专利名称：首乌丹参滴丸中天然冰片含量测定方法
技术领域：
本发明涉及一种中药首乌丹参滴丸产品中天然冰片的含量测定方法。
背景技术：
首乌丹参滴丸是天士力公司开发的中药制剂，处方由丹参2 40份、三七1 30份、制首乌2 40份、女贞子1 20份、天然冰片0. 05 0. 8份、适量成型辅料和包衣材料等组成。具有活血止痛，滋补肝肾之功效。主治肝肾阴虚型冠心病、心绞痛，症见胸脘痞闷，心前剧痛，伴头昏目涩、腰膝酸软、心烦失眠，舌暗红，脉沉或细数。适用于稳定型心绞痛而有上述症状者。 方中天然冰片又名龙脑，味辛苦，性微寒，归心、脾、肺经，其味辛散，具有开窍醒神、消肿止痛功效。 现有首乌丹参滴丸制剂存在质量控制方法落后，产品质量不易控制的缺点。现有质量控制方法中并没有对其冰片成分进行含量测定的内容。故现有质量控制方法不能有效控制产品的质量，从而将影响产品的生产和保证质量。 为有效控制产品质量，我们建立了首乌丹参滴丸新的质量控制方法，我们采用气相色谱法对首乌丹参滴丸中天然冰片进行了定量分析。为首乌丹参滴丸质量控制方法提供了依据。该质量控制方法精密度、灵敏度、稳定性均好，确保产品质量的"安全、均一、稳定、有效、可控"。

发明内容
本发明提供一种新的首乌丹参滴丸的质量控制方法。 本发明方法包括对首乌丹参滴丸中的冰片成分进行含量测定的步骤。 其中对冰片成分进行含量测定采用气相色谱法。 本发明方法包括将天然冰片对照品，首乌丹参滴丸供试品，不含冰片的首乌丹参滴丸供试品分别通过气相色谱仪，按公式计算首乌丹参滴丸供试品中冰片的含量。
所用仪器为气相色谱仪，色谱条件为色谱柱HP-INNOWAX柱(30mX0. 32mmX0. 5iim);载气氮气；柱流量:lmL/min ;进样口温度220。C ;检测器温度:240°C ;分流比10 : 1 ;程序升温从140°C，以8°C /min升至180。C，保持3min ;进样量1 P l，理论塔板数按右旋龙脑峰计算应不低于1900。 所用药剂为天然冰片对照品；水杨酸甲酯；色谱纯乙酸乙酯；首乌丹参滴丸；不含冰片的首乌丹参滴丸阴性供试品(天然冰片阴性滴丸)。其中优选的仪器为美国Agilent6890气相色谱仪，7683系列自动进样器，FID检测器；HS6150D超声波清洗仪。
测定方法 —、内标溶液和对照品溶液的制备 内标溶液的制备取水杨酸甲酯适量，加乙酸乙酯制成每lmL含lmg的溶液，作为
4内标溶液。 对照品溶液的制备取冰片对照品20. 0mg，精密称定，置10mL量瓶中，加乙酸乙酯 溶解至刻度，精密量取1.5mL至10mL量瓶中，精密加入内标溶液3mL溶解并用乙酸乙酯稀 释至刻度，摇匀，作为冰片对照品溶液。
二、检测品溶液制备 供试品溶液的制备取首乌丹参滴丸供试品0. 5g，压口，精密称定，置10mL量瓶 中，精密加入内标3mL溶液和乙酸乙酯6mL，超声处理10分钟，放冷，用乙酸乙酯稀释至刻 度，摇匀，滤过，即得。 阴性供试品溶液制备取不含冰片的首乌丹参滴丸阴性供试品0.5g，压口，精密 称定，置10mL量瓶中，加入乙酸乙酯9mL，超声处理10分钟，放冷，用乙酸乙酯稀释至刻度， 摇匀，滤过，即得。
三、测定 分别吸取以上内标溶液，对照品溶液，供试品溶液和阴性供试品溶液各1 iU，注入 气相色谱仪， 得到内标溶液色谱图，对照品溶液色谱图，供试品溶液色谱图，阴性供试品溶液色 谱图，测量阴性供试品溶液的峰面积，对照品溶液中冰片的峰面积，供试品溶液中冰片的峰 面积。
四、计算按下述公式计算供试品中冰片含量。 冰片含量(mg/g) = (NX A/A样内X C标)/ (A标/A标内XM) 其中A为供试品中冰片的峰面积； A^a为供试品的内标物的阴性供试品溶液的峰面积 A^为标准溶液中冰片的峰面积； A标内为标准品的内标物的峰面积； C标为标准溶液的浓度(mg/ml); M为供试品称样量(g); N为供试品稀释体积(N = 10ml)。 为验证本发明方法的"安全、均一、稳定、有效、可控"。进行了以下实验 —、干扰试验分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液各1 P l，注入气色
