分。表位通常由分子的化学活性表面基团例如氨基酸或糖类侧链组成，并且具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。本文中使用的表位可以是连续的或非连续的。术语“衍生物”，当与本发明的多肽结合剂和多肽结合使用时，是指通过这类技术 (如遍在蛋白化、至治疗剂或诊断剂的缀合、标记(例如，利用放射性核素或不同的酶)、共价聚合物连接例如PEG化(利用聚乙二醇的衍生化)和通过通常不存在于人蛋白质中的氨基酸例如鸟氨酸的化学合成产生的插入或置换)来化学修饰的多肽。衍生物保持本发明的未衍生的分子的结合性质。“可检测的部分”或“标记”是指可通过分光光度计、光化学、生物化学、免疫化学或化学方法检测的组合物。例如，有用的标记包括32P、35S、荧光染料、电子致密试剂、酶(例如，常用于ELISA的)、生物素-链霉抗生物素蛋白、地高辛、半抗原和针对其的抗血清或单克隆抗体是可获得的蛋白质或具有与另一种标记的核酸分子的序列互补性的核酸分子。可检测的部分通常产生可测量的信号，例如放射性、生色或荧光信号，所述信号可用于定量样品中结合的可检测部分的量。“肽”或“寡肽”是短氨基酸序列，通常在长度上为3至100个氨基酸残基并且包括天然存在的氨基酸残基和残基的非天然存在类似物(其可被单独使用或可与天然存在的氨基酸残基组合使用以给肽提供特殊构象特异性或特殊生物活性，例如对蛋白酶解的抗性)。肽包括肽序列的重复，可包括2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个拷贝的头尾或头头相接排列的氨基酸序列。可将肽缀合于非肽部分，例如[扩展]。肽包括二聚体、三聚体或高级多聚体(例如，通过缀合于其它聚合物或非聚合物部分例如PEG形成的)。“多肽”是更长的氨基酸序列，通常在长度上为100或更多个氨基酸残基，并且包括天然存在的氨基酸残基和残基的非天然存在类似物，所述类似物可被单独使用或可与天然存在的氨基酸残基组合使用以给多肽提供特殊构象特异性或特殊生物活性，例如对蛋白酶解的抗性。如本文中所使用的，“肽”是包含一个或多个融合至所有或部分免疫球蛋白(Ig)恒定区的肽的融合多肽。参见，例如，美国专利No. 6，660，843。肽可以是结合抗原的任何天然存在或重组制备或化学合成的肽。肽可以是重复的，可包括2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个拷贝的头尾或头头相接排列的氨基酸序列。Ig恒定区的部分可包括至少一个恒定区结构域(例如，CHU CH2、CH3和/或CH4)、多个结构域(例如，CH2和CH3)、多个拷贝的结构域(例如，CH2-CH2)、保持期望的活性的恒定结构域的任何片段，例如负责循环中免疫球蛋白的延长的半衰期的清道夫受体表位，或其任何组合。“小”分子或“小”有机分子在本文中被定义为具有约1000道尔顿或更小的分子量的非聚合物有机化合物。如本文中所使用的，“信号复合物”是蛋白质和/或内源或外源化合物的装配体，其可介导细胞信号的转导。信号复合物的实例包括但不限于与膜结合受体结合的配体、与底物结合的酶和与传播参与信号级联的生化反应相关的任何细胞分子。信号复合物还可包括共受体、辅因子、支架蛋白、变构调节剂和许多其它类型的参与细胞信号转导的蛋白质和分子。信号复合物可短暂形成或可长期形成。信号复合物的分子成份(constituent)或组分可随时间过去而变化并且可取决于各组分的激活状态和细胞环境。信号复合物可经历可化学修饰和调节，所述修饰和调节可诱导连串的对复合物的作用，包括转导活性的微妙改变、 完全灭活和基本灭活或正调节及负调节。信号复合物的组分可以是蛋白质，例如附录A(或 SEQ ID NOS 1-88)中任一项的分泌性蛋白，其可与其它蛋白质和/或化合物缔合存在于复合物中(“复合的”)或与其分开地存在(“未复合的”)。术语“治疗有效量”在本文中用于表示有效地改善或减轻与信号复合物的异常 (例如，异常高或异常低)信号转导相关的疾病的症状或体征的本发明的动力学调节剂组合物的量。如本文中所使用的，“结合”是两种或更多种不同的分子实体之间物理缔合，其因由一种或多种弱力(包括氢键、范德瓦尔斯、离子-偶极和疏水作用)和强力离子键组成的非共价相互作用的特定网络而引起。结合的水平或程度可用亲和力来测量。亲和力或“结合亲和力”是两个或更多个不同分子实体之间的结合相互作用的强度的量度，其可通过平衡结合常数或动力学结合率参数来确定。适当的常数或参数以及它们的测量单位的实例在本领域是公知的，包括但不限于平衡结合常数(Ka)，例如，约IO5M4或更高，约ΙΟΙ1或更高， 约IO7IT1或更高，约IO8IT1或更高，约IO9IT1或更高，约101°]^1或更高，约IO11ITi或更高或约 IO12IT1或更高；平衡离解常数(Kd)，例如，约1(Γ5Μ或更小，或约1(Γ6Μ或更小，或约1(Γ7Μ或更小，或约10_8M或更小，或约10_9M或更小，或约KTkiM或更小，或约10_nM或更小，或约10_12M 或更小；结合速率(例如，秒Λ moF1)和解离速率(例如，秒I)。在Ka的情况下，更高的值表示“更强”或“增强的”结合亲和力，而在Kd的情况下，更低的值表示“更强”或“增强的”结合亲和力。如本文中所使用的，“增强的”结合率参数表示增加的停留时间、更快的缔合或更慢的解离。如本文中所使用的“减弱的”结合率参数表示减少的停留时间、更慢的缔合或更快的解离。在结合速率的情况下，更高的值表示更快或更频繁的缔合，从而通常导致增强的结合亲和力。在解离速率的情况下，更低的数值通常表示更慢的解离，从而通常导致更强的结合亲和力。然而，结合速率与解离速率的比率表明结合亲和力，如在后面更详细地解释的。