专利名称：一种石蜡组织芯片制作方法
技术领域：
本发明涉及组织芯片制备领域，特别涉及到一种石蜡组织芯片制作方法。
背景技术：
组织微芯片技术是通过缩微技术，根据其生物学特性，将生命科学的不连续的分析过程集成于玻璃芯片的表面的一种微型生物化学分析系统，以实现对细胞、蛋白质、基因及其它生物组分的准确、快速、大信息量的检测，筛选。生物微芯片是用于新药研发的一项革新性工具。鉴于新药研发上市规律，最终一获得FDA批准上市新药，要由最初的I万种化合物中筛选，仅有1%的化合物可能进入动物实验，仅有其中的5-3种有可能进入人体试验，最终仅有一个被批准上市。 在确定一个有效药物之前的研发花费是相当可观的。在生物微芯片没有诞生之前，药企要花费大量的资金用于新药的有效化合物的筛选。它既费时，费人力，又极苦恼于人为的误差。人为的误差又可能导致最有效的候选化合物被错误地选掉了，而可能将根本无效或低效的候选化合物被错误地选上了。第三代芯片技术是将生物物质直接固定在玻璃芯片的表面，其保持生物特性和生物原性(如基因、RNA、DNA或蛋白质，甚至其形态学特性都能保持在活体的状态下)，所以，它不会带来任何在前处理过程中所导致的人为的或非人为的误差，同时因它能为多数样本提供统一的操作可能性，因而它不仅能提高效率，还更主要的是减少人为的误差。目前组织芯片的制作方法主要有模式组织芯移入生产和打空添入法生产，此外还有胶联法等等。尽管制作方法很多，但工艺复杂，甚至使用全自动控制的仪器，但是解决不了微芯片的制作过程中易出现的受体蜡破裂、倒伏、移位、组织芯参差不齐、切片后得片率低等问题。另外，现有制备方法所采用的一些仪器不仅结构复杂而且非常昂贵，制约了组织芯片的发展。因此，现有技术还有待于改进和发展。

发明内容
鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种石蜡组织芯片制作方法，旨在解决现有技术中制备组织芯片存在工艺复杂、操作效率低、切片后得片率低等问题。本发明的技术方案如下
一种石蜡组织芯片制作方法，其中，所述组织芯片制作方法，具体包括以下步骤
51、立式打孔在底托蜡块上打定位孔，所述定位孔的直径为O.2-0. 6mm,深度为O. 8-1. 5mm,间隔为 O. 1-0. 2mm ；
52、旋转取样将供体组织蜡块加热，用取样针在所述供体蜡块上旋转取样；
53、排列冷却将取样完成的取样针按照底托蜡块上定位孔的位置按顺序排列，进行冷
却；
54、交联植芯1)准备用于间隔的被胶针丝，将被胶针丝浸入组织芯片胶，取出凉干，待备用；2)将取样针中的样本栽入所述定位孔内，然后将所述被胶针丝在所述底托蜡块的表面根据所述定位孔的位置交叉排列，并通过少许组织芯片胶粘联，所述底托上的每个定位孔之间都被所述被胶针丝隔离开；55、凉干；
56、灌蜡包埋将所述底托蜡块放入包埋盒内，浇灌液体蜡，加热，取出冷却；
57、脱针把所述底托蜡块放入脱膜剂里浸泡，抽掉所述被胶针丝。所述的石蜡组织芯片制作方法，其中，步骤S2中所述加热过程为45摄氏度加热30分钟。所述的石蜡组织芯片制作方法，其中，步骤S3中所述冷却过程为4摄氏度冷却20分钟以上。所述的石蜡组织芯片制作方法，其中，步骤S4中所述被胶针丝浸入组织芯片胶内5分钟。所述的石蜡组织芯片制作方法，其中，步骤S6中所述液体蜡为65摄氏度的蜡；所述加热过程为55摄氏度加热50分钟。所述的石蜡组织芯片制作方法，其中，步骤S7中所述底托蜡块在脱膜剂里浸泡24小时。所述的石蜡组织芯片制作方法，其中，所述组织芯片制作方法，经过步骤S7后还可包括以下步骤