谱仪，进行测定。将阴性供试品色谱图与对照品色谱图和供试品色谱图进行比较，阴性供试
品在天然冰片对照品出峰的时间范围内未见任何杂峰，各色谱峰分离良好。 证明，所建GC检测丹参滴丸中天然冰片含量的方法可排除干扰，该方法可靠、准
确，可信度高。 二、线性试验分别精密量取浓度为2. 07mg/ml天然冰片对照品溶液0. 25mL， 0. 50mL， 1. OOmL， 1. 50mL， 2. OOmL， 2. 50mL于10mL容量瓶中，加入3mL内标溶液，用乙酸乙酉旨 定容，摇匀，分别吸取各对照品溶液1. Oii L注入气相色谱仪分析，记录峰面积。以量取天然 冰片的体积为横坐标，以天然冰片峰面积与内标峰面积之比为纵坐标，绘制标准曲线，供试 品溶液中天然冰片含量在O. 05175mg/ml 0. 5175mg/ml范围内呈良好线性关系，标准曲线 为y = 1. 0204x-0. 0082，相关系数R2为0. 9999。 三、精密度试验取同一对照品及内标物的混合溶液，重复进样6次，每次进样1 Pi 。计算对照品与内标物的峰面积比值，RSD为0. 048 % 。 四、稳定性试验取同一供试品溶液(批号20080201)及内标物的混合溶液，在 室温下，分别在0h， 2h， 4h， 6h， 8h， 10h进样，计算天然冰片与内标物峰面积的比值，RSD为 0. 031%，表明供试品在10h内稳定。 五、重复性试验取同一批号(批号20080201)供试品6份，按供试品溶液的制备 方法进行制备，并测定冰片含量，测得供试品中冰片含量为5. 23mg/g， RSD为1. 51%，试验 结果表明该方法重复性良好，即方法精密度良好。 六、回收率试验取同一批号(批号20080201)供试品6份，每份约0. 25g，压口 ，精 密称定，分别加入对照品适量，再按供试品溶液的制备方法进行测定，计算回收率。该法回 收率为101. 6%， RSD为2. 0%，试验结果表明该方法回收率良好。 七、供试品含量测定取20080201、20080202和20080203批首乌丹参滴丸，按上述 方法进行天然冰片的含量测定并计算，其含量分别为5. 22% 、5. 10 %和5. 19%。
本发明的一些处理方法是经过筛选得到的， 如供试品处理方法本品为包衣滴丸，压口后的供试品超声提取10min，滴丸溶 散，滴丸的包衣层亦溶散；而不压口的供试品经超声提取10min后，滴丸溶散，但包衣层存 在，不能保证待测成分释放完全，影响含量测定结果，故选用压口 。 提取方法的选择(1)供试品加乙酸乙酯超声处理10min ; (2)供试品加乙酸乙酯 溶解。方法(1)较方法(2)操作简便快速，有效减小待测成分的挥发损失，故选定(1)为本 试验的提取方法。 测定方法的选择乙酸乙酯的挥发性很强，当全部采用内标液对供试品进行提取 和稀释定容，由于乙酸乙酯的挥发，内标溶液的加入体积增加，内标物质的加入量可能会大 于实际的加入量，造成内标物质响应增大，含量测定结果偏低。本发明采用内标法对首乌丹 参滴丸中天然冰片的含量进行测定，并依据内标物质的响应情况，确定适宜的内标物质加 入量，再以乙酸乙酯进行稀释定容，使得内标物质和待测成分的响应值更加接近，减小内标 物质用量，而且减小了由于乙酸乙酯挥发引入的误差，因此本方法具有可行性。
具体实施例方式
实施例1 : 将天然冰片对照品，首乌丹参滴丸供试品，不含冰片的首乌丹参滴丸供试品分别 通过气相色谱仪，按公式计算首乌丹参滴丸供试品中冰片的含量。 所用仪器为美国Agilent6890气相色谱仪，7683系列自动进样器，FID检测器； HS6150D超声波清洗仪。色谱条件为色谱柱HP-INNOWAX柱(30mX0. 32mmX0. 5iim);载气氮气；柱流
量:lmL/min ;进样口温度:220。C;检测器温度:240。C;分流比10 : 1 ;程序升温从140°C，