可直接或间接测量两种化合物之间，例如抗体与抗原之间或信号复合物的第一组分和第二组分之间的亲和力。可使用表示亲和力和/或与亲和力成比例的替代性质进行亲和力的间接测量。此类替代性质包括信号复合物的第一组分与第二组分的结合的量或水平，或预示着第一组分对第二组分的表观结合亲和力或与第一组分对第二组分的表观结合亲和力相关的第一组分或第二组分的生物物理特征。具体实例包括在第一组分或第二组分的亚饱和浓度上测量第一组分对第二组分的结合的量或水平。可测量的其它生物物理特征包括但不限于第一组分和第二组分之一或两者的净分子电荷、旋转活性(rotational activity)、扩散速率、解链温度(melting temperature)、静电牵引(electrostatic steering)或构象。可测量的其它生物物理特征包括测定在不同温度、pH或离子强度的影响下结合相互作用的稳定性。测量的亲和力取决于进行测量所使用的确切条件，包括，除许多其它因素外，结合组分的浓度、测定设置、结合组分的效价、缓冲液组成、pH、离子强度和温度以及添加至结合反应的其它组分例如变构调节剂和调控剂。可将定量和定性方法用于测量结合相互作用的绝对强度和相对强度。表观亲和力是在其中亲和力在结合反应中被条件或组分例如变构调节剂、抑制剂、结合组分效价等改变的条件下，两种或更多种不同分子实体之间的结合相互作用的强度的量度。如本文中所使用的，“亚饱和浓度”是结合反应中显著低于结合亲和力Kd的一种或多种组分的浓度和/或在结合反应中低于占据其它组分的所有结合位点所需的浓度的一种组分的浓度。在亚饱和条件下，结合反应中显著百分比的结合组分之一具有可用的结合位点。如本文中所使用的，“生物物理测定法”是以绝对或相对方式测量至少两种化合物之间的结合、缔合、解离、结合亲和力、结合水平或结合率参数的任何方法。生物物理测定法通常在体外进行并且可用纯化的结合组分、未纯化的组分、细胞结合的组分以及纯化的组分与细胞结合的组分的组合来进行。激动剂是用于描述结合并且激活信号复合物组分的信号转导的一种类型的配体或药物的术语。改变信号复合物组分(例如受体)的活性的能力(也称为激动剂的功效) 是区别其与拮抗剂(一种也结合信号复合物组分但不激活信号复合物组分的信号转导的受体配体)的性质。激动剂的功效可以是正的，引起信号复合物组分的活性增加，或可以是负的，引起信号复合物组分的活性的减弱。完全激动剂结合并且激活信号复合物组分，在该信号复合物上展示完全的功效。部分激动剂也结合并且激活给定的信号复合物组分，但相对于完全激动剂在所述信号复合物组分上只具有部分功效。反激动剂是结合与该信号复合物组分的激动剂相同的信号复合物组分结合位点并且逆转信号复合物组分的组成型活性的试剂。反激动剂产生激动剂的相反药理作用。共激动剂与其它共激动剂一起作用以一起产生期望的作用。在不同方面，本文中公开的激动剂用作变构激动剂。它们结合受体的部分，所述部分与活性配体结合位点不同，并且未明显改变配体与受体的结合亲和力，例如它们使结合亲和力的改变小于2倍或3倍。它们也未明显地影响其受体的配体激活的EC50，例如它们使EC50的改变小于2倍或3倍。此类变构激动剂以最大激动剂反应组成型地激活受体， 所述最大激动剂反应为配体的最大激动剂反应的80%或更低，例如15% -80%,20-80%, 20-60 %、20 % -40 %或15 % -30 %。在某些实施方案中，变构激动剂以最大激动剂反应组成型地激活受体，所述最大激动剂反应为配体的最大激动剂反应的至少约15 %、20 %、25 %、 30%,35%,40% ;和达到配体的最大激动剂反应的45%、50%、55%、60%、65%、70%、75% 或80%。应理解，可设想这些范围端点的任何端点的任何组合而不必引述每一个可能的组合。在其它实施方案中，本发明提供了以10_5、10_6、10_7、10_8、10_9M或更小(其中更小的数值表示更大的结合亲和力)的Kd亲和力结合受体的变构激动剂。不希望受本发明的理论束缚，变构激动剂的弱激动剂活性用于模拟天然基线配体激活水平的作用，同时允许外源施用的配体具有其正常作用。在某些实施方案中，变构激动剂是部分变构激动剂。拮抗剂阻断激动剂对受体的激活。选择性激动剂对于一种特定类型的信号复合物组分具有选择性。 此外，其还可以是上述类型的任何类型。在示例性实施方案中，本发明提供了变构激动剂多肽结合剂，例如抗体，所述多肽结合剂以至少10_5、10_6、10_7、10_8、10_9M或更小(其中更小的数值表示更大的结合亲和力)的亲和力结合附录A(或SEQ ID NOS :1-88)中的任何分泌性蛋白，和(a)当在体外测定中测量时展示为天然配体的最大激动剂活性的20%-80%的最大激动剂活性，(b)当存在时，对配体对于受体的EC50的改变不超过2倍，以及(c)当存在时，对配体对于受体的KD的改变不超过2倍。激动剂的效力通常利用其EC50值的倒数来确定。可通过测定引起激动剂的半数最大生物反应所需的激动剂的浓度来计算给定的激动剂的EC50值。EC50值越低，激动剂的效力越大。拮抗剂是一种类型的配体或药物，其在结合信号复合物组分(例如，受体)时本身不引发生物反应，但阻断或减弱激动剂介导的反应。拮抗剂对它们的同源信号复合物组分可具有亲和力但不具有功效，并且结合会破坏相互作用，从而抑制激动剂或反激动剂在受体上的功能。拮抗剂通过结合信号复合物组分上的活性位点或变构位点来介导它们的作用，或它们在通常不参与信号复合物组分的活性的生物调控的唯一结合位点上相互作用。 拮抗剂活性可以是可逆的或不可逆的，这取决于拮抗剂-受体复合物的寿命，这从而取决于结合信号复合物组分的拮抗剂的性质。大部分拮抗剂通过与内源配体或底物在受体上的结构确定的结合位点上竞争来发挥它们的效力。