58、再融合所述底托蜡块放入55摄氏度的烤箱中60-120分钟。所述的石蜡组织芯片制作方法，其中，所述定位孔的直径为O. 3_，深度为O. 8mm,间隔为O. 1mm。所述的石蜡组织芯片制作方法，其中，所述组织芯片胶是一种聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物；所述脱膜剂为无水多羟基乙醇和酒精的混合物。有益效果本发明所提供的石蜡组织芯片的制备方法，具有快速、简洁、经济适用的优点，特别针对直径O. 5mm以下的组织微芯片制作，精确而又可靠，能用于高通量的组织芯片的制作。根据本发明制备方法得到的石蜡组织芯片具有以下优点排列整齐，间隔均一；切片后得片率高；染色后细胞清晰可见，无破损；经济使用，成本低，可使组织微芯片技术更广泛推广运用。


图I为本发明中取样针的结构示意图。图2为本发明中底托蜡块的结构示意图。图3为本发明中隔离针丝纵横交叉粘联固定在底托蜡块上的结构示意图。
具体实施例方式为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。本发明针对以上存在的问题，提供一种石蜡组织芯片制作方法，是一种快速、简洁、经济适用的制作方法，特别针对直径O. 5mm以下的组织微芯片制作，精确而又可靠。所述组织芯片制作方法是一种交叉隔离、胶联固定的石蜡组织微芯片的制作方法，具体是通过打孔定位，应用针丝附胶排列隔离的方法，再经过石蜡包埋，冷却，使用脱膜剂脱针，再融合，从而获得组织微芯片。所述组织芯片制作方法，具体包括以下步骤
51、立式打孔用芯片微型钻在底托蜡块上打定位孔，所述定位孔的直径为
O.2-0. 6mm,深度为 O. 8-1. 5mm,间隔为 O. 1-0. 2mm ；
52、旋转取样将供体组织蜡块加热45摄氏度，加热时间为30分钟，用取样针在所述供体蜡块上旋转取样；
53、排列冷却将取样完成的取样针按照底托蜡块上定位孔的位置按顺序排列，放入4摄氏度冰箱20分钟以上； 54、交联植芯1)准备用于间隔的被胶针丝，将被胶针丝浸入组织芯片胶内5分钟，取出凉干，待备用；2)将取样针中的样本栽入所述定位孔内，然后将所述被胶针丝在所述底托蜡块的表面根据所述定位孔的位置交叉排列，并通过少许组织芯片胶粘联，所述底托上的每个定位孔之间都被所述被胶针丝隔离开；
55、凉干；
56、灌蜡包埋将所述底托蜡块放入包埋盒内，浇灌65摄氏度的蜡，然后移入55摄氏度的烤箱中50分钟，而后取出后冷却；
57、脱针把所述底托蜡块放入脱膜剂里浸泡24小时，而后抽掉所述被胶针丝。所述组织芯片制作方法，经过步骤S7后还可包括以下步骤
58、再融合所述底托蜡块放入55摄氏度的烤箱中60-120分钟。其中，所述组织芯片胶是一种聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物，即OCT冰冻切片包埋剂。所述脱膜剂为无水多羟基乙醇和酒精的混合物。所述步骤SI中，是在所述底托蜡块上进行打孔，所述底托蜡块即为受体蜡块，所述底托蜡块的结构如图I所示，底托蜡块201上整齐地设置有多排定位孔202，所述定位孔202分别与所述取样针的针芯所对应，所述定位孔202之间留有间隔203，在后序步骤中被胶针丝即粘联在间隔203上。所述定位孔的直径优选为O. 3mm,深度为O. 8mm,间隔为O. Imm,这样，所得到的组织蜡芯的直径则为O. 3_，能得到超微组织芯片蜡块。所述步骤S2中，所述取样过程是采用取样针取样的，所述取样针的结构如图I所示，包括取样针芯101、取样针体102、推柄103和取样针管104，所述取样针芯101设置在取样针管104的前端，用于吸取供体组织蜡块中的组织。所述步骤S4中，如图3所示，所述被胶针丝在所述底托蜡块201的表面上，根据定位孔202的位置，在所述定位孔之间的间隔位置，设置所述被胶针丝，所述被胶针丝分为横向设置的横向隔离针丝303和竖向设置的隔离针丝302，这些隔离针丝纵横交错设置在所述底托蜡块201上，平整排列，将所述定位孔隔离开来。所述被胶针丝的直径为O. 1mm。所述步骤S6中在浇灌65摄氏度的蜡之前，可以先将所述底托蜡块移入45摄氏度的烤箱30分钟，经过预热的底托蜡块能与浇灌的蜡更好地结合，使获得的石蜡组织芯片质量更好。以乳腺癌和正常组织微阵列，其中包含588例癌组织、18例正常组织和38例癌旁正常组织，癌组织每例两点，正常和癌旁组织每例一点。在所述底托蜡块上的点数一共为1232个，包括644个病例，所述底托蜡块上定位孔的排列为56列*44行，每个定位孔的直径