以8°C /min升至18(TC，保持3min ;进样量1 y 1，理论塔板数按右旋龙脑峰计算应不低于 1900。
所用药剂为天然冰片对照品；水杨酸甲酯；色谱纯乙酸乙酯；首乌丹参滴丸；不 含天然冰片的首乌丹参滴丸阴性供试品(天然冰片阴性滴丸)。
测定方法
—、内标溶液和对照品溶液的制备 内标溶液的制备取水杨酸甲酯适量，加乙酸乙酯制成每lmL含lmg的溶液，作为 内标溶液。 对照品溶液的制备取冰片对照品20. 0mg，精密称定，置lOmL量瓶中，加乙酸乙酯 溶解至刻度，精密量取1.5mL至10mL量瓶中，精密加入内标溶液3mL溶解并用乙酸乙酯稀 释至刻度，摇匀，作为冰片对照品溶液。
二、检测品溶液制备 供试品溶液的制备取首乌丹参滴丸供试品0. 5g，压口，精密称定，置10mL量瓶 中，精密加入内标3mL溶液和乙酸乙酯6mL，超声处理10分钟，放冷，用乙酸乙酯稀释至刻 度，摇匀，滤过，即得。 阴性供试品溶液制备取不含冰片的首乌丹参滴丸阴性供试品0. 5g，压口，精密 称定，置10mL量瓶中，加乙酸乙酯9mL，超声处理10分钟，放冷，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇 匀，滤过，即得。
三、测定 分别吸取以上内标溶液，对照品溶液，供试品溶液和阴性供试品溶液各1 iU，注入 气相色谱仪， 得到内标溶液色谱图，对照品溶液色谱图，供试品溶液色谱图，阴性供试品溶液色
谱图，测量阴性供试品溶液所对应的峰面积为都为O，对照品溶液中天然冰片的峰面积为
427. 2，内标物水杨酸甲酯的峰面积为283. 2，供试品溶液中天然冰片的峰面积为385. 1，内
标物水杨酸甲酯的峰面积为293. 0。 四、计算按下述公式计算供试品中冰片含量。 冰片含量(mg/g) = (NXA/A样内XC标)/(A标/A标内XM) = (10 X 20/10 X 1. 5/10 X 385. 1/293. 0) / (0. 500 X 427. 2/283. 2) = 5. 23mg/g 其中A为供试品中冰片的峰面积385. 1 ; A^a为供试品的内标物的阴性供试品溶液的峰面积293. 0 ; A^为标准溶液中冰片的峰面积427. 2 ; A标内为标准品的内标物的峰面积283. 2 C标为标准溶液的浓度20/10X 1. 5/10 ; M为供试品称样量0. 500 ; N供试品为稀释体积10ml 。
权利要求
一种首乌丹参滴丸的质量控制方法，包括对首乌丹参滴丸中的冰片成分采用气相色谱法进行含量测定的步骤，其特征在于，样品在检测前经过提取，在提取前经过压口处理。
2. 权利要求l的质量控制方法，其特征在于，样品在检测前压口后加乙酸乙酯经超声提取5 15min。
3. 权利要求2的质量控制方法，其特征在于，样品在检测前压口后经超声提取10min。
4. 权利要求3的质量控制方法，其特征在于，所述对首乌丹参滴丸中的冰片成分进行含量测定的步骤包括将天然冰片对照品，首乌丹参滴丸供试品，不含冰片的首乌丹参滴丸阴性供试品分别通过气相色谱仪，按公式计算首乌丹参滴丸供试品中冰片的含量。
5. 权利要求4的质量控制方法，其特征在于，所述对首乌丹参滴丸中的冰片成分进行含量测定的方法如下一、 内标溶液和对照品溶液的制备内标溶液的制备取水杨酸甲酯适量，加乙酸乙酯制成每lmL含lmg的溶液，作为内标溶液；对照品溶液的制备取冰片对照品20. 0mg，精密称定，置10mL量瓶中，加乙酸乙酯溶解至刻度，精密量取1.5mL至10mL量瓶中，精密加入内标溶液3mL溶解并用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，作为冰片对照品溶液，二、 检测品溶液制备供试品溶液的制备取首乌丹参滴丸供试品0. 5g，压口，精密称定，置10mL量瓶中，精密加入内标3mL溶液和乙酸乙酯6mL，超声处理10分钟，放冷，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；阴性供试品溶液制备取不含冰片的首乌丹参滴丸阴性供试品0. 