拮抗剂未显示激活它们所结合的信号复合物组分的功效。然而，一旦结合，拮抗剂可抑制激动剂、反激动剂和部分激动剂的功能。在功能性拮抗剂测定中，剂量-反应曲线测量一系列浓度的拮抗剂逆转激动剂的活性的能力的效力。拮抗剂的效力通常通过其IC50 值来确定。可通过测定引起激动剂的最大生物反应的一半抑制所需的拮抗剂的浓度来计算给定的拮抗的IC50值。IC50越低，拮抗剂的效力越大。竞争性拮抗剂在与配体或激动剂相同的结合位点(活性部位)可逆地结合信号复合物组分，但不激活信号复合物组分，从而与激动剂竞争信号复合物组分上的相同结合位点。非竞争性或变构拮抗剂结合与激动剂的结合位点分开的结合位点，通过该分开的结合位点将它们的作用施加于该信号复合物组分。因此，它们不与激动剂竞争结合。无竞争拮抗剂与非竞争性拮抗剂相异在于在它们可结合分开的变构结合位点之前，它们需要信号复合物组分激活。鉴定动力学调节剂的方法不受本发明的理论束缚，本公开内容提供了信号复合物的两个组分(第一组分，Cl和第二组分，C2)与动力学调节剂(M)之间的相互作用的动力学干扰(kinetic perturbation)可在被数学上描述为K，C1C2 = KC1C2(1+M/KMC1) (1+M/KMC2)(1+M/K[C1C2]M)其中组分之间的结合平衡常数(K' C1C2)的变化是组分之间的平衡常数(Kac2)、动力学调节剂浓度(M)、动力学调节剂对于复合物的亲和力(KK1C2]M)和动力学调节剂对于第一组分(Ksci)或第二组分(Ksc2)的亲和力的函数。在其中信号复合物是受体-配体复合物并且调节剂是抗体的情况下，抗体对受体-配体相互作用的动力学干扰在数学上可被描述为
其中受体-配体结合平衡常数(K' EL)的变化是受体-配体平衡常数(K1J、抗体浓度(A)、抗体对于复合物的亲和力(Kma)和抗体对于受体(Kak)或配体(IV)的亲和力的函数。动力学调节剂以使靶对于其信号转导伴侣的结合亲和力或结合率参数减弱或增强的方式结合靶或其信号转导伴侣、或靶与信号转导伴侣的复合物。例如，当靶是受体或配体时，配体对于其受体的结合亲和力或结合率参数在动力学调节剂存在的情况下被减弱或增强。具有完全阻断活性的动力学调节剂在该分析中代表了边界条件，因为当KKlffi]M充分高时，K' ac；2接近无穷大。该模型的一个含意(implication)是当动力学调节剂的浓度 ([M])高于动力学调节剂/抗原相互作用的平衡离解常数(Kd)足以饱和结合配体时，信号转导调节的程度不依赖于动力学调节剂浓度([M])。因此，相互作用的调节与对于复合物的亲和力相对对于组分的亲和力的比率相关，其中[M]大于调节剂与其抗原的KD。本公开内容提供了 动力学调节剂与靶和/或其信号转导伴侣相互作用的生物物理性质可用于预测动力学调节剂对靶信号转导途径的功能作用。因此，可基于它们的对于以复合形式存在的靶(和/或其信号转导伴侣)相对于以未复合形式存在的靶(和/或其信号转导伴侣)的相对亲和力来鉴定改变信号转导途径的动力学调节剂。本发明预期可以以下列方式预测动力学调节剂(M)对信号复合物的两个组分(第一组分，Cl和第二组分， C2)之间的相互作用的动力学干扰 K[C1C2]M 或 K[MC2]C1 或 K[MC1]C2〈 Kmc2 或 Kmci 导致正动力学调T1
K[C1C2]M 或 K[MC2]C1 或 K[MC1]C2 — Kmc2 或 Kmci 不导致动力学调T1 [Ο Ο3] K[C1C2]M 或 K[MC2]C1 或 K[MC1]C2〉Kmc2 或 Kmci 导致负动力学调T1在其中信号复合物是受体(R)-配体(L)复合物，并且动力学调节剂是抗体(A)的情况下，可以以下列方式预测动力学干扰K[EL]A或K[AL]K或K[赚< Kal或Kak导致正动力学调节K[EL]A或K[AL]K或K[赚=Kal或Kak不导致动力学调节K[KL]A或K[AL]K或K[赚> Kal或Kak导致负动力学调节在某些实施方案中，动力学调节剂例如抗体(A)可通过其在第一组分或第二组分的任何给定的亚饱和浓度(例如配体(L)浓度)上改变结合相互作用例如受体(R)-配体 (L)相互作用的能力来鉴定，如图3A中所描述的。图3A中的数据产生自可逆的相互作用模型，假定受体配体相互作用的亲和力为10pM、500pM或ΙΟηΜ。动力学调节剂可有效地使受体配体相互作用的亲和力和相应的剂量反应从500pM相互作用偏移至如所描绘的IOpM(正调节剂)或IOnM(负调节剂)。在某些实施方案中，动力学调节剂在给定的配体浓度上将产生更高水平的R-L结合，使测定曲线向左偏移(正调节)。在其它实施方案中，动力学调节剂在给定的配体浓度上产生更低水平的R-L结合，使测定曲线向右偏移(负调节)。在某些实施方案中，偏移是一致的，如图3A显示的。在其它实施方案中，偏移是不一致的，这反映了复合物中包括其它因子例如辅助蛋白、受体内化等。将图3A的500pM亲和力处的数据用于产生图3B和3C，其中描述了不同浓度的非激动剂(图3B)或激动剂(图3C)抗体对信号转导的作用，假定抗原的浓度是固定。对于举例说明性靶，胰岛素受体的结合特征与功能作用的相互关系描述于下面表 I中。表I
靶结合特征KD比率功能作用RLR-L--+K[RL]A < Kr, Kl正调节-++K[al]r〈 Kl正调节+-+K[AR]L < Kr正调节-++K[al]r〉Kl负调节+-+K[AR]L〉Kr负调节显示预测的效应匹配结合特征的数据的举例说明性实例示于下面表2中。表权利要求
1.一种鉴定调节信号复合物的第一组分与第二组分之间的结合的候选动力学调节抗体的方法，包括如下步骤(a)测量在测试抗体存在的情况下，所述第一组分对于所述第二组分的结合亲和力或结合率参数，(b)测量在所述测试抗体不存在的情况下，所述第一组分对于所述第二组分的结合亲和力或结合率参数；和(c)当所述测试抗体在步骤(a)和(b)测量的结合亲和力或结合率参数上显示I.5倍至1000倍差异，则将所述测试抗体鉴定为候选动力学调节抗体。