O.3_。经过上述方法所得得到的石蜡组织芯片排列整齐，间隔均一，切片后得片率高，所述蜡块组织芯片经过染色后细胞清晰可见，组织细胞无破损。本发明所提供的石蜡组织芯片的制备方法，具有快速、简洁、经济适用的优点，特别针对直径O. 5mm以下的组织微芯片制作，精确而又可靠，能用于高通量的组织芯片的制作。根据本发明制备方法得到的石蜡组织芯片具有以下优点排列整齐，间隔均一；切片后得片率高；染色后细胞清晰可见，无破损；经济使用，成本低，可使组织微芯片技术更广泛推广运用。应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员 来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
权利要求
1.一种石蜡组织芯片制作方法，其特征在于，所述组织芯片制作方法，具体包括以下步骤 51、立式打孔在底托蜡块上打定位孔，所述定位孔的直径为0.2-0. 6mm,深度为 0.8-1. 5mm,间隔为 0. 1-0. 2mm ； 52、旋转取样将供体组织蜡块加热，用取样针在所述供体蜡块上旋转取样； 53、排列冷却将取样完成的取样针按照底托蜡块上定位孔的位置按顺序排列，进行冷却； 54、交联植芯1)准备用于间隔的被胶针丝，将被胶针丝浸入组织芯片胶，取出凉干，待备用；2)将取样针中的样本栽入所述定位孔内，然后将所述被胶针丝在所述底托蜡块的表面根据所述定位孔的位置交叉排列，并通过少许组织芯片胶粘联，所述底托上的每个定位孔之间都被所述被胶针丝隔离开； 55、凉干； 56、灌蜡包埋将所述底托蜡块放入包埋盒内，浇灌液体蜡，加热，取出冷却； 57、脱针把所述底托蜡块放入脱膜剂里浸泡，抽掉所述被胶针丝。
2.根据权利要求I所述的石蜡组织芯片制作方法，其特征在于，步骤S2中所述加热过程为45摄氏度加热30分钟。
3.根据权利要求I所述的石蜡组织芯片制作方法，其特征在于，步骤S3中所述冷却过程为4摄氏度冷却20分钟以上。
4.根据权利要求I所述的石蜡组织芯片制作方法，其特征在于，步骤S4中所述被胶针丝浸入组织芯片胶内5分钟。
5.根据权利要求I所述的石蜡组织芯片制作方法，其特征在于，步骤S6中所述液体蜡为65摄氏度的蜡；所述加热过程为55摄氏度加热50分钟。
6.根据权利要求I所述的石蜡组织芯片制作方法，其特征在于，步骤S7中所述底托蜡块在脱膜剂里浸泡24小时。
7.根据权利要求I所述的石蜡组织芯片制作方法，其特征在于，所述组织芯片制作方法，经过步骤S7后还可包括以下步骤 58、再融合所述底托蜡块放入55摄氏度的烤箱中60-120分钟。
8.根据权利要求I所述的石蜡组织芯片制作方法，其特征在于，所述定位孔的直径为0.3mm,深度为0. 8mm,间隔为0. 1mm。
9.根据权利要求I所述的石蜡组织芯片制作方法，其特征在于，所述组织芯片胶是一种聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物；所述脱膜剂为无水多羟基乙醇和酒精的混合物。
全文摘要
本发明公开了一种石蜡组织芯片制作方法，是一种快速、简洁、经济适用的制作方法，特别针对直径0.5mm以下的组织微芯片制作，精确而又可靠。具体是通过打孔定位，应用针丝附胶排列隔离的方法，再经过石蜡包埋，冷却，使用脱膜剂脱针，再融合，从而获得组织微芯片。根据本发明制备方法得到的石蜡组织芯片具有以下优点排列整齐，间隔均一；切片后得片率高；染色后细胞清晰可见，无破损；经济使用，成本低，可使组织微芯片技术更广泛推广运用。
文档编号G01N1/36GK102798562SQ201210272928
公开日2012年11月28日 申请日期2012年8月2日 优先权日2012年8月2日
发明者王虎 申请人:王虎