5g，压口，精密称定，置10mL量瓶中，加乙酸乙酯9mL，超声处理10分钟，放冷，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，滤过，即得，分别吸取以上内标溶液，对照品溶液，供试品溶液和阴性供试品溶液各1P1，注入气相色谱仪，得到内标溶液色谱图，对照品溶液色谱图，供试品溶液色谱图，阴性供试品溶液色谱图，测量阴性供试品溶液的峰面积，对照品溶液中冰片的峰面积，供试品溶液中冰片的峰面积。按公式计算供试品中冰片含量。
6. 权利要求5的质量控制方法，其特征在于，所述对首乌丹参滴丸中的冰片成分进行含量测定的公式如下冰片含量(mg/g) = (NXA/A样内XC标)/(A标/A标内XM)其中A为供试品中冰片的峰面积；A^rt为供试品的内标物的阴性供试品溶液的峰面积Ag为标准溶液中冰片的峰面积；A，^为标准品的内标物的峰面积；C标为标准溶液的浓度(mg/ml);M为供试品称样量(g);N为供试品稀释体积(N = 10ml)。
7.权利要求6的质量控制方法，其特征在于，所述对首乌丹参滴丸中的冰片成分进行含量测定的方法如下测定方法一、 内标溶液和对照品溶液的制备内标溶液的制备取水杨酸甲酯适量，加乙酸乙酯制成每lmL含lmg的溶液，作为内标溶液；对照品溶液的制备取冰片对照品20. 0mg，精密称定，置10mL量瓶中，加乙酸乙酯溶解至刻度，精密量取1.5mL至10mL量瓶中，精密加入内标溶液3mL溶解并用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，作为冰片对照品溶液；二、 检测品溶液制备供试品溶液的制备取首乌丹参滴丸供试品0. 5g，压口，精密称定，置10mL量瓶中，精密加入内标3mL溶液和乙酸乙酯6mL，超声处理10分钟，放冷，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；阴性供试品溶液制备取不含冰片的首乌丹参滴丸阴性供试品0. 5g，压口，精密称定，置10mL量瓶中，加乙酸乙酯9mL，超声处理10分钟，放冷，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；分别吸取以上内标溶液，对照品溶液，供试品溶液和阴性供试品溶液各lPl，注入气相色谱仪，得到内标溶液色谱图，对照品溶液色谱图，供试品溶液色谱图，阴性供试品溶液色谱图，测量阴性供试品溶液的峰面积，对照品溶液中冰片的峰面积，供试品溶液中冰片的峰面积；四、计算按下述公式计算供试品中冰片含量；冰片含量(mg/g) = (NXA/A样内XC标)/(A标/A标内XM)其中A为供试品中冰片的峰面积；A^rt为供试品的内标物的阴性供试品溶液的峰面积Ag为标准溶液中冰片的峰面积；A，^为标准品的内标物的峰面积；C标为标准溶液的浓度(mg/ml);M为供试品称样量(g);N为供试品稀释体积(N = 10ml);其中，所用仪器为美国Agilent6890气相色谱仪；色谱条件为色谱柱HP-INNOWAX柱(30mX0. 32mmX0. 5iim);载气氮气；柱流量:lmL/min ;进样口温度220。C ;检测器温度:`240°C ;分流比10 : 1 ;程序升温从140°C，以8°C /min升至180。C，保持3min ;进样量`1 P l，理论塔板数按右旋龙脑峰计算应不低于1900 ;所用药剂为天然冰片对照品；水杨酸甲酯；色谱纯乙酸乙酯；首乌丹参滴丸；不含冰片的首乌丹参滴丸阴性供试品。
全文摘要
本发明提供一种新的首乌丹参滴丸的质量控制方法，本发明方法包括对首乌丹参滴丸中的冰片成分进行含量测定的步骤。
文档编号G01N30/86GK101744891SQ200810153629
公开日2010年6月23日 申请日期2008年11月28日 优先权日2008年11月28日
发明者周水平, 李莉, 韩建平, 马洁 申请人:天津天士力制药股份有限公司