2.权利要求I所述的方法，其中如果所述测试抗体使所述第一组分与所述第二组分之间的结合亲和力或结合率参数增强至约I. 5倍至1000倍，则所述测试抗体被鉴定为候选正调节抗体。
3.权利要求2所述的方法，其中所述测试抗体使所述第一组分与所述第二组分之间的结合亲和力或结合率参数增强至约2倍至200倍。
4.权利要求I所述的方法，其中如果所述测试抗体使所述第一组分与所述第二组分之间的结合亲和力或结合率参数减弱至约2/3至1/1000倍，则所述测试抗体被鉴定为候选负调节抗体。
5.权利要求4所述的方法，其中所述测试抗体使所述第一组分与所述第二组分之间的结合亲和力或结合率参数减弱至约1/2至1/200倍。
6.一种鉴定调节信号复合物的第一组分与第二组分之间的结合的候选动力学调节抗体的方法，包括如下步骤(a)(i)测量在所述第二组分存在的情况下测试抗体对于所述第一组分的结合亲和力或结合率参数，或(ii)测量在所述第一组分存在的情况下测试抗体对于所述第二组分的结合亲和力或结合率参数；和(b)(i)测量在所述第二组分不存在的情况下，所述测试抗体对于所述第一组分的结合亲和力或结合率参数，或( )测量在所述第一组分不存在的情况下所述测试抗体对于所述第二组分的结合亲和力或结合率参数；和(c)当所述测试抗体在步骤(a)和(b)中测量的结合亲和力或结合率参数上显示1.5 倍至1000倍差异时，将所述测试抗体鉴定为候选动力学调节抗体。
7.权利要求6所述的方法，其中如果步骤(a)中测量的结合亲和力或结合率参数的强度为步骤(b)中测量的结合亲和力或结合率参数的约I. 5倍至1000倍，则所述测试抗体被鉴定为候选正调节抗体。
8.权利要求7所述的方法，其中步骤(a)中测量的结合亲和力或结合率参数的强度为步骤(b)中测量的结合亲和力或结合率常数的约2倍至200倍。
9.权利要求6的方法，其中如果步骤(b)中测量的结合亲和力或结合率参数的强度为步骤(a)中测量的结合亲和力或结合率参数的约I. 5倍至1000倍，则所述测试抗体被鉴定为候选负调节抗体。
10.权利要求9所述的方法，其步骤(b)中测量的结合亲和力或结合率参数的强度为步骤(a)中测量的结合亲和力或结合率参数的约2倍至200倍。
11.权利要求6-10中任一项所述的方法，其中测量所述测试抗体对于单独的所述第一组分的结合亲和率或结合率参数。
12.权利要求6-11中任一项所述的方法，其中测量所述测试抗体对于单独的所述第二组分的结合亲和力或结合率参数。12A.权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述测试抗体对于包含第一组分和第二组分的复合物的结合亲和力KD为约KT5IT1或更小，并且所述测试抗体不可检测地结合单独的所述第一组分或单独的所述第二组分。
13.权利要求1-12中任一项所述的方法，其中如果选自(A)所述测试抗体对于包含所述第一组分(Cl)和所述第二组分(C2)的复合物的结合亲和力或结合率参数，任选地KK1C2](B)所述第一组分对于包含抗体和所述第二组分的复合物的结合亲和力或结合率参数， 任选地!^^”，或(C)所述第二组分对于包含抗体和所述第一组分的复合物的结合亲和力或结合率参数，任选地Kfclto，的结合亲和力或结合率参数的强度为选自(I)所述测试抗体对于单独的所述第二组分的结合亲和力或结合率参数，任选地Ksc2，或(2)所述测试抗体对于单独的所述第一组分的结合亲和力或结合率参数，任选地ΚΜα，的约I. 5倍至1000倍，那么所述测试抗体(M)被鉴定为候选正调节抗体。
14.权利要求13所述的方法，其中(A)、⑶或(C)的任一个或多个的结合亲和力或结合率参数的强度为(I)或(2)的任一个或多个的结合亲和力或结合率参数的约2倍或200 倍。
15.权利要求13所述的方法，其中(A)、⑶或(C)的任一个或多个的结合亲和力或结合率参数的强度为(I)和(2)两者的结合亲和力或结合率参数的约I. 5倍至1000倍。
16.权利要求13所述的方法，其中(A)、⑶或(C)的任一个或多个的结合亲和力或结合率参数的强度为(I)和(2)两者的结合亲和力或结合率参数的约2倍至200倍。
17.权利要求13-16中任一项所述的方法，其中(I)的结合亲和力或结合率参数强于 (2)的结合亲和力或结合率参数。
18.权利要求13-16中任一项所述的方法，其中(2)的结合亲和力或结合率参数强于(I)的结合亲和或结合率参数。
19.权利要求13所述的方法，其中所述结合亲和力为平衡离解常数KD，并且KK1C2]M、 K[MC2]C1或Kmc2的任一个或多个为Ksc2或Kki的任一个或多个的约2/3至1/1000。
20.权利要求19所述的方法，其中Κ_]Α为Ksc2的约2/3至1/1000。
21.权利要求19所述的方法，其中Κ_α为KMe2的约2/3至1/1000。
22.权利要求19所述的方法，其中K_e2为Ksc2的约2/3至1/1000。
23.权利要求19所述的方法，其中Κ_]Α为Ksci的约2/3至1/1000。
24.权利要求19所述的方法，其中Κ_α为Ksci的2/3至1/1000。
25.权利要求19所述的方法，其中K_C2为Ksci的约2/3至1/1000。
26.权利要求13所述的方法，其中所述结合亲和力是平衡缔合常数KA，并且KK1C2]M、 K[MC2]C1或KKl]e2的任一个或多个为Ksc2或Kki的任一个或多个的约I. 5倍至1000倍。
