专利名称：一种测定人血浆中洛伐他汀和羟基洛伐他汀酸的浓度的方法
技术领域：
本发明涉及一种测定人血浆中洛伐他汀和羟基洛伐他汀酸的浓度的方法，特别涉及一种液相色谱-质谱法(LC/MS/MS法)，用于测定含甲酸乙二胺四乙酸抗凝血浆(ETDA-K2 人血浆)中洛伐他汀和羟基洛伐他汀酸的浓度的方法。
背景技术：
目前测定血浆中洛伐他汀和洛伐他汀酸的方法主要有HPLC/GC/MS、HPLC/MS、 HPLC/MS/MS、RP-HPLC以及固相萃取法等等。HPLC/GC/MS和HPLC/MS法测定需要的血浆用量较大，而且最低检测浓度高(一般为0. 36-2. 5 μ g/L)。HPLC/MS/MS法的预处理方法为离心后取上层液直接进样，血浆中的杂质易保留在色谱柱上，引起柱压升高，寿命缩短，最低检测浓度亦较高，一般为0. 97 μ g/L。RP-HPLC法样品处理复杂、测定速度慢，不能满足实际检测的需要。固萃取法步骤多，成本高，最低检测浓度一般为0. 5 μ g/L，不利于大量样品的测定。本法采用LC/MS/MS法测定含甲酸乙二胺四乙酸抗凝血浆(ETDA-K2人血浆)中洛伐他汀和羟基洛伐他汀酸浓度的方法尚未见文献报道，本法具有血浆用量少、稳定性好、最低检测浓度小等优点，且对于长期储存的样品是稳定的，因此可以用于大量血浆样品的检测。

发明内容
本发明的目的在于公开一种测定ETDA-K2人血浆中洛伐他汀和羟基洛伐他汀酸的浓度的方法。本发明是通过如下方案实现的本发明浓度测定方法包括如下步骤A.配备溶液(1)空白介质的配制配制pH 4士0. 1的空白K2ETDA人血浆移取166.7yL 96%甲酸至50mL空白ETDA-K2 (乙二胺四乙酸二钾)人血浆，并充分混合；(2)洗针液的配制甲醇水=50 50移取500mL水和500mL甲醇至容器中；充分混合，室温存放；(3)0. 甲酸溶液(用甲醇配制)的配制移取100 μ L的甲酸和IOOml甲醇至试剂瓶中；充分混合，室温存放；(4)流动相A 0. 5%甲酸水溶液的配制移取IOOOmL水和5mL甲酸至试剂瓶中；充分混合，超声5min，室温存放；(5)流动相B 0. 5%甲酸甲醇溶液的配制移取IOOOmL甲醇和5mL甲酸至试剂瓶中；充分混合，超声5min，室温存放；(6)0. 5%甲酸的甲醇/水(50 50)溶液的配制移取500mL甲醇，500mL水和5mL甲酸至试剂瓶，充分混合，超声5min，室温存放；
(7)标准储备液的配制洛伐他汀标准储备液精确称取5mg洛伐他汀至5mL容量瓶中，用0. 1 %甲酸溶液溶解并稀释至刻度，充分混合，即得浓度为lmg/ml的洛伐他汀标准储备液，于-20°C储存；羟基洛伐他汀酸标准储备液精确称取5mg羟基洛伐他汀酸钠至5mL容量瓶中， 用0. 甲酸溶液溶解并稀释至刻度，充分混合，即得浓度为lmg/ml的羟基洛伐他汀酸标准储备液，于-20°C储存；标准储备液1 移取0. ImL洛伐他汀标准储备液和0. ImL羟基洛伐他汀酸标准储备液至IOmL容量瓶中，用0. 甲酸甲醇溶液稀释至刻度，即得浓度为10μ g/ml的洛伐他汀和10μ g/ml的羟基洛伐他汀酸的混合标准储备液，充分混合，得标准储备液1，于-20°C 储存；(8)标准曲线用标准工作溶液的配制标准曲线用标准工作溶液用0. 甲酸甲醇溶液稀释标准储备液1配制，如表1 所示；充分混合并于-20°C储存；表1标准曲线用标准工作溶液的配制
权利要求
1. 一种测定人血浆中洛伐他汀和羟基洛伐他汀酸的浓度的方法，其特征在于该方法包括如下步骤 A.配备溶液(1)空白介质的配制配制PH4士0. 1的空白K2ETDA人血浆移取166. 7μ L 96%甲酸至50mL空白K2ETDA(乙二胺四乙酸二钾)人血浆，并充分混合；(2)洗针液的配制甲醇水=50 50移取500mL水和500mL甲醇至容器中；充分混合，室温存放；(3)0.甲酸溶液(用甲醇配制)的配制移取100 μ L的甲酸和IOOml甲醇至试剂瓶中；充分混合，室温存放；(4)流动相A0. 5%甲酸水溶液的配制移取IOOOmL水和5mL甲酸至试剂瓶中；充分混合，超声5min，室温存放；(5)流动相B0. 5%甲酸甲醇溶液的配制移取IOOOmL甲醇和5mL甲酸至试剂瓶中；充分混合，超声5min，室温存放；(6)0.5%甲酸的甲醇/水(50 50)溶液的配制移取500mL甲醇，500mL水和5mL甲酸至试剂瓶，充分混合，超声5min，室温存放；(7)标准储备液的配制洛伐他汀标准储备液精确称取5mg洛伐他汀至5mL容量瓶中，用0. 1 %甲酸溶液溶解并稀释至刻度，充分混合，即得浓度为lmg/ml的洛伐他汀标准储备液，于_20°C储存；羟基洛伐他汀酸标准储备液精确称取5mg羟基洛伐他汀酸钠至5mL容量瓶中，用 0. 甲酸溶液溶解并稀释至刻度，充分混合，即得浓度为lmg/ml的羟基洛伐他汀酸标准储备液，于_20°C储存；标准储备液1 移取0. ImL洛伐他汀标准储备液和0. ImL羟基洛伐他汀酸标准储备液至IOmL容量瓶中，用0. 甲酸甲醇溶液稀释至刻度，即得浓度为10 μ g/ml的洛伐他汀和 10yg/ml的羟基洛伐他汀酸的混合标准储备液，充分混合，得标准储备液1，于-20°C储存；(8)标准曲线用标准工作溶液的配制标准曲线用标准工作溶液用0. 甲酸甲醇溶液稀释标准储备液1配制，如表1所示；充分混合并于-20°C储存；表1标准曲线用标准工作溶液的配制
全文摘要
本发明公开了一种采用LC/MS/MS法测定K2ETDA人血浆(含甲酸)中洛伐他汀和羟基洛伐他汀酸的浓度的方法。经过实验，结果表明本发明浓度测定方法适用于浓度在0.5-48ng/mL范围内的洛伐他汀和羟基洛伐他汀酸的测定。
文档编号G01N30/72GK102384954SQ201010270529
公开日2012年3月21日 申请日期2010年9月1日 优先权日2010年9月1日
发明者段震文, 郭树仁 申请人:北京北大维信生物科技有限公司