27.权利要求1-12所述的方法，其中如果选自(I)测试抗体对于单独的所述第二组分 (C2)的结合亲和力或结合率参数，任选地KK2，(2)测试抗体对于单独的所述第一组分(Cl) 的结合亲和力或结合率参数，任选地Ksci，的结合亲和力或结合率参数的强度为选自(A)测试抗体对于包含所述第一组分和第二组分的复合物的结合亲和力或结合率参数，任选地 K[C1C2]M, (B)所述第一组分对于包含所述抗体和所述第二组分的结合亲和力或结合率参数， 任选地!^^”，或(C)所述第二组分对于包含所述抗体和所述第一组分的结合亲和力或结合率参数，任选地Kfcl]e2，的结合亲和力或结合率参数的约I. 5倍至1000倍，则所述测试抗体(M)被鉴定为候选负调节抗体。
28.权利要求27所述的方法，其中(I)或(2)的任一个或多个的结合亲和力或结合率参数的强度为(A)、(B)或(C)的任一个或多个的结合亲和力或结合率参数的约2倍或200 倍。
29.权利要求27所述的方法，其中(I)或(2)的任一个或多个的结合亲和力或结合率参数的强度为所有(A)、(B)和(C)的结合亲和力或结合率参数的约I. 5倍至1000倍。
30.权利要求27所述的方法，其中(I)或(2)的任一个或多个的结合亲和力或结合率参数的强度为所有(A)、(B)和(C)的结合亲和力或结合率参数的约2倍至200倍。
31.权利要求27-30中任一项所述的方法，其中(I)的结合亲和力或结合率参数强于(2)的结合亲和力或结合率参数。
32.权利要求27-30中任一项所述的方法，其中(2)的结合亲和力或结合率参数强于(I)的结合亲和力或结合率参数。
33.权利要求27所述的方法，其中所述结合亲和力是平衡离解常数KD，，并且Kk2或Kki的任一个为KK1C2]M、K[C2]C1或Kmc2的任一个的约2/3至1/1000。
34.权利要求33所述的方法，其中Ksc2为haC2]M 的约 2/3 至 1/1000。
35.权利要求33所述的方法，其中Ksc2为i[MC2]ci 的约 2/3 至 1/1000。
36.权利要求33所述的方法，其中Ksc2为i[Mci]c2 的约 2/3 至 1/1000。
37.权利要求33所述的方法，其中Ksci为haC2]M 的约 2/3 至 1/1000。
38.权利要求33所述的方法，其中Ksci为i[MC2]ci 的约 2/3 至 1/1000。
39.权利要求33所述的方法，其中Ksci为i[Mci]c2 的约 2/3 至 1/1000。
40.权利要求27所述的方法，其中所述结合亲和力为平衡缔合常数KA，并且Kk2或K,的任一个或多个为K[C1C2]M、K[MC2]C1或K[MC1]C2的任一个或多个的约I. 5倍至1000倍。
41.权利要求1-40中任一项所述的方法，其中，在步骤(a)中，将所述测试抗体和所述第二组分与多个不同浓度的所述第一组分接触。
42.权利要求1-40中任一项所述的方法，其中，在步骤(a)中，将所述测试抗体和所述第一组分与多个不同浓度的所述第二组分接触。
43.权利要求1-40中任一项所述的方法，其中，在步骤(a)中，将多个不同浓度的所述测试抗体与所述第一组分和所述第二组分接触。
44.权利要求2-6中任一项所述的方法，其中所述测试抗体结合的抗原是所述第一组分并且所述测试抗体与所述第一组分的浓度相比较处于饱和浓度。
45.权利要求2-6中任一项所述的方法，其中所述测试抗体结合的抗原是所述第二组分并且所述测试抗体与所述第二组分的浓度相比较处于饱和浓度。
46.权利要求44或45所述的方法，其中所述测试抗体的浓度大于或等于所述测试抗体对于包含所述第一组分和所述第二组分的复合物的KD。
47.权利要求46所述的方法，其中所述第二组分的浓度低于所述测试抗体对于所述第一组分的Kd。
48.权利要求47所述的方法，其中所述第一组分的浓度对于所述第一组分对所述第二组分的结合处于饱和浓度。
49.权利要求48所述的方法，其中所述第一组分的浓度在所述第一组分与所述第二组分的相互作用的约EC2tl至EC8tl的范围内。
50.权利要求2-6中任一项所述的方法，其中在一个或多个浓度的所述第二组分存在的情况下将一个或多个浓度的所述测试抗体与多个不同浓度的所述第一组分接触。
51.权利要求2-6中任一项所述的方法，其中在一个或多个浓度的所述第一组分存在的情况下将一个或多个浓度的所述测试抗体与多个不同浓度的所述第二组分接触。
52.权利要求7-8或13-26中任一项所述的方法，其中所述测试抗体对于包含所述第一组分和所述第二组分的复合物处于饱和浓度。
53.权利要求52所述的方法，其中所述测试抗体的浓度大于或等于所述测试抗体对于包含所述第一组分和所述第二组分的复合物的KD。
54.权利要求53所述的方法，其中所述第二组分的浓度大于所述第二组分对于所述第一组分的Kd。
55.权利要求54所述的方法，其中所述第一组分的浓度对于所述第二组分为饱和浓度。
56.权利要求7-8或13-26中任一项所述的方法，其中所述测试抗体对于包含所述第一组分和所述第二组分的复合物处于饱和浓度。
57.权利要求56所述的方法，其中所述抗体的浓度在所述第一组分与所述第二组分的相互作用的约EC2tl至EC8tl的范围内。
58.权利要求57所述的方法，其中所述第二组分的浓度大于所述第二组分对于所述第一组分的Kd。
59.权利要求58所述的方法，其中所述第一组分的浓度对于所述第二组分处于饱和浓度。
60.权利要求9-10或27-40中任一项所述的方法，其中所述测试抗体结合的抗原是所述第一组分并且所述测试抗体对于所述第一组分处于饱和浓度。
61.权利要求60所述的方法，其中所述抗体的浓度在所述第一组分与所述第二组分的相互作用的约EC2tl至EC8tl的范围内。
62.权利要求61所述的方法，其中所述第二组分的浓度大于所述第二组分对于所述第一组分的Kd。
63.权利要求62所述的方法，其中所述第一组分的浓度对于所述第二组分处于饱和浓度。
64.权利要求9-10或27-40中任一项所述的方法，其中所述测试抗体结合的抗原是所述第二组分并且所述测试抗体对于所述第二组分处于饱和浓度。
65.权利要求60所述的方法，其中所述抗体的浓度在所述第一组分与所述第二组分的相互作用的约EC2tl至EC8tl的范围内。
66.权利要求61所述的方法，其中所述第二组分的浓度大于所述第二组分对于所述第一组分的Kd。
67.权利要求62所述的方法，其中所述第一组分的浓度对于所述第二组分而言为饱和浓度。
68.权利要求1-67中任一项所述的方法，其还包括在步骤(a)之前，测定多个测试抗体对包含所述第一组分和所述第二组分的复合物的结合亲和力，任选地具有为KT5M的平衡离解常数Kd或更强的结合亲和力。
69.权利要求1-68中任一项所述的方法，其还包括在步骤(a)之前，测定多个测试抗体对所述第一组分的结合亲和力，任选地具有为KT5M的平衡离解常数Kd或更强的结合亲和力。
70.权利要求1-69中任一项所述的方法，其还包括在步骤(a)之前，测定多个测试抗体对所述第二组分的结合亲和力，任选地具有为KT5M的平衡离解常数Kd或更强的结合亲和力。
71.权利要求1-70中任一项所述的方法，其还包括在步骤(a)之前，通过将一个或多个不同的突变引入亲代抗体来产生多种测试抗体，所述测试抗体是亲代抗体的变体。
72.权利要求1-71中任一项所述的方法，其还包括测量在所述测试抗体存在和不存在的情况下，所述第一组分对于结合伴侣的结合亲和力或结合率参数，其中所述结合伴侣不是所述第二组分。
73.权利要求72所述的方法，其中所述结合伴侣是诱饵受体、清除受体或备用信号途径组分。
74.权利要求72或73所述的方法，其包括鉴定不显著改变所述第一组分对于所述结合伴侣的结合亲和力或结合率参数的测试抗体。
75.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述测试抗体选自抗体片段、scFv、Fab、 CDR、啮齿类动物抗体、哺乳动物抗体、人抗体、嵌合抗体和人源化抗体。
76.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述测试抗体是单克隆抗体。
77.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述结合亲和力或结合率参数选自前述任一项的平衡缔合常数Ka、平衡离解常数KD、结合速率、解离速率和替代参数。
78.权利要求77所述的方法，其中所述替代参数是所述第一组分在亚饱和浓度的所述第一组分或所述第二组分下对所述第二组分的结合的量或水平。
79.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述测试抗体、所述第一组分或所述第二组分全部存在于溶液中。
80.前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述测试抗体、所述第一组分和所述第二组分之一连接于固相。
81.权利要求80所述的方法，其中所述连接是非共价的。
82.权利要求80所述的方法，其中将所述测试抗体、所述第一组分和所述第二组分之一包被在珠粒上。
83.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一组分或所述第二组分的至少一种在细胞表面上表达。
84.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一组分在细胞表面上表达并且所述第二组分在不同细胞表面上表达。
85.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一组分是可溶性配体并且所述第二组分是膜结合受体。
86.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一组分是膜结合受体并且所述第二组分是可溶性配体。
87.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一组分是膜结合配体并且所述第二组分是膜结合受体。
88.权利要求86或87所述的方法，其中所述膜结合受体选自7-跨膜受体、G蛋白偶联受体(GPCR)、肾上腺素能受体、神经递质受体、嗅觉受体、阿片样物质受体、趋化因子受体、 视紫质、受体酪氨酸激酶、生长因子受体、整联蛋白和toll样受体。
89.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一组分是酶并且所述第二组分是所述酶的底物。
90.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一组分是两种或更多种化合物的复合物。
91.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第二组分是两种或更多种化合物的复合物。
92.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一组分是细胞因子或趋化因子并且所述第二组分是所述第一组分的受体。
93.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一组分是生长因子并且所述第二组分是所述第一组分的受体。
94.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一组分是IL-Iβ并且所述第二组分是I型IL-I受体(IL-IRI)。
95.前述权利要求中任一项所述的方法，其还包括测量在所述测试抗体存在和不存在的情况下，所述第一组分和/或所述第二组分对于第三组分的结合亲和力或结合率参数。
96.权利要求95的方法，其中所述第一组分是IL-Ιβ，所述第二组分是IL-1RI，并且所述第三组分是IL-I受体辅助蛋白(IL-IRAcP)。
97.权利要求96所述的方法，其还包括鉴定测试抗体，在所述测试抗体存在或不存在的情况下，所述测试抗体在IL-I β与IL-IRAcP之间的结合亲和力或结合率参数上未展示超过2倍差异。
98.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一组分是GCSF并且所述第二组分是 GCSFR。
99.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一组分是GCSFR并且所述第二组分是GCSF。
100.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一组分是TNFa并且所述第二组分是TNFRl或2。
101.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一组分是TNFRl或2并且所述第二组分是TNF a。
102.前述权利要求中任一项所述的方法，其还包括重新克隆和表达步骤(c)中鉴定的抗体。
103.前述权利要求中任一项所述的方法，其还包括纯化步骤(c)中鉴定的抗体。
104.前述权利要求中任一项所述的方法，其还包括测定步骤(c)中鉴定的抗体的序
105.前述权利要求中任一项所述的方法，其还包括添加或替换Fe区域或其片段。
106.前述权利要求中任一项所述的方法，其还包括利用无菌的药学上可接受的稀释剂将包含步骤(c)中鉴定的所述测试抗体的至少3个CDR的抗体配制在无菌组合物中。
107.前述权利要求中任一项所述的方法，其还包括给动物施用包含步骤(c)中鉴定的所述测试抗体的至少3个CDR的抗体。
108.前述权利要求中任一项所述的方法，其还包括测量在所述测试抗体存在和不存在的情况下由所述信号复合物介导的信号转导的水平。
109.权利要求108所述的方法，其中在磷酸化测量、离子流测定、分子运输测定或基因表达测定中测量由所述信号复合物介导的信号转导的水平。
110.权利要求108-109中任一项所述的方法，其中所述测试抗体使所述信号复合物的所述第一组分的EC5tl增加至约I. 5倍至约1000倍。
111.权利要求108-109中任一项所述的方法，其中所述测试抗体未显著改变对由所述第一组分产生的信号转导的最大激动剂反应。
112.权利要求108-109中任一项所述的方法，其中所述测试抗体使对由所述信号复合物产生的信号转导的最大激动剂反应减小至约2/3至1/1000。
113.权利要求108-109中任一项所述的方法，其中所述测试抗体使由所述信号复合物产生的信号转导的EC50减小至约2/3至1/1000。
114.权利要求108-109中任一项所述的方法，其中所述候选抗体增加对由所述第一组分产生的信号转导的最大激动剂反应至少10%。
115.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述候选抗体未显著地减少对所述第一组分、所述第二组分或包含所述第一和所述第二组分的复合物的清除。
116.由前述权利要求中任一项所述的方法鉴定的抗体。
117.—种正调节抗体，其以IO-5M或更小的平衡离解常数Kd结合SEQ ID NOS : I-88中任一项的分泌蛋白质，其能够使所述分泌蛋白质与其信号转导伴侣之间的结合亲和力Kd增加至约I. 5至1000倍。
118.权利要求117所述的抗体，其中所述正调节抗体能够使所述分泌蛋白质与其信号转导伴侣之间的结合亲和力Kd增加至约2倍至200倍。
119.一种负调节抗体，其以KT5M或更小的平衡离解常数Kd结合SEQ ID NOS :I-88中任一项的分泌蛋白质，其能够使所述分泌蛋白质与其信号转导伴侣之间的结合亲和力Kd减小至 2/3 至 1/1000。
120.权利要求119所述的抗体，其中所述负调节抗体能够使所述分泌蛋白质与其信号转导伴侣之间的结合亲和力Kd减小至约1/2至1/200。
121.—种正调节抗体(M)，其增强所述第一组分(Cl)对信号复合物的所述第二组分 (C2)的结合，所述抗体特征在于下列平衡离解常数Kd的结合性质(i)所述抗体以KT5M或更小的平衡离解常数Kd结合Cl、C2或包含Cl和C2的复合物(C1C2)的至少一种，和(ii) K[C1C2]M、K[MC2]C1 或Kmc2的任一个或多个为Ksc2或Ksci的任一个或多个的约2/3至1/1000， 其中Cl或C2为SEQ ID NOS :1_88中任一项的分泌蛋白质。
122.权利要求121所述的正调节抗体，其中K[C1C2]M、K[MC2]C1或K[MCI ]C2的任一个或多个为Kmc2或Ksci的任一个的约1/2至1/200。
123.权利要求121所述的正调节抗体，其中K[C1C2]M、K[MC2]C1或K[MCI ]C2的任一个或多个为Kk2 或 Ksci 的约 2/3 至 1/1000。
124.—种负调节抗体(M)，其减弱所述第一组分(Cl)对信号复合物的所述第二组分 (C2)的结合，所述抗体的特征在于下列平衡离解常数Kd的结合性质(i)所述抗体以KT5M 或更小的平衡离解常数Kd结合Cl、C2或包含Cl和C2的复合物(C1C2)的任一种，和(ii) Kic2或Kki的任一个或多个为Kki⑵M、K[MC2]C1或Kmc2的任一个或多个的约2/3至1/1000， 其中Cl或C2为SEQ ID NOS :1_88中任一项的分泌蛋白质。
125.权利要求124的负调节抗体，其中KAe2或ΚΑα的任一个或多个为K[C1C2]M、K[MC2]C1 ^K[MC1]C2的任一个或多个的约1/2至1/200。
126.权利要求124的负调节抗体，其中KAe2或ΚΑα的任一个或多个为K[C1C2]M、K[MC2]C1 BKK[MC1]C2 的约 2/3 至 1/1000。
127.—种正调节抗体，其以10_5M或更小的平衡离解常数Kd结合⑴IL-I β、(ii) IL-IRl或(iii)包含IL-I β和IL-IRl的复合物的任一种，所述抗体能够使IL-I β与 IL-IRl之间的结合亲和力Kd增强至约I. 5倍至1000倍。
128.—种负调节抗体，其以10_5Μ或更小的平衡离解常数Kd结合⑴IL-Ιβ、(ii) IL-IRl或(iii)包含IL-I β和IL-IRl的复合物的任一种，所述抗体能够使IL-I β与 IL-IRl之间的结合亲和力Kd减弱至约2/3至1/1000。
129.—种正调节抗体，其以10_5Μ或更小的平衡离解常数Kd结合(i) TNF a、(ii) TNFRl 或(iii)包含TNFa和TNFRl的复合物的任一种，所述抗体能够使TNFa与TNFRl之间的结合亲和力Kd增强至约I. 5倍至1000倍。
130.一种负调节抗体，其以KT5M或更小的平衡离解常数Kd结合(i)TNF a、(ii)TNFRl 或(iii)包含TNFa和TNFRl的复合物的任一种，所述抗体能够使TNFa与TNFRl之间的结合亲和力Kd减弱至约2/3至1/1000。
131.一种正调节抗体，其以10_5M或更小的平衡离解常数Kd结合(i) TNF a、(ii) TNFRl 或(iii)包含TNFa和TNFR2的复合物的任一种，所述抗体能够使TNFa与TNFR2之间的结合亲和力Kd增强至约I. 5倍至1000倍。
132.—种负调节抗体，其以KT5M或更小的平衡离解常数Kd结合(i) TNF a、(ii) TNFRl 或(iii)包含TNFa和TNFR2的复合物的任一种，所述抗体能够使TNFa与TNFR2之间的结合亲和力Kd减弱至约2/3至1/1000。
133.—种正调节抗体，其以10_5M或更小的平衡离解常数Kd结合(i)GCSF、(ii)GCSFR 或(iii)包含GCSF和GCSFR的复合物的任一种，所述抗体能够使GCSF与GCSFR之间的结合亲和力Kd增强至约I. 5倍至1000倍。
134.一种负调节抗体，其以10_5M或更小的平衡离解常数Kd结合(i)GCSF、(ii)GCSFR 或(iii)包含GCSF和GCSFR的复合物的任一种，所述抗体能够使GCSF与GCSFR之间的结合亲和力Kd减弱至约2/3至1/1000。
135.—种正调节抗体，其以10_5M或更小的平衡离解常数Kd结合(i)胰岛素、(ii)胰岛素受体或(iii)包含胰岛素和胰岛素受体的复合物的任一种，所述抗体能够使胰岛素与胰岛素受体之间的结合亲和力Kd增强至约I. 5倍至1000倍。
136.—种负调节抗体，其以10_5M或更小的平衡离解常数Kd结合⑴胰岛素、(ii)胰岛素受体或(iii)包含胰岛素和胰岛素受体的复合物的任一种，所述抗体能够使胰岛素与胰岛素受体之间的结合亲和力Kd减弱至约2/3至1/1000。
137.权利要求117-136中任一项所述的抗体，其为纯化的单克隆抗体。
138.编码权利要求116-137所述的抗体的任一个的多核苷酸。
139.编码权利要求116-137所述的抗体的任一个的重链的多核苷酸。
140.编码权利要求116-137所述的抗体的任一个的轻链的多核苷酸。
141.包含权利要求138-140所述中任一项的多核苷酸的宿主细胞。
142.包含权利要求139和140所述的多核苷酸的宿主细胞。
143.一种产生抗体的方法，包括在适合的条件下将权利要求141-142所述的宿主细胞培养在培养基中，然后从所述宿主细胞或培养基分离所述抗体。
144.由权利要求143所述的方法产生的抗体。
145.一种制备无菌药物组合物的方法，包括将无菌的药学上可接受的稀释剂添加至前述权利要求120-141或148中任一项所述的抗体中。
146.一种无菌组合物，其包含前述权利要求中任一项所述的抗体和无菌的药学上可接受的稀释剂。
147.—种给哺乳动物施用组合物的方法，包括施用权利要求146所述的无菌组合物。
148.权利要求147所述的方法，其中所述施用增强包含所述分泌蛋白质的复合物的信号转导。
149.权利要求147所述的方法，其中所述施用减弱包含所述分泌蛋白质的复合物的信号转导。
150.权利要求72所述的方法，其中所述第一组分是IL-Iβ，所述第二组分是IL-1R1， 并且所述结合伴侣是IL-1R2或IL-I辅助蛋白。
151.权利要求72所述的方法，其中所述第一组分是TNFa，所述第二组分是TNFRl，并且所述结合伴侣是TNFR2。
152.权利要求72所述的方法，其中所述第一组分是TNFa，所述第二组分是TNFR2，并且所述结合伴侣是TNFRl。
全文摘要
本发明提供了肽结合试剂，例如抗体，其展示动力学调节生物信号复合物例如受体-配体复合物的结合和信号转导的能力；鉴定此类多肽结合试剂的方法，制备此类多肽结合试剂的方法，包含此类多肽结合试剂的组合物，和使用此类多肽结合试剂的方法。
文档编号G01N33/68GK102597775SQ201080048214
公开日2012年7月18日 申请日期2010年9月24日 优先权日2009年9月25日
发明者丹尼尔·贝丁格, 玛丽娜·勒尔, 约翰·科尔宾, 罗伯特·鲍尔, 马克·莱斯利·怀特 申请人:佐马技